СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ БАКТЕРИЕМИИ У НОВОРОЖДЕННЫХ Российский патент 1997 года по МПК G01N33/48 G01N33/50 

Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии.

В современной патентной литературе не выявлены описания способов диагностики бактериемии, хотя имеется достаточное количество описаний способов диагностики инфекционно-воспалительных заболеваний.

В настоящее время в лечебно-профилактических учреждениях бактериемия выявляется на основании результатов бактериологического исследования в соответствии с приказом МЗ СССР N 535 от 22.04.85 г. Данная методика выбрана в качестве прототипа.

Сущность способа прототипа состоит в том, что из вены берут 5-10 мл крови, засеянные кровью среды инкубируют в течение 6 нед в термостате при температуре 37^oC. Просматривают ежедневно в течение первых 8 дн. При появлении видимого роста делают мазки, окрашивают по Граму и в соответствии с данными бактериоскопии делают высевы на среды для дальнейшей идентификации. При отсутствии роста на 9-10 дн дают отрицательный ответ, однако флаконы с засеянной средой сохраняют в термостате 4-6 нед, выявляя замедленный рост персистирующих бактерий, L-форм и др.

К недостаткам способа можно отнести
длительность осуществления (не менее 10 дн);
большое количество крови, что для новорожденного в критическом состоянии является существенным.

Задачей изобретения является разработка способа экспресс-диагностики бактериемии.

Задача решается тем, что 0,4 мл крови предварительно инкубируют 24 ч при температуре 37^oC, после чего измеряют хемилюминесценцию и при увеличении ее интенсивности более чем в 1,9 раза диагностируют бактериемию.

При инкубации в течение 24 ч крови, содержащей живые микроорганизмы, в сахарном бульоне при 37^oC наблюдается их усиленный рост. Увеличение числа микроорганизмов приводит в всплеску фагоцитарной активности нейтрофилов, возрастанию концентрации активных форм кислорода: перекиси водорода, супероксидного анионрадикала, гидроксильного радикала. Активные формы кислорода вызывают развитие цепных свободнорадикальных реакций, что можно зафиксировать методом перекисной хемилюминесценции задолго до появления видимого роста бактериальных колоний.

Способ осуществляется следующим образом.

При поступлении в клиническое отделение у новорожденного производят забор 0,4 мл венозной крови и переносят ее с соблюдением стерильности по 0,2 мл в две пробирки с сахарным бульоном (в соотношении 1:10). Одну из пробирок помещают в термостат и инкубируют при температуре 37^oC в течение 24 ч. Кровь из другой пробирки сразу подвергают хемилюминесцентному анализу. По истечении срока инкубации кровь исследуют так же, как и контрольный образец. При увеличении интенсивности хемилюминесценции в опытном образце в 1,9 раза и более относительно контроля диагностируют бактериемию.

Хемилюминесцентный анализ осуществляют следующим образом.

В стеклянной кювете хемилюминометра смешивают 2,8 мл 0,1М фосфатного буфера и 0,5 мл исследуемой пробы (кровь с сахарным бульоном 1:10). Кювету помещают в ячейку прибора, после термостатирования (2мин) открывают шторку и записывают в течение 2 мин темновой фон. Затем по специальному катетеру, не нарушая светоизоляцию, в кювету вводят 0,5 мл 3%-ной перекиси водорода. Интенсивность хемилюминесцентной реакции выражают в квант/с 4п. Регистрацию интенсивности сверхслабого свечения можно проводить на хемилюминометрах любого типа, в том числе и на установках "Инжмет" (Москва).

Пример 1. Больной М-в, родился 16.11.93 от первых срочных родов с массой тела 3500 г, с оценкой по шкале Апгар 4-6 баллов, в тяжелом состоянии. У матери резус-отрицательная принадлежность крови. Отмечалась желтушность кожных покровов, уровень билирубина составил: общий 375 ммоль/л, прямой 18 ммоль/л. Переведен в отделение реанимации с диагнозом гемолитическая болезнь новорожденных.

У ребенка сразу при поступлении в реанимационное отделение была в стерильных условиях взята кровь в количестве 0,4 мл и разнесена в 2 стерильные пробирки с сахарным бульоном. Интенсивность перекисной хемилюминесценции контрольной пробы составила 12,5•10⁵ квант/с 4п. Через сутки инкубации опытной пробы в термостате при температуре 37^oC произведено измерение перекисной хемилюминесценции. Интенсивность составила 38,4•10⁵ квант/с 4п, то есть возросла в 3 раза, что свидетельствовало о бактериемии. При бактериальном обследовании из крови высеяна Ps.aeruiginosa
Пример 2. Ребенок Ч-й, родился 27.04.93 от первых срочных родов с массой тела 4200 г, с оценкой по шкале Апгар 1-4 балла, в тяжелом состоянии. У ребенка отмечалась выраженная одышка до 70-80 в мин, участие всей вспомогательной мускулатуры в акте дыхания, втяжение межреберий, дыхание по типу "качелей", выраженный акро- и периоральный цианоз. Аускультативно ослабленное дыхание и разнокалиберные влажные хрипы. При прямой ларингоскопии меконий ниже голосовых связок. В связи с тяжестью состояния после перевода на ИВЛ ребенок был транспортирован в отделение реанимации с диагнозом: мекониально-аспирационный синдром, ПГТЭ, о.период, тяжелое течение.

Интенсивность перекисной хемилюминесценции в контрольной пробе составили 36,4•10⁵ квант/с 4п. После инкубации крови с сахарным бульоном при температуре 37^oC 24 ч, интенсивность свечения равнялась 31,4•10⁵ квант/с 4п. Увеличения амплитуды не произошло, что в соответствии с предлагаемым способом свидетельствовало об отсутствии бактериемии. Дополнительное бактериологическое обследование дало отрицательный результат.

Пример 3. Ребенок Б-в, родился 2.04.93 от первой беременности, протекавшей с гестозом первой и второй половины. Роды преждевременные при сроке гестации 36-37 нед. Масса тела 2200 г. Состояние ребенка было расценено как тяжелое. Оценка по шкале Апгар 1-6 баллов. У ребенка отмечалась дыхательная недостаточность в виде одышки до 70-80 в мин, участие вспомогательной мускулатуры в акте дыхания, втяжений межреберий, западание грудины, выраженный акро- и периоральный цианоз, стонущее дыхание, неврологическая симптоматика. В связи с тяжестью состояния переведен в реанимационное отделение с диагнозом пневмопатия, ателектазы легких, ПГТЭ, недоношенность 1-й степени.

Интенсивность перекисной хемилюминесценции крови, взятой у ребенка при поступлении, составила 28,5•10⁵ квант/с 4п. Через сутки инкубации крови в сахарном бульоне при температуре 37^oC интенсивность составила 55,2•10⁵ квант/с 4п. Результаты бактериологического обследования, поступившие на 10 сут, выявили наличие стрептококка в крови.

Таким образом, предлагаемый способ отличается рядом преимуществ по сравнению с известным:
способ относится к экспресс-диагностике;
для осуществления способа требуется значительно меньшее количество крови.

Достоверность способа подтверждена клиническим материалом. Предлагаемым способом обследовано 45 новорожденных, при этом в 84,4% обнаружена бактериемия, наличие которой подтверждено в 100% случаев результатами бактериологического обследования.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет врачу своевременно назначить больному новорожденному адекватную терапию и тем самым снизить число осложнений и улучшить состояние здоровья ребенка.

Использование, медицина, неонатология, для диагностики бактериемии у новорожденных. Сущность изобретения: кровь новорожденного предварительно инкубируют 24 ч при температуре 37^oC, после чего измеряют хемилюминесценцию, индуцированную H₂O₂, и при увеличении ее интенсивности более чем в 1,9 раза диагностируют бактериемию. Способ позволяет врачу своевременно назначать больному новорожденному адекватную терапию и тем самым снизить число осложнений и улучшить состояние ребенка.

Способ диагностики бактериемии у новорожденных, включающий отбор венозной крови с последующим ее инкубированием при 37^oС и выявлением бактерий, отличающийся тем, что инкубацию в течение 24 ч проводят в присутствии сахарного бульона, причем кровь и сахарный бульон взяты соотношении 1 10 по объему, затем регистрируют интенсивность кемилюминисценции, индуцированной перекисью водорода и при увеличении ее более чем в 1,9 раза по сравнению с контролем, не подвергающемся 24-х часовой инкубации, диагностируют бактериемию.