СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ КООРДИНАТОРНЫХ НАРУШЕНИЙ ИЗ МОЗЖЕЧКОВО-СТВОЛОВОГО ОТДЕЛА ГОЛОВНОГО МОЗГА Российский патент 1997 года по МПК A61K35/30 

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения препаратов гидролизатов мозговой ткани. Настоящая заявка выделена из заявки N 93-003564 и является ее уточнением по разделу получения препарата для лечения нарушений координации движений.

Известен способ получения гидролизатного препарата из целого головного мозга свиней церебролизина [1] Однако, как показала практика, использование церебролизина при нарушениях координации движений, связанных с поражением мозжечка и его проводников является малоэффективным. В этих случаях малоэффективны и другие терапевтические средства [2]
Техническим результатом, на который направлено данное изобретение, является повышение эффективности лечения и сокращение сроков реабилитации у больных с нарушениями координации движений.

Указанный технический результат достигается тем, что впервые разработан препарат для лечения координаторных нарушений из мозжечково-стволового отдела головного мозга, поэтому прототипа данному изобретению нет.

Введение гидролизатного препарата из изолированного мозжечково-стволового отдела головного мозга осуществляют параэнтерально микродозами, в склеромерные паравентебральные зоны, соответствующие шейным и верхним грудным сегментам, и/или околоневральные зоны подъязычного нерва и магистральных стволов нервов верхних и нижних конечностей локтевого, серединного, лучевого, бедренного, седалищного, большеберцового и глубокого малоберцового с проведением имитационной стимуляции координации движений.

Указанный технический результат достигается также тем, что в способе лечения координаторных нарушений гидролизатный препарат, приготовленный из изолированного мозжечково-стволового отдела головного мозга, вводят в околоневральные зоны черепномозговых нервов тройничного, лицевого и добавочного.

Предпосылкой данного изобретения явился экспериментально установленный авторами феномен, заключающийся в том, что высокий терапевтический эффект при лечении нарушений координации движений заявленным способом основан на специфической избирательной тропности продуктов гидролиза мозжечка и ствола мозга к этим отделам центральной нервной системы (что не достигается с продуктами гидролиза других частей головного мозга, например коры головного мозга), что подтверждено и в опытах на животных (фиг.1) и в клинических исследованиях.

На фиг.1 приведены коэффициенты специфичности (K-specific) действия гидролизатов коры головного мозга (Brainlisat) и мозжечок + ствол мозга (Cerebellumlisat) на включение [C¹⁴] -лейцина в белки клеток мозжечка (K_{мозжечок}). К специфичности рассчитывался из формулы:
K_specific A_M/A_KM-1,
где K_{мозжечок} коэффициент специфичности включения [C¹⁴]-лейцина в белки клеток мозжечка по отношению к коре головного мозга мышей;
A_М величина включения [C¹⁴]-лейцина в белки клеток коры головного мозга при введении лекарственных препаратов отнесенная к величине включения [C¹⁴] -лейцина в белки клеток коры головного мозга у контрольных животных без введения лекарственных препаратов;
A_КМ величина включения [С¹⁴]-лейцина в белки клеток мозжечка при введении лекарственных препаратов отнесенная к величине включения [C¹⁴]-лейцина в белки клеток мозжечка у контрольных животных без введения лекарственных препаратов.

Кроме того, авторами установлено, что устойчивое паталогическое состояние при аномально развивающемся детском мозге, можно прервать настойчивой активной бомбардировкой адекватной афферентной пульсацией, что обеспечивает постепенное восстановление процесса ветвления с образованием новых связей, обеспечивающих нормальное развитие задержанных или извращенных функций. В частности, при нарушениях координации движений, связанных с поражением мозжечка и его проводников, коррегирование функциональной активности упомянутых отделов центральной нервной системы обеспечивает блокирования паралогической афферентации и впервые достигнуто путем парантерального введения микродоз гидролизатного препарата, приготовленного из изолированного мозжечково-стволового отдела головного мозга крупного рогатого скота, в соответствующие рецепторные зоны с одновременной имитационной стимуляцией, что обусловило новизну заявленного способа и обеспечило указанный технический результат.

Следует отметить, что принципиально новым по сравнению с известными способами лечения, основанными на введении биологически активных препаратов, является получение нового гидролизатного препарата, полученного новым, неизвестным до настоящего времени способом из изолированного мозжечково-стволового отдела головного мозга крупного рогатого скота и введение его парентерально микродозами в соответствующие околоневральные зоны.

Использование в качестве сырья именно мозжечково-стволового отдела головного мозга позволило получить препарат, обладающий своим резконаправленным действием, поскольку не используются такие части мозга, как кора и др. дающие совершенно иное направляющее действие препарата, т.е. позволило получить технический результат, выраженный в обеспечении эффективного лечения больных с нарушениями координации движений.

Лечение координаторных нарушений осуществляют с помощью полученного препарата следующим образом. Больного обследуют по формализованной карте неврологического и нейропсихологического обследования, в результате которого устанавливают ту или иную форму детского церебрального паралича либо иных видов заболеваний, вызванных нарушением координации движений. Дополнительно к таким обследованиям может проводиться исследование коротких стволовых потенциалов мозга, дающее наиболее точную и объемную картину нарушений, связанных с поражением ствола головного мозга. После чего проводится 2-недельный курс лечения мозжечково-стволовым биогидролизатом мозга путем обкалывания склеромерных паравертебральных зон, соответствующих шейным и верхним грудным сегментам в соответствии с известными таблицами по метамерии, а также вместо названных зон проводится обкалывание околоневральных зон подъязычного нерва и магистральных стволов нервов верхних и нижних конечностей или обкалывание названных склеромерных паравентебральных зон совместно с обкалыванием названных околоневральных зон со всевозможными сочетаниями названных конкретных зон. В отдельных случаях для усиления терапевтического эффекта мозжечково-стволовой гидролизат мозга вводят обкалыванием в околоневральные зоны тройничного, лицевого или двух из названных черепно-мозговых нервов, в зависимости от степени нарушений координации движений.

При обкалывании за одну инъекцию вводится приблизительно 0,05 мл мозжечково-стволового гидролизата мозга, что соответствует общепринятой терминологии "микродоза", при этом суммарная доза составляет 1-2 мл. в день производится одно обкалывание указанной суммарной дозой, всего за курс проводится от 3 до 6 сеансов обкалываний через день.

Одновременно с курсом обкалывания проводится имитационная стимуляция координации движений, во время которой наибольшее внимание уделяют навыкам формирования автоматизма самостоятельной ходьбы и тонкой моторики кисти, что может достигаться с помощью индивидуальной работы медперсонала и матери с ребенком, например мать имитирует нормальное шаговое движение правой и левой ноги ребенка, выполняет с ним рисунки от наиболее простых к сложным. Дополнительно для усиления эффекта может применяться имитационная стимуляция координации движений, посредством электростимуляции с биоуправлением ходьбы.

При необходимости курс лечения повторяется. По окончании курса лечения больной обследуется по упомянутым формализованным картам и с помощью коротковолновых стволовых вызванных потенциалов мозга. Терапевтический эффект от лечения данным способом начинает проявляться после 10-14 суток и в дальнейшем неуклонно нарастает.

С помощью мозжечково-стволового гидролизата пролечен 21 больной с атактическим синдромом (преимущественно мозжечковой формой детского церебрального паралича). Препарат вводился 5-6 раз за курс околоневрально, миомерно или склеромерно в суммарной дозе от 1,0 до 2,0 мл. Во всех случаях отмечено уменьшение координаторных нарушений, атаксии при ходьбе, жестикуляциях, тонких манипулированиях, письме. Эффект наступал в течение 2-недельного курса или нарастал в последующие 2-3 месяца.

В контрольной группе из 15 больных с мозжечковыми нарушениями, которых пролечили по той же схеме, но с использованием коркового гидролизата мозга (церебролизина), отмечались положительные изменения в состоянии двигательной сферы (нарастала сила и активность произвольных движений), а также в психо-речевой. Вместе с тем координаторные (мозжечковые) нарушения сохранялись на том же уровне.

Сопоставление двух групп свидетельствует о высокой эффективности данного способа лечения с парентеральным применением мозжечково-стволового гидролизата мозга в лечении больных с нарушениями координации движений.

Пример 1. 1 кг стволовой части и мозжечка пропускают через мясорубку. Гомогент ткани этих отделов мозга крупного рогатого скота готовят в дистиллированной воде pH 8,4 в соотношении 1:1 вес мозга /объем воды. Гомогенат нагревают до 48+2^oC и при перемешивании добавляют 40 г сериновой эндопротеазы. Инкубацию проводят в течение 4 часов при перемешивании и постоянном темпе. Далее смесь нагревают до 98^oC, инкубируют 40 минут и после охлаждения последовательно фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм (микросфильтрация для обесцвечивания раствора и стерилизации) и через ультрафильтрационную установку с молекулярным весом отсечения веществ 50 кД и ультрафильтрационную установку с молекулярным весом отсечения веществ 10 кД. Смесь упаривают под вакуумом до 600 мл (концентрирование) и добавляют консервант (0,3% фенола) и перед разливом в ампулы проводят стерильную фильтрацию на фильтрах 0,22 мкм.

Пример 2. 2,0 кг стволовой части и мозжечка пропускают через мясорубку. Гомогент ткани этих отделов мозга крупного рогатого скота готовят в дистиллированной воде pH 6,8 в соотношении 1:1 вес мозга /объем воды. Гомогенат нагревают до 42+2^oC и при перемешивании добавляют 40 г сериновой эндопротеазы. Инкубацию проводят в течение 5 часов при перемешивании и постоянном темпе. Далее смесь нагревают до 100^oC (но не кипятят), инкубируют 40 минут и после охлаждения последовательно фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм (микросфильтрация для обесцвечивания раствора и стерилизации) и через ультрафильтрационную установку с молекулярным весом отсечения веществ 45 кД и ультрафильтрационную установку с молекулярным весом отсечения веществ 10 кД. Смесь упаривают под вакуумом до 1200 мл (концентрирование) и добавляют консервант (0,3% фенола) и перед розливом в ампулы проводят стерильную фильтрацию на фильтрах 0,22 мкм.

Пример 3. 1 кг стволовой части и мозжечка пропускают через мясорубку. Гомогент ткани этих отделов мозга крупного рогатого скота готовят в дистиллированной воде pH 8,4 в соотношении 1:1 вес мозга /объем воды. Гомогенат нагревают до 50+2^oC и при перемешивании добавляют 40 г сериновой эндопротеазы. Инкубацию проводят в течение 3,5 часов при перемешивании и постоянном темпе. Далее смесь нагревают до 98^oC, инкубируют 40 минут и после охлаждения последовательно фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,50 мкм (микросфильтрация для обесцвечивания раствора и стерилизации) и через ультрафильтрационную установку с молекулярным весом отсечения веществ 50 кД и ультрафильтрационную установку с молекулярным весом отсечения веществ 10 кД. Смесь упаривают под вакуумом до 600 мл (концентрирование) и добавляют консервант (0,3% крезол) и перед розливом в ампулы проводят стерильную фильтрацию на фильтрах 0,22 мкм.

Полученный препарат имел следующие характеристики:
1. Аминокислотный состав препарата, полученного в примерах 1, 2, 3 представлен на фиг.2.

2. Содержание коротких пептидов в препарате мозжечково-стволового гидролиза, полученного с помощью метода ВЖХ, указано на фиг.3.

Источники информации
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства, 1993, т.2, стр.117.

2. Маркова Е. Д. Иванова-Смоленская И.А. и др. Церебролизин в лечении некоторых наследственных заболеваний нервной системы. Тезисы 2-го симпозиума: Теоретические и клинические основы лечения церебролизином, Москва, 2 декабря 1975 г. стр. 12-15.

Способ получения препарата для лечения координаторных нарушений из мозжечково-стволового отдела головного мозга. Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения препаратов гидролизатов мозговой ткани. Настоящая заявка выделена из заявки N 93-003564 и является ее уточнением по разделу получения препарата для лечения нарушений координации движений. Техническим результатом, на которое направлено изобретение, является повышение эффективности лечения и сокращение сроков реабилитации у больных с нарушениями координации движений. Данный технический результат достигается тем, что впервые разработан препарат для лечения координаторных нарушений из мозжечково-стволового отдела головного мозга. Введение гидролизатного препарата осуществляется параэнтерально микродозами в склеромерные паравентебральные зоны, соответствующие шейным и верхним грудным сегментам, и/или околоневральные зоны подъязычного нерва и магистральных стволов нервов верхних и нижних конечностей. 3 ил.

Способ получения препарата для лечения координаторных нарушений из мозжечково-стволового отдела головного мозга, включающий гомогенизацию мозжечково-стволового отдела в воде при рН 6,8 8,4, гомогенат подвергают гидролизу в присутствии грибковой сериновой эндопротеазы при температуре 40 - 55^oС в течение 3,5 5,5 ч, далее нагревают при перемешивании до 90 - 100^oC в течение 40 60 мин, осуществляют микрофильтрацию через мембранные фильтры с размером пор 0,18 0,5 мкм, и две последовательные ультрафильтрации через мембраны с порогом задержания веществ 30 50 кД и 5 15 кД.