СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПАТОЛОГИИ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА БОЛЬНОГО Российский патент 1997 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в диагностике фазы течения заболеваний желудочно-кишечного тракта, в том числе язвенной болезни, и определении индивидуальной чувствительности больного к развитию язвенной болезни, а также при динамическом наблюдении за больными данных групп.

Известны способы диагностики заболеваний, основанные на применении лектинов, связанных соответствующими метками, для выявления углеводных рецепторов лектинов в гистохимии (А.Д. Луцик, Е.С. Детюк, М.Д. Луцик. Лектины в гистохимии. Львов, 1989; О.А. Хомутовский, М.Д. Луцик, О.Ф. Передерей. Электронная гистохимия рецепторов клеточных мембран. Киев, Наукова думка, 1986; Н. П. Королев. Лектины инструмент для исследования биологических мембран. Успехи современной биологии. 1978, т. 86, вып. 3/6, с. 463).

Известно также применение лектинов, основанное на реакции гемагглютинации, в клинической диагностике ряда заболеваний, например онкологической и воспалительной природы (А. А. Осьмак, Е.Л. Голынская, В.И. Макаренко, Л.Р. Сокиро. "Лектины лекарственных растений в иммунодиагностике и прогнозировании". Изучение и применение лектинов. Тарту. 1989, т. 2, с. 217).

Известно также одно из наиболее перспективных направлений способы определения роли эндогенных лектинов в мембранной регуляции клеточных процессов (Н. П. Королев, Э.И. Выскребенцева. Функции эндогенных лектинов. Изучение и применение лектинов. Тарту, 1989, т. 1, с. 19).

Однако данные способы не предназначены для клинической диагностики заболеваний желудочно-кишечного тракта на ранних стадиях развития болезни (в доклинический период).

Наиболее близким к предлагаемому является способ определения фазы обострения язвенной болезни двенадцатиперстной кишки методом кислотных эритрограмм, заключающийся в определении оптической плотности опытного и контрольного образца взвеси эритроцитов после воздействия соляной кислотой [1]
Однако данный способ приемлем только при исследовании больного в стадии открытой язвы при высокой активности воспалительного процесса. Способ не дает представления о доклинических лабораторных признаках ухудшения состояния больного, не обладает диагностической значимостью для определения индивидуальной чувствительности больного к развитию язвенной болезни двенадцатиперстной кишки и его нельзя применять для определения групп риска развития язвенной болезни.

Целью изобретения является выявление доклинических признаков обострения заболеваний желудочно-кишечного тракта.

Поставленная цель достигается тем, что в способе диагностики состояния желудочно-кишечного тракта больного, включающем забор крови, разведение ее и контрольного образца в физрастворе до эталонной концентрации эритроцитов, воздействие на пробы соляной кислотой с последующим определением в установленном промежутке времени значений оптической плотности исследуемой и контрольной проб, по которым делают вывод о процентной концентрации эритроцитов, разделяя их на характерные группы по стойкости к гемолитическому воздействию соляной кислоты: повышенно-, пониженно-, среднестойкие, и по ним судят о состоянии желудочно-кишечного тракта, до воздействия на пробы крови соляной кислотой производят инкубацию их с лектинами в дозах пороговой концентрации, не вызывающей агглютинации эритроцитов, и о состоянии желудочно-кишечного тракта больного судят следующим образом: увеличение процентной концентрации повышенностойких эритроцитов указывает на ранние признаки язвенно-эрозивных повреждений слизистой оболочки, увеличение процентной концентрации пониженностойких эритроцитов указывает на ремиссию заболевания.

Кроме того, инкубацию проводят с лектинами глюкозоспецифичной группы.

Известных в науке и технике решений с данной совокупностью признаков не обнаружено. Свойства, которые проявляются у данного технического решения и обусловленные совокупностью этих признаков, не совпадают со свойствами известных решений. Таким образом, можно сделать вывод о нетривиальности решения.

Предложенный способ диагностики состояния желудочно-кишечного тракта в отличие от известных решений дает представление о доклинических лабораторных признаках ухудшения состояния больного.

Способ осуществляют следующим образом.

У больного осуществляют забор крови в количестве 1-2 мл и добавляют в 10-15 мл свежеприготовленного раствора 0,85 NaOH. Для проведения исследования проводят подготовку опытного образца: на фотоэлектроколориметре подбирают стандартную для данного исследования оптическую плотность раствора (0,700). Предварительно определяют индивидуальную концентрацию лектина, обладающую геммаглютинирующими свойствами по отношению к крови обследуемого больного методом реакции геммаглютинации в лунках. В лунках специальных пластмассовых планшетов для иммунохимических реакций приготавливают набор двукратных разведений лектинов в физиологическом растворе (1:2, 1:4, 1:8 и т.д.) 15 разведений. Затем в лунки вносят по несколько капель взвеси отмытых эритроцитов. Жидкость в лунках слегка встряхивают для равномерного распределения эритроцитов по объему каждой лунки. Взвесь оставляют на 60-120 мин, учет реакции геммаглютинации проводят по форме осадка: геммаглютинация произошла, если образовалась сплошная гомогенная розовая пленка, которая при встряхивании распадается на хлопья. При отсутствии реакции эритроциты, оседая, образуют в центре лунки ярко-красное пятно. Первым этапом исследования проводят определение гемолитической стойкости эритроцитов после воздействия соляной кислотой согласно предложенной ранее методике определения кислотных эритрограмм как в опытной пробе крови от больного, так и от здорового донора. Вторым этапом работы проводят инкубирование эритроцитов с лектинами. Перед проведением пробы инкубации с лектином осуществляют контрольную реакцию геммаглютинации эритроцитов с используемым лектином, в результате которой подбирают контрольную концентрацию лектина, не вызывающую геммаглютинацию. Инкубирование эритроцитов с лектинами осуществляют следующим образом: к 1 мл раствора крови добавляют 1 мл лектина в физиологическом растворе (лектин фасоли в концентрации 0,05 мг/мл, лектин сои 0,1 мг/мл, лектин гороха 0,18 мг/мл, Кон А 0,125 мг/мл). Инкубацию проводят в течение 30 мин. Затем эти эритроциты используют для получения эритрограммы. Процент эритроцитов, распавшихся в течение 30 с (% Э), рассчитывают по значениям оптической плотности

где D оптическая плотность;
ΔД разность оптических плотностей за 30 с;
ΣΔД сумма разностей оптических плотностей, которая принимается за 100
Э процент эритроцитов, разрушающихся за 30 с.

ΣΔД определяют, начиная с последнего минимального значения ΔД. По значениям ΔД рассчитывают процент сформулирующихся эритроцитов. По данным Э строят дифференциальную кривую гемолиза, которая называетвя эритрограммой. Для анализа полученных результатов используют значения количества эритроцитов (% ) по группам стойкости: П_нс пониженностойкие, С_с среднестойкие и П_вс повышенностойкие эритроциты. Для этого эритрограмму делят на три участка, соответствующих трем группам стойкости: до 2 мин, когда гемолиз еще не наступил, идет еще процесс сфоруляции, ΔД не входит в общую сумму, отражающую 100 рассчитывают процент сферулирующих эритроцитов и это значение откладывают на оси абсцисс; с 2 мин (последний минимум) начинается гемолиз и до 3 минут гемолизируются все "пониженностойкие" эритроциты, эта группа П_нс; с 3 до 4,5 мин гемолизируются "среднестойкие" эритроциты, т.е. группа С_с; с 4,5 до 7,5 мин группа П_вс.

Пример. 1. Свежую кровь для анализа методом эритрограмм берут из пальца донора. Пробу крови (0,2 мл) разводят 2 мл физиологического раствора (0,85 NaCl в дистиллированной воде), затем помещают в термостат. Включают нагреватель термостата (на 700 Вт) и фотоколориметр. Приборы подогревают 15-20 мин. Температура в баке термостата и в рабочей кювете перед проведением анализа должна быть 24^oC. На фотоэлектроколориметре (ФЭК) стрелку гальванометра устанавливают на значение "0", устанавливают красный светофильтр. В первое плечо колориметра помещают компенсирующую кювету с CuSO. Шунт чувствительности гальванометра ставят в положение "1". Левый отсчетный барабан устанавливают на нулевую отметку красной шкалы. После открытия шторки осветителя показатели гальванометра приводят к значению "0". Окончательную настройку производят после переключения шунта чувствительности в положение "2". Приведение показателей гальванометра проверяют после каждого анализа. Взвесь эритроцитов доводят до стандартной концентрации: шунт чувствительности гальванометра устанавливают в положение "1", левую шкалу барабана выводят до показания "0,700". Из пробирки с кровью, находящейся в термостате, набирают кровь и вводят ее, помешивая, в рабочую кювету с физиологическим раствором (разведение крови в рабочей кювете физраствором проводят до получения значения "0" по шкале гальванометра). Шунт гальванометра переводят в положение "2" и концентрацию эритроцитов доводят до стандартной "0,700" оптической плотности по шкале барабана. При отключенном гальванометре из рабочей кюветы отсасывают 2 мл взвеси, остальной раствор удаляют, а взятые 2 мл вновь вводят в рабочую кювету. Включают отсчет времени. Во время звукового сигнала вводят 2 мл 0,1 н. соляной кислоты в рабочую кювету, при этом шкалу барабана переводят на деление "0,450" (оптическая плотность HCl соответствует данному значению). Стрелку гальванометра приводят к "0" при вращении отсчетного барабана, в момент звукового сигнала снимают первый отсчет. В дальнейшем при постоянном снижении оптической плотности выводят стрелку из нулевого положения, удерживая стрелку гальванометра на значении "0". В момент звукового сигнала снимают показания оптической шкалы левого барабана. Запись проводят до конца гемолиза. При прекращении движения стрелки гальванометра фиксируют время окончания гемолиза (отсутствие отклонения стрелки в течение 1 мин). Показания шкалы барабана при этом будет соответствовать 0,020 0,060. Шунт чувствительности гальванометра переводят в положение "0", жидкость отсасывают, кювету промывают.

Пример 2. Больной Г. 11 лет.

Клинический диагноз: язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки. Фаза обострения. Рецидивирующее течение.

Эндоскопический диагноз: язва луковицы двенадцатиперстной кишки. Стадия открытой язвы. Антробульбит.

Экспресс рН-метрия: выраженная базальная гиперацидность
Особенности клинической картины заболевания: в настоящее время отмечается усиление болей в эпигастральной области, интенсивные, усиливающиеся перед приемом пищи, возникающие в ночное время. Болевой синдром купируется приемом антацидов. Имеется наследственная отягощенность по язвенной болезни двенадцатиперстной кишки.

Больному проведено исследование крови методом кислотных эритрограмм до и после инкубации пробы с глюкозоспецифичными лектинами гороха, фасоли, Кон А.

Результаты анализа приведены в табл. 1. Процент эритроцитов по группам стойкости отражен в табл. 2.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в диагностике фазы течения заболеваний желудочно-кишечного тракта, в том числе язвенной болезни, и определении индивидуальной чувствительности больного к развитию язвенной болезни, а также при динамическом наблюдении за больными данных групп. Целью изобретения является выявление доклинических признаков обострения заболеваний желудочно-кишечного тракта. Поставленная цель достигается тем, что в способе диагностики состояния желудочно-кишечного тракта больного, включающем забор крови, разведение ее и контрольного образца в физрастворе до эталонной концентрации эритроцитов, воздействие на пробы соляной кислотой с последующим определением в установленные промежутки времени значений оптической плотности исследуемой и контрольной проб, по которым делают вывод о процентной концентрации эритроцитов, разделяя их на характерные группы по стойкости к гемолитическому воздействию соляной кислоты: повышенно-, пониженно-, среднестойкие, и по ним судят о состоянии желудочно-кишечного тракта, до воздействия на пробы крови соляной кислотой производят инкубацию их с лектинами в дозах пороговой концентрации, не вызывающей агглютинации эритроцитов, и о состоянии желудочно-кишечного тракта больного судят следующим образом: увеличение процентной концентрации повышенностойких эритроцитов указывает на ранние признаки язвенно-эрозивных повреждений слизистой оболочки, увеличение процентной концентрации пониженностойких эритроцитов указывает на ремиссию заболевания. Кроме того, инкубацию проводят с лектинами глюкозоспецифичной группы. 1 з. п. ф-лы, 2 табл.

1. Способ диагностики патологии желудочно-кишечного тракта больного, при котором осуществляют забор крови и ее разведение по стандарту, воздействуют на пробы соляной кислотой и определяют процентную концентрацию эритроцитов, разделяя их на характерные группы по стойкости к гемолитическому воздействию соляной кислоты: повышенно-, средне- и пониженностойкие, отличающийся тем, что до воздействия на пробы крови соляной кислотой производят инкубацию их с лектинами в дозах пороговой концентрации, не вызывающей агглютинации эритроцитов, и при увеличении процентной концентрации повышенностойких эритроцитов диагностируют ранние язвенно-эрозивные повреждения слизистой оболочки, при увеличении процентной концентрации пониженностойких эритроцитов диагностируют ремиссию заболевания. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что инкубацию проводят с лектинами глюкозоспецифической группы.