СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛКОГОЛИЗМА Российский патент 1997 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к наркологии.

Целью изобретения является повышение точности диагностики, в том числе, на начальной стадии алкоголизма, снятие временных ограничений ее проведения вне зависимости от сроков употребления алкоголя.

Указанная цель достигается тем, что при определении тромбоцитолитического действия сыворотки крови больного в качестве гаптена используют тетрагидроизохинолин в дозе 0,5•10^-4 ммоля.

Способ осуществляют следующим образом.

К 0,15 мл сыворотки больного, цельной и в серийной разведениях, добавляют 0,15 мл тромбоцитарной массы, полученной из донорской крови 0 группы, 0,05 мл комплемента морской свинки в разведении 1 30 и 0,05 мл 0,04-ного водного раствора 1,2,3,4-тетрагидро-1-метил-6,7-изохинолиндиола (ТИХ). После тщательного перемешивания отбирают 16 мкл смеси для подсчета исходного количества тромбоцитов. Оставшуюся смесь инкубируют в закрытых сосудах при 37 ^oC в течение 1 ч, после чего вновь отбирают 16 мкл смеси для постинкубационного подсчета количества тромбоцитов. Результат считают положительным, если количество тромбоцитов после инкубации в опытных пробах уменьшается не менее, чем на 20 25 от исходного, при неизменном количестве тромбоцитов в контрольных пробах. Каждое исследование включает 3 контрольные пробы, в которых сыворотку больного заменяют сывороткой здорового человека (1-я контрольная проба), либо исключают из инкубационной среды комплемент (2-я контрольная проба) или ТИХ (3-я контрольная проба).

Пример 1. Больной К. 1962 г. р. История болезни N 27182. Диагноз при поступлении: циклотимия, с возможным осложнением алкоголизмом. В психиатрический стационар поступил впервые. В отделении вял, заторможен, настроение подавленное, в то же время неусидчив, тревожен. Соматических и неврологических нарушений не выявлено. Интеллект и память нормальны. С 1986 г. эпизодически, с большими перерывами до 20 30 дней употребляет крепкие спиртные напитки. Алкогольный абстинентный синдром выражен слабо, непродолжителен. Больному 19.02.90 (на 35-й день воздержания от алкоголя) проведено диагностическое исследование. Взят 1 мл крови больного, получена сыворотка, приготовлены серийные разведения от 1 2 до 1 128. К сыворотке, цельной и в серийных разведениях, добавлены тромбоцитарная масса из донорской крови 0 группы, комплемент морской свинки и ТИХ в соотношении 3 3 1 1 соответственно. Во всех пробах из полученной смеси отобрано по 16 мкл для подсчета исходного количества тромбоцитов. Подсчет осуществлен на электронном счетчике микрочастиц "Пикоскель PS-4" (Медикор, Будапешт). После 1-ч инкубации при 37 ^oC произведен повторный отбор проб по 16 мкл для постинкубационного подсчета тромбоцитов. Общее время исследования 1 ч 40 мин. Результаты анализа отражены в табл. 1.

На основании уменьшения количества тромбоцитов в опытных пробах, начиная с цельной сыворотки и до разведения 1:4, на 20 29 после инкубации по сравнению с имевшим место до инкубации, при неизменном количестве тромбоцитов в контрольных пробах (колебания в пределах ошибки опыта) сделан вывод о наличии у больного алкоголизма, что подтверждено и соответствующей клинической картиной заболевания. Уточненный диагноз, поставленный при выписке больного: алкоголизм I стадии с развитием на его фоне астено-невротических расстройств. Таким образом, предлагаемый способ позволил диагностировать начальную стадию алкоголизма после 35 дней воздержания от алкоголя.

Пример 2. Больной Г. 1967 г. р. История болезни N 27367. Поступил с жалобами на эпилептические припадки полиморфного типа. Приступы иногда приурочены к похмельному состоянию после употребления спиртного. Выпивать начал с 16 лет. Употребляет спиртные напитки эпизодически, с перерывами по 2 - 3 недели. Имеется наследственная отягощенность алкоголизмом со стороны отца. Предварительный диагноз: эпилепсия алкогольного генеза. 26.03.90 больному было проведено диагностическое исследование (на 15-й день воздержания от алкоголя). Результаты приведены в табл. 2. На основании отсутствия тромбоцитолитического действия сыворотки больного (все колебания числа тромбоцитов лежат в пределах ошибки опыта) сделан вывод от отсутствии у больного алкоголизма. При дальнейшем исследовании у больного был обнаружен воспалительный процесс в субарахноидальной области. Окончательный диагноз: эпилепсия инфекционного генеза.

Пример 3. В эксперименте на белых беспородных крысах, получавших 15-й раствор этанола вместо питьевой воды, проведено исследование тромбоцитолитического ТИХ-зависимого действия сыворотки крови у самца возрастом 3 мес с длительностью алкоголизации 19 дней. Из сыворотки крови опытной крысы были приготовлены серийные разведения от 1 2 до 1 8392¹. В качестве мишени тромбоцитолитического действия сыворотки использовали тромбоциты, выделенные из крови интактной, неалкоголизированной крысы того же возраста. Результаты исследования приведены в табл. 3.

Как видно из табл. 3, сыворотка крысы, находившейся на принудительной алкоголизации 19 дней, обнаружила отчетливое ТИХ-зависимое тромбоцитолитическое действие в высоком титре, вплоть до разведения 1 1024, на основании чего было сделано заключение о формировании у крысы экспериментального алкоголизма. Это заключение было подтверждено последующим ферментативным исследованием печени и мозга крысы на аутопсийном материале по активации этанол-метаболизирующих энзимов: алкогольдегидрогеназы, микросомальной этанол-окисляющей системы и альдегиддегидрогеназы, характерной для начальной стадии алкоголизма. Таким образом, предлагаемый способ позволил провести прижизненную диагностику начальной стадии экспериментального алкоголизма.

Предлагаемый способ диагностики алкоголизма применен 12 здоровым донорам, 34 больным алкоголизмом, 21 больному эпилепсией, 19 больным шизофренией, циклотимией и маниакально-депрессивным психозом, не осложненными алкоголизмом.

Дополнительное подтверждение более высокой чувствительности предлагаемого способа диагностики алкоголизма в применении к различным стадиям алкоголизма было получено в эксперименте на 146 крысах с различными сроками экспериментального алкоголизма. Результаты представлены в табл. 4.

Из табл. 4 видно, что ТИХ-специфичное тромбоцитолитическое действие сывороток крыс наблюдается уже на ранних стадиях алкоголизации (от двух нед до двух мес), соответствующих начальным стадиям клинического алкоголизма, тогда как способ-прототип проявляет в эти сроки достоверно более низкую чувствительность (p<0,5) 05). В частности, в сроки алкоголизации от 2-х нед до 1 мес частота положительных реакций в способе-прототипе практически не отличается от контрольной группы интактных крыс (p>0,1). Более высокая частота положительных реакций, выявляемых предлагаемым способом в сравнении со способом-прототипом, сохраняется и в более поздние стадии экспериментального алкоголизма (3 12 месяцы), хотя в эти сроки разница в чувствительности несколько снижается.

Таким образом, предлагаемый способ имеет преимущества, заключающиеся в повышении точности диагностики алкоголизма, возможности диагностики начальной стадии данного заболевания, отсутствии временных ограничений при ее проведении вне зависимости от сроков предшествующей алкоголизации.

Изобретение относится к медицине, а именно к наркологии. С целью повышения точности диагностики, в том числе, и начальной стадии алкоголизма, снятия временных ограничений ее проведения и необходимости предшествующей алкоголизации исследуют тромбоцитолизирующее действие сыворотки крови больного в присутствии комплемента и тетрагидроизохинолина в дозе 0,5•10^-4 ммоля в качестве гаптена. 4 табл.

Способ диагностики алкоголизма, включающий исследование крови пациента, отличающийся тем, что получают сыворотку крови, добавляют к ней тромбоциты донорской крови, комплемент и 0,5 • 10^- 4 ммоля тетрагидроизохинолина в качестве гаптена, подсчитывают количество тромбоцитов и при уменьшении его не менее, чем на 20 25% от исходного уровня диагностируют алкоголизм.