СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ ПЛОДА Российский патент 1997 года по МПК G01N33/53 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно, к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для оценки состояния и диагностики задержки внутриутробного развития плода /ЗВРП/. Предлагаемый способ позволяет выявить задержку внутриутробного развития плода в сроки с 5 до 20 недель гестации по иммунологическим показателям материнской крови.

Актуальность разработки заявляемого способа определяется высокой частотой ЗВРП (17 18%), отсутствием высокоэффективных способов ранней диагностики ЗВРП, определяющим значением характера роста и состояния плода в перинатальной заболеваемости и смертности.

Известен способ диагностики ЗВРП во время беременности путем ультразвуковой фотометрии. Данный способ используется, начиная с 20 недель беременности. При несоответствии бипариетального размера головки, диаметра груди и живота показателям перцентиля при физиологическом развитии плода диагносцируется ЗВРП. Однако он имеет ряд существенных недостатков:
диагносцируются уже сформировавшиеся изменения в сроки беременности после 20 недель;
требуется применение дорогостоящего аппарата для ультразвукового исследования;
оценка диагностических параметров в значительной степени зависит от уровня подготовки врача-специалиста;
способ обладает точностью 40% чувствительностью 51% специфичностью - 83%
Наиболее близким по техническому решению является способ оценки состояния плода по определению АТФ (аденозинтрифосфата) в крови беременных по методу Bucher Th. с 20 недель беременности. Нарушение энергетического обмена у плода диагносцируется при концентрации АТФ в крови матери ниже 276 мкмоль/л. Точность способа по данным автором (авт. св. N 1454394) составляет 92%
Недостатками способа-прототипа являются:
отсутствие возможности прогнозирования ЗВРП в ранние (от 20 недель) сроки гестации;
исследуемый показатель претерпевает значительные изменения в зависимости от характера течения беременности, а также при некоторой соматической патологии;
исследование требует применения дорогостоящего оборудования и реактивов.

Цель заявляемого способа ранняя (с 5 до 20 недель) диагностика задержки внутриутробного развития плода путем изучения некоторых иммунологических показателей венозной крови матери.

Указанная цель достигается следующим образом. В периферической венозной крови женщины, начиная с 5 недель гестации, определяется абсолютное содержание B-лимфоцитов (Ba) и относительное содержание нейтрофилов, имеющих рецепторы к C3 компоненту комплемента (ЕАС-РОН) и при показателях Ba, больших или равных 0,30•10⁹ мкг/л и ЕАС-РОН, больших или равных 16% состояние плода оценивается как несоответствующее физиологическому развитию и диагносцируется ЗВРП. Точность способа 80,41%
Способ осуществляется следующим образом. Периферическую венозную кровь из локтевой вены забирают в гепаринизированную пробирку в количестве 3 мл с добавлением гепарина из расчета 25 единиц на 1 мл крови, добавляют равный объем (3 мл) Среды 199. В пробирку подслаивают на дно поочередно по 2 мл фиколл-верографина с градиентами плотности 1,078 и 1,114. Клетки крови разделяются методом скоростного центрифугирования при 200 g в течение 45 мин. После центрифугирования на границе раздела Среда 199 фиколл-верографин (d 1,078) собирают взвесь лимфоцитов, в интерфазе фиколл-верографин (d 1,078) фиколл-верографин (d 1,114) нейтрофилов. Клеточные суспензии отмывают Средой 199 10 мин центрифугированием при 200 g и доводят концентрацию клеток до 2•10⁶/мл. Постановка реакции по определению B-лимфоцитов осуществляется по методу Jondal e.a. по выявлению нейтрофилов с рецепторами к C3 компоненту комплемента (ЕАС-РОН) по методу Дзержинской И.И. и др. Подсчет результатов осуществляется при световом микроскопировании.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что авторами впервые предлагается оценивать состояние плода и диагносцировать ЗВРП по абсолютному содержанию B-лимфоцитов и относительному содержанию ЕАС-РОН в материнской крови начиная с 5 и до 20 недель беременности.

Абсолютное содержание B-лимфоцитов и относительное содержание ЕАС-РОН ранее использовались для характеристики состояния B- и A-звеньев иммунной системы человека как одни из критериев диагностики угрозы невынашивания беременности неясного генеза. Однако, критические значения диагностических показателей при указанной акушерской патологии не соответствуют диагностическим параметрам ЗВРП. Взаимосвязь параметров с состоянием плода ранее не была обнаружена.

Вероятно, отмеченные нами явления вызываются нарушением биологических и иммунологических барьеров, разделяющих кровоток матери и плода, что приводит к усилению пролиферативных процессов в популяциях антигенраспознающих иммунокомпетентных клеток. Материнские иммунокомпетентные клетки, попадая в кровоток плода, могут вызвать реакцию трансплантат против хозяина, которая сопровождается рантингом, т.е. задержкой роста плода. Известно, что гипотрофия плода в большинстве случаев сопровождается нарушением продукции медиаторов иммунного ответа, а также выработкой антитрофобластических антител, определяющих рост слоя плацентарных клеток.

Увеличение содержания ЕАС-РОН может свидетельствовать об активации ферментативной системы нейтрофилов и чрезмерному усилению их функциональной активности. Полиморфноядерные лейкоциты играют важную роль в реализации иммунного ответа, могут контролировать синтез медиаторов и способствуют созданию барьера в зоне разделения циркуляции матери и плода.

Использование предлагаемого способа позволяет выявить нарушения в физиологическом течении реакций материнской иммунной системы на антигены плода, диагносцировать ЗВРП в ранние сроки беременности и провести коррегирующую терапию, направленную как на восстановление нарушенного баланса в иммунном ответе матери, так и на нормализацию метаболических процессов плода.

Существенными отличиями способа являются:
установлены критические значения иммунологических параметров для Ba, равное 0,30•10⁹/л, для АЕС-РОН, равное 16% увеличение которых свидетельствует о ЗВРП.

Пример 1.

Беременная А. 22 года. Настоящая беременность вторая. Первая беременность закончилась самопроизвольным выкидышем в 9 недель беременности. Встала на учет по беременности в 7 недель. Обследована: вне беременности выявлена миома матки, соматической патологии не обнаружено.

Объективно: размеры матки увеличены до 7 недель гестации, матка в нормальном тонусе. Содержание ТБГ в сыворотке крови снижено, уровень прогестерона и эстриола в пределах нормы.

Обследование в 8 недель беременности по заявляемому способу показало:
Содержание Ba 0,38•10⁹/л.

ЕАС-РОН 16%
Заключение: состояние плода не соответствует физиологическому развитию. Диагноз ЗВРП.

Обследование в 20 недель по способу-прототипу показало:
содержание АТФ 254 мкмоль/л.

Заключение: состояние плода не соответствует физиологическому развитию, энергетический обмен плода нарушен.

Беременность осложнилась угрозой прерывания в сроке 11 недель. Проводилось стационарное лечение. УЗ исследование в 34 недели выявило фето-плацентарную недостаточность и увеличение размеров плаценты.

Беременность закончилась своевременными родами, рождением ребенка, с оценкой по шкале Апгар 7 8 баллов, массой 2700 г, ростом 52 см. Показатель массо-ростового коэффициента составил 51,92 г/см (при нормальных значениях более 54 г/см), что свидетельствует о гипотрофии плода.

Пример 2.

Беременная Л. 24 года. Повторнобеременная. Первая беременность закончилась своевременными родами без осложнений. Встала на учет по беременности в 6 недель. Обследована: соматической патологии не выявлено.

Объективно: размеры матки соответствуют сроку гестации, патологии беременности нет. Содержание ТБГ, эстриола, прогестерона, плацентарного лактогена на уровне нормы.

Обследование по заявляемому способу в 6 недель беременности показало:
содержание Ba 0,397•10⁹/л
ЕАС-РОН 37%
Заключение: состояние плода не соответствует физиологическому развитию. Прогнозируется ЗВРП.

Обследование по способу-прототипу в 25 недель беременности показало:
содержание АТФ 280 мкмоль/л.

Заключение: состояние плода соответствует физиологическому развитию, энергетический обмен плода не нарушен.

По данным УЗ исследования в сроке 28 недель беременности выявлено снижение размеров плаценты.

Ребенок родился с оценкой по шкале Апгар 7 8 баллов, с массой 2450 г, ростом 50 см. Диагноз при рождении пренатальная дистрофия. Показатель массо-ростового коэффициента составил 49 г/см, что свидетельствует о ЗВРП.

Пример 3.

Беременная К. 20 лет. Первобеременная, первородящая. Взята на учет по беременности со срока 12 недель.

Обследована: соматической патологии не выявлено, изменений в клинических анализах нет. При объективном обследовании размеры матки соответствуют гестационному сроку, патологии беременности не выявлено. Содержание эстриола, прогестерона, ТБГ соответствует сроку беременности.

Обследование по заявляемому способу в 12 недель беременности показало:
содержание Ba 0,104•10⁹/л
ЕАС-РОН 15%
Заключение: состояние плода соответствует физиологическому развитию (нет угрозы развития ЗВРП).

Обследование по способу-прототипу в 20 недель беременности показало:
содержание АТФ 292 мкмоль/л.

Заключение: энергетический обмен плода не нарушен, состояние плода соответствует физиологическому развитию.

По данным УЗ исследования в 19 и 35 недель беременности патологии плода и плаценты не выявлено. Ребенок родился с оценкой по шкале Апгар 9 баллов, с массой тела 3450 г, ростом 54 см. Показатель массо-ростового коэффициента составил 63,89 г/см, что свидетельствует о физиологическом развитии плода.

Преимуществами заявляемого способа являются:
1. Возможность оценки состояния плода и диагносцирование ЗВРП, начиная с 5 недель беременности;
2. Способ не требует дорогостоящего оборудования и реактивов, его исполнение возможно в любой клинической лаборатории;
3. Временные затраты от момента забора крови до оценки результатов реакций составляют 2 ч, одновременно можно провести обследование до 10 женщин.

Проведено обследование 97 беременных женщин в сроке гестации до 20 недель беременности. Из них 25 родили детей с диагнозом ЗВРП, у 72 женщин показатели росто-весового коэффициента детей при рождении соответствовали норме. Все женщины были обследованы по способу-прототипу в сроки гестации после 20 недель. Задержка внутриутробного развития плода по способу-прототипу диагносцировалась в 23 случаях, диагноз подтвердился у 20 из них. По заявляемому способу ЗВРП диагносцировалась у 30 женщин, диагноз подтвердился у 18 из них. Данные приведены в таблице.

Целью изобретения является ранняя (с 5 по 20 недели) диагностика задержки внутриутробного развития плода путем изучения некоторых иммунологических показателей венозной крови матери. Цель достигается тем, что в периферической венозной крови женщины, начиная с 5 недель гестации, определяется абсолютное содержание B-лимфоцитов (Ba) и относительное содержание нейтрофилов, имеющих рецепторы к C3 компоненту комплемента (ЕАС-РОН) и при показателях Ba больших или равных 0,30•10⁹ мкг/л и ЕАС-РОН, больших или равных 16%, состояние плода оценивается как несоответствующее физиологическому развитию и диагносцируется задержка внутриутробного развития плода (ЗВРП). Предлагаемый способ позволяет оценить состояние плода и с высокой точностью прогнозировать развитие ЗВРП (80,41%), является простым и доступным в выполнении. Использование способа способствует проведению коррегирующей терапии и нормализации метаболических процессов плода. 1 табл.

Способ оценки состояния плода путем исследования иммунологических показателей в крови матери, отличающийся тем, что в сроки гестации 5 20 недель определяют абсолютное содержание нейтрофилов с рецепторами к С3 компоненту компонента (ЕАС РОН) и при значениях В лимфоцитов, больших и равных 0,30 х 10⁹ /л, и ЕАС РОН, больших или равных 16% состояние плода оценивают как несоответствующее физиологическому и диагностируют задержку внутриутробного развития плода.