ИМИДАЗОЛСОДЕРЖАЩИЕ ИНГИБИТОРЫ КАТЕПСИН G-ИНДУЦИРОВАННОЙ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ Российский патент 1997 года по МПК A61K31/41 

Описание патента на изобретение RU2097033C1

Изобретение относится к биохимии крови, регуляции системы гемостаза, а именно к новым низкомолекулярным синтетическим ингибиторам тромбообразования.

Катепсин G представляет собой сериновую протеазу, которая выделяется активированными лейкоцитами при воспалительных заболеваниях и обладает антимикробными свойствами. Однако эта протеаза является мощным индуктором агрегации тромбоцитов, что может привести к тромботическим осложнениям при воспалительных заболеваниях. Поэтому поиск новых ингибиторов катепсин-G-индуцированной активации тромбоцитов актуален для решения проблем контроля гемостаза и борьбы с тромботическими осложнениями при воспалении и инфекциях.

Наибольший интерес в этом отношении представляют низкомолекулярные соединения с простым способом получения.

Известны низкомолекулярные ингибиторы тромбообразования, представляющие собой модифицированные простациклины, теофилины и три-тетрапептиды, однако они не ингибируют катепсин-G-индуцированную агрегацию тромбоцитов.

Наиболее близким по действию к заявляемым соединениям является ингибитор катепсина G-эглин. Последний представляет собой низкомолекулярный белок, состоящий из 70-и аминокислот, выделенный из пиявок Hirudo medicinalis. Недостатком этого ингибитора является подавление исключительно протеазной активности, но не индуцированной катепсином G агрегации тромбоцитов. Кроме того, процесс выделения эглина из природного источника пиявок сложен, многостадиен, (включая многократную колоночную и гель-хроматографии) и энергоемок вследствие необходимости многократной лиофилизации белка.

Нами предлагаются новые низкомолекулярные ингибиторы катепсина G общей формулы (I), обладающие способностью подавлять тромбообразование, с простым способом их получения.

Общая формула (I):

где при R1 CH3(CH2)10-CONH- R2 H-,
а при R1 NH2- R2 -COOCH3.

Конкретно предлагаемые вещества представляют собой дихлоргидрат метилового эфира гистидина (H-His-OMe•2HCl) и N-лауроилгистамин (Lau-HA). Дихлоргидрат метилового эфира гистидина получают этерификацией гистидина метиловым спиртом в кислой среде и выпускается рядом фирм, производящих химические реактивы для пептидного синтеза. N-лауроилгистамин получают ацилированием гистамина хлорангидридом лауриновой кислоты в органическом растворителе с высоким выходом и следующими константами: Т. пл. 121-125oC. ИК-спектр в вазелиновом масле, ν см-1: 1570 (амид I), 1460 (амид II), 1H-ЯМР (CD3OD), d м. д. 0,92 (т, 3Н, w -CH); 1,30 (м, 16Н, 8*CH2); 1,56 (т, 2H, b-CH2); 2,17 (т, 2Н, a-CH2); 2,92 (т, 2Н, a-CH2-HA); 3,50 (т, 2Н, b-CH2-HA); 7,30 (c, 1H, CH-4-Im); 8,80 (c, 1H, CH-2-Im). Найдено, С 69,67; H 10,57; N 14,29. C17H31N3O. Вычислено, С 69,52; H 10,56; N 14,31.

Катепсин G был выделен из нейтрофилов периферической крови человека по методу, описанному ранее. Катепсин G и тромбин (Sigma) были использованы в качестве индукторов агрегации тромбоцитов. Тромбоциты выделяли из венозной крови методом центрифугирования. В качестве антикоагулянта был использован 3,8%-ный водный раствор цитрата натрия в соотношении 1 9 с кровью. Среда для суспендирования тромбоцитов содержала HEPES-буфер 10 мМ, NaCl 150 мМ, KCl 2,7 мМ, NaH3PO4 0,37 мМ, MgCl2 1 мМ, CaCl2 1 мМ, глюкозы 5 мМ, pH 7,4 с аспиразой 0,1 мг/мл. Число тромбоцитов в исследуемых пробах составляло 3•10 в 1 мл. Агрегацию тромбоцитов в суспензии регистрировали на двухканальном агрегометре Labor APACT, Hamburg. Содержание в тромбоцитах цитоплазматического Ca ([Ca]цит) определяли с помощью флуоресцентного кальциевого зонда Fura-2AM, Calbiochem, USA флуориметрическим методом [10] Флуоресценцию регистрировали на спектрофлуориметре Hitachi-3000, Japan. Статическую обработку проводили, используя критерий Стьюдента.

Катепсин G в диапазоне концентраций 0,1 мкМ -10,0 мкМ вызывал развитие прямой дозозависимой агрегации тромбоцитов, которая по форме кривой, величинам амплитуды и максимальной скорости была близка к агрегации клеток, вызванной тромбином (1,0 ед/мл) (см. таблицу). Исходя из этого, при изучении влияния HisOMe•2HCl и LauHA на активированные тромбоциты, катепсин G и тромбин использовались в вышеуказанных концентрациях. В контрольной серии экспериментов была проведена оценка влияния HisOMe•2HCl и LauHA на функциональное состояние неактивированных тромбоцитов. Опыты показали, что HisOMe•2HCl (0,001 мМ 1,0 мМ), равно как и LauHA (0,001 мМ-1,0 мМ) не вызывали развития агрегации тромбоцитов в течение 15-минутной инкубации. Добавление HisOMe•2HCl в суспензию тромбоцитов за 5 мин до их стимуляции катепсином G или тромбином препятствовало агрегации клеток. Наиболее выраженный ингибирующий эффект отмечался при использовании максимальной из исследованных концентраций HisOMe•2HCl, составляющий 1 мМ. HisOMe•2HCl полностью подавлял развитие катепсин- G-индуцированной агрегации тромбоцитов, вызванной тромбином, на фоне HisOMe•2HCl снизилась менее значительно, в среднем на 58% (P<0,01) и 46% (P<0,05) соответственно. Следует отметить, что тромбин-индуцированная агрегация тромбонов в условиях инкубации с HisOMe•2HCl имела двухволновую форму в отличие от одноволновой в контрольной серии экспериментов (в отсутствии HisOMe•2HCl). Уменьшение концентрации HisOMe•2HCl до 0,1 мМ, а также времени инкубации тромбоцитов до 2 мин снижало величину его ингибирующего влияния на катепсин G-, так и тромбининдуцированную агрегацию клеток. LauHA в концентрации 1 мМ также подавлял развитие агрегации тромбоцитов, вызванный катепсином G. Так после 5-минутной инкубации тромбоцитов с LauHA амплитуда катепсин-G-индуцированной агрегации снижалась на 43% (P<0,01), а максимальная скорость на 56% (P<0,01). Величина ингибирующего влияния LauHA на агрегацию тромбоцитов, стимулированных катепсином G, в зависимости от времени инкубации (от 2 до 10 мин) достоверно не изменялась. В то же время нами не было отмечено достоверного снижения показателей агрегации тромбоцитов, индуцированной тромбином, на фоне LauHA. В этих условиях имела место лишь тенденция к снижению амплитуды агрегации в среднем на 16%
Можно считать, что предлагаемые ингибиторы тромбоцитарной активности, индуцированной катепсином G, обладают прямыми антитромбоцитарными свойствами в отличие от антипротеазных свойств эглина. По сравнению с эглином предлагаемые нами ингибиторы являются более простыми для получения. Кроме того, LauHA позволяет селективно ингибировать катепсин- G-индуцированную агрегацию тромбоцитов, не оказывая влияния на тромбинстимулированное тромбообразование. HisOMe•2HCl полностью подавляет катепсин-G-индуцированную агрегацию тромбоцитов, ингибируя в то же время и тромбининдуцированное тромбообразование. Предлагаемые ингибиторы могут найти применение в качестве реагентов для выяснения механизмов нарушения гемостаза, а также в качестве лекарственных фармакологических препаратов, препятствующих тромбообразованию, особенно при инфекционных и воспалительных заболеваниях.

Похожие патенты RU2097033C1

название год авторы номер документа
N-АЦИЛЬНЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ БИОГЕННЫХ АМИНОВ - МОДУЛЯТОРЫ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ 1994
  • Евстигнеева Р.П.
  • Желтухина Г.А.
  • Небольсин В.Е.
  • Огрель С.А.
  • Рожкова Е.А.
RU2093520C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИОХЛОРОФИЛЛА А 1996
  • Миронов А.Ф.
  • Ефремов А.В.
RU2144085C1
СПОСОБ КИНЕТИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ РОДИЯ 1994
  • Федорина Л.И.
  • Левинсон Н.А.
  • Рысев А.П.
  • Хомутова Е.Г.
RU2102744C1
СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПРОБ К КИНЕТИЧЕСКОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ РОДИЯ 1994
  • Федорина Л.И.
  • Левинсон Н.А.
  • Рысев А.П.
  • Хомутова Е.Г.
RU2096755C1
ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО ФОТОГЕМ ДЛЯ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ РАКА 1996
  • Миронов А.Ф.
  • Нокель А.Ю.
RU2128993C1
УСТРОЙСТВО ДЛЯ ИСПЫТАНИЯ АСФАЛЬТОБЕТОНА НА СДВИГОУСТОЙЧИВОСТЬ 1994
  • Бонченко Г.А.
  • Горова Н.Э.
  • Абакумова Р.Н.
RU2086950C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТОНЕРА 1997
  • Французов В.К.
  • Пешнев Б.В.
  • Николаев А.И.
  • Федорова Е.В.
RU2117974C1
ПОЛИМЕРНАЯ КОМПОЗИЦИЯ 1995
  • Симонов-Емельянов И.Д.
  • Шембель Н.Л.
  • Куклина Л.А.
RU2098353C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВНУТРЕННИХ ДЕФЕКТОВ В ИЗДЕЛИЯХ ИЗ РЕАКТОПЛАСТОВ 1994
  • Шембель Н.Л.
  • Симонов-Емельянов И.Д.
  • Куклина Л.А.
RU2088910C1
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ КОМПОЗИЦИОННОЙ ПОЛИМЕРНОЙ МЕМБРАНЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ДИОКСИДА УГЛЕРОДА ИЗ ГАЗОВЫХ СМЕСЕЙ 1998
  • Дьякова М.Г.
  • Шевлякова Н.В.
  • Тверской В.А.
RU2146169C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 097 033 C1

Реферат патента 1997 года ИМИДАЗОЛСОДЕРЖАЩИЕ ИНГИБИТОРЫ КАТЕПСИН G-ИНДУЦИРОВАННОЙ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ

Изобретение относится к области медицины, конкретно к фармакологии. Сущность изобретения: имидазолсодержащие соединения общей формулы

а именно, метиловый эфир гистидина дихлоргидрат и лауроилгистамин ингибируют катепсин-G-индуцированную агрегацию тромбоцитов. Предлагаемые ингибиторы могут найти применение в качестве реагентов для контроля гемостаза, а также фармакологических средств для предотвращения тромбообразования, особенно при инфекционных и воспалительных заболеваниях. 1 табл.

Формула изобретения RU 2 097 033 C1

Применение имидазолсодержащих соединений общей формулы

где при R1 CH3-(CH2)10-CONH- R2 H-, а при R1 NH2- R2 -COOCH3,
в качестве ингибиторов катепсин G-индуцированной агрегации тромбоцитов.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1997 года RU2097033C1

Печь для непрерывного получения сернистого натрия 1921
  • Настюков А.М.
  • Настюков К.И.
SU1A1
Гринштейн Дж., Виннц М
Химия аминокислот и пептидов
- М.: Мир, 1965, с
ПРИБОР ДЛЯ СЪЕМКИ ПЛАНА МЕСТНОСТИ 1922
  • Мухортин Ф.Я.
SU548A1
Аппарат для очищения воды при помощи химических реактивов 1917
  • Гордон И.Д.
SU2A1
Синтез молекулярных систем на основе парафинов и их димеров, содержащих донорно-акцепторные заместители, с целью создания на их основе соединений для медицины, науки и техники: Отчет МИТХТ им.М.В.Ломоносова.// Всероссийский научно-технический и информационный центр "Сборник рефератов НИР и ОКР"
- М., 1994, сер
Печь для сжигания твердых и жидких нечистот 1920
  • Евсеев А.П.
SU17A1
Нивелир для отсчетов без перемещения наблюдателя при нивелировании из средины 1921
  • Орлов П.М.
SU34A1
Переносная печь для варки пищи и отопления в окопах, походных помещениях и т.п. 1921
  • Богач Б.И.
SU3A1
E.Seemuller et al
Eglin: Elastase-cathepsin inhibitor from Leeches "Method in enzymology", 1981, v
Капельная масленка с постоянным уровнем масла 0
  • Каретников В.В.
SU80A1
C, p
Байпас для паровозов 1923
  • Радзихобский Ф.Н.
SU804A1

RU 2 097 033 C1

Авторы

Евстигнеева Р.П.

Кубатиев А.А.

Рожкова Е.А.

Желтухина Г.А.

Ткаченко С.Б.

Даты

1997-11-27Публикация

1994-09-30Подача