СПОСОБ РЕГИСТРАЦИИ ПРОТИВОЛУЧЕВОГО ЭФФЕКТА, ВОЗНИКАЮЩЕГО ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ НА ТКАНИ ПРЕРЫВИСТЫМ СВЕТОМ В УСЛОВИЯХ IN VIVO Российский патент 1997 года по МПК G01N33/569 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к методам определения противолучевой защиты.

При использовании физических методов противолучевой защиты регистрация ее осуществляется с помощью дозиметрических приборов, которые позволяют определить величину ослабления лучистой энергии. Однако эти методы нельзя использовать для определения резистентности живых тканей и клеточного материала к лучистой энергии.

Наиболее близким по технической сущности является способ, применяемый для регистрации повышения устойчивости тканей клеток к лучистой энергии за счет использования радиозащитных средств, при котором применяются лабораторные животные (П.Куна, 1989). При этом определяется фактор уменьшения дозы:
ФУД ДЛ_50/30 с РС / ДЛ_50/30 без РС,
где
ФУД фактор уменьшения дозы;
ДЛ_50/30 среднелетальная доза, приводящая к смерти облученных животных в течение 30 суток (РС радиозащитное средство).

Однако, как видно, этот способ травматичен. Кроме того, при регистрации противолучевого действия тканей, подвергающихся воздействию прерывистого света in vivo, достаточно эффективно защищается клеточный материал в концентрации не более 10^-3 г клеток в 1 см³ взвеси. Весовая же концентрация клеток в тканях животных приближается к 10^-1 г/см³ 1 г/см³.

Техническим результатом изобретения является снижение травматичности и повышение чувствительности способа регистрации противолучевого эффекта, возникающего при воздействии на ткани прерывистым светом in vivo.

Этот результат достигается следующим образом. Из одно- двухсуточной культуры живых стафилококков готовится взвесь концентрацией 10^-3 - 10^-4 г клеточной массы в 1 см³ взвеси на стерильном физиологическом растворе (0,5 2 млрд. м. т. в 1 см³ взвеси). Затем взвесь наносится равномерным слоем на диск стерильной фильтровальной бумаги, уложенный на дне стерильной чашки Петри. Чашка Петри закрывается и размещается на необходимом удалении от участка живых тканей, на который будут воздействовать прерывистым световым потоком так, чтобы определенный участок диска был расположен наиболее близко к освещаемым тканям по сравнению с другими его участками. После освещения тканей прерывистым светом на микроорганизмы, находящиеся на диске, воздействуют лучистой энергией. Затем с диска делается отпечаток на твердую питательную среду, находящуюся в другой чашке Петри, которую потом инкубируют в течение 24 ч в термостате: 2-4 ч при 37^oC и 20-22 ч при 20-24^oC.

Регистрация имевшегося противолучевого действия тканей осуществляется по разнице в количестве колоний, рост которых дали микроорганизмы, находившиеся на наименьшем и наибольшем удалении от тканей, подвергавшихся воздействию прерывистого света.

Примеры конкретного применения.

С целью определения концентрации клеточного материала, воспринимающего с наибольшей чувствительностью противолучевое действие тканей, подвергаемых воздействию прерывистого света, готовили из живых 1-2 суточных культур стафилококка золотистого и белого взвеси на стерильном физиологическом растворе следующих концентраций: 1 г/см³, 10^-1 г/см³, 10^-2 г/см³, 10^-3 г/см³. Взвеси разливали в опытные и контрольные пробирки. Опытные пробирки размещали вблизи (0,3-0,5 см) участка тканей, подвергаемого воздействию прерывистого света, а контрольные на удалении от него (4-5 м). Для получения противолучевого эффекта пользовались разработанными нами способами (заявки N 93020255/14 от 20.04.93 г и N 93052253/14 от 16.11.93 г). После воздействия на ткани прерывистым светом клеточные взвеси в опытных и контрольных пробирках в концентрациях 1 г/см³, 10^-1 г/см³ и 10^-2 г/см³ разводили до 10^-3 г/см³ и все взвеси наносили на диски стерильной фильтровальной бумаги, а затем подвергали воздействию ультрафиолетовых лучей, получаемых от широкополосной лампы (180-400 нм) мощностью 900 Вт, в расстояния 1,5 м в течение 4-5 с. Далее с фильтровальной бумаги делали отпечатки на твердой питательной среде, инкубировали в термостате 2-4 ч при 37^oC и 20-22 ч при 20-22^oC. Подсчет колоний проводился на 1 см² среды. Полученные результаты представлены в таблице.

Как видно, статистически достоверные отличия количества колоний в опыте и контроле во всех опытах отмечались при разведении клеточного материала 10^-3 г/см³ и лишь один раз при разведении 10^-2 г/см³. Следовательно, для достоверной регистрации противолучевого эффекта, возникающего при действии на ткани прерывистым светом, необходимо использовать клеточные взвеси с содержанием клеток не более 10^-3 г/см³ взвеси.

Для получения противолучевого эффекта применяли живые листья растения сциндаксус золотистый. Диск из фильтровальной бумаги, помещенный в чашку Петри, с нанесенной на его поверхность взвесью стафилококка в концентрации 10^-3 г/см³ размещали перпендикулярно к плоскости листа, которая подвергалась воздействию прерывистого светового потока. Затем диск облучался ультрафиолетовыми лучами, получаемыми от широкополосной лампы (180-400 нм) мощностью 900 Вт с расстояния 0,6 м в течение 8 с. После этого готовили отпечатки с диска на твердой питательной среде (мясо-пептонный агар), инкубировали в термостате 2 ч при 37^oC и 22 ч при 22^oC. Полученные результаты проиллюстрированы на фиг. 1. Очевиден преимущественный рост колоний, которые дали микроорганизмы, находившиеся в области, ближайшей к источнику противолучевого действия (к тканям листа).

На фиг. 2 показан отмпчаток с бумажного диска, нанесенные на который микроорганизмы после взаимодействия с тканями растения, освещавшиеся прерывистым светом, облучались рентгеновскими лучами в дозе 600 Р (6 38). Виден преимущественный рост колоний в зоне наиболее близкого расположения микробов к тканям, подвергнутым воздействию прерывистого света.

На фиг. 3 показан отпечаток с бумажного диска, нанесенные на который микроорганизмы после противолучевого действия тканей листа растения подвергались облучению гамма-лучами в дозе 700 Р (7 38). Виден преобладающий рост колоний вдоль линии наиболее близкого расположения микробов к освещенным тканям.

Изобретение относится к медицине, а именно к методам определения противолучевой защиты.

Техническим результатом изобретения является снижение травматичности и повышение чувствительности способа определения противолучевого эффекта, возникающего при воздействии на ткани прерывистым светом in vivo. Данный результат достигается тем, что живую микробную взвесь концентрацией 10^-3-10^-4 г клеточного материала в 1 см³ взвеси наносят равномерно на диск стерильной фильтровальной бумаги, который устанавливают вблизи живых тканей, располагая при этом определенную часть его более близко к тканям по сравнению с другими, освещают ткани прерывистым световым потоком, после чего воздействуют на диск лучистой энергией, делают с него отпечаток на твердой питательной среде, который инкубируют в термостате, а регистрацию противолучевого эффекта осуществляют по разнице в количестве колоний, рост которых дали микроорганизмы, находившиеся на наименьшем и наибольшем удалении от тканей, подвергнутых воздействию прерывистого света. 3 ил. 1 табл.

Способ регистрации противолучевого эффекта, возникающего при воздействии на ткани прерывистым светом в условиях in vivo, отличающийся тем, что живую микробную взвесь концентрацией 10^-3 10^-4 г клеточного материала в 1 см³ взвеси наносят равномерно на диск стерильной фильтровальной бумаги, который устанавливают вблизи живых тканей, располагая при этом определенную часть его более близко к тканям по сравнению с другими, освещают ткани прерывистым световым потоком, после чего воздействуют на диск лучистой энергией, делают с него отпечаток на твердой питательной среде, который инкубируют в термостате, а регистрацию противолучевого эффекта осуществляют по разнице в количестве колоний, рост которых дали микроорганизмы, находившиеся на наименьшем и наибольшем удалении от тканей, подвергнутых воздействию прерывистого света.