СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ОПУХОЛИ К ЛУЧЕВОЙ ТЕРАПИИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ Российский патент 1997 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и может найти применение при комбинированном и комплексном лечении больных раком молочной железы (РМЖ).

В качестве ближайшего аналога избран способ прогнозирования чувствительности опухоли к лучевой терапии по уровню гемоглобина периферической крови. Однако данный способ весьма ограничен в применении и не отражает индивидуальную чувствительность опухоли к лучевой терапии.

Существуют также следующие методы прогнозирования чувствительности опухоли к облучению.

I. Метод клонирования опухолевых клеток in vitro и в диффузных камерах. Данным методом определяют
а) факторы, обуславливающие врожденную радиорезистентность опухолей (особенности морфологии, ферменты и т.д.),
б) способность клеток к восстановлению после облучения. Для этого клонирование производят в разное время в процессе лучевой терапии. По снижению клоногенной способности клеток судят об эффективности лучевой терапии. (Barendsen Z. 1980 г. Георгиев И. 1979 г. Шамаев В.И. 1980 г.).

II. Цитофлурометрические и иммунохимические методы. Изучают изменение пролиферативной активности опухолевых клеток в процессе облучения. Определяют характер и степень повреждений клеток, изменения в ядрах, количество ДНК и РНК, нейтральных и кислых МПС, ферментов и т.д. (И.И. Пелевина, А.С. Саенко, 1988 г. Мазер К. и соавт. 1985 г.).

III. Метод in vivo. Исследуемые опухоли трансплантируют иммунодефицитным животным. Животных облучают. Чувствительность клеток опухоли к облучению оценивают по уменьшению размеров опухоли и увеличению времени удвоения массы опухоли.

IV. Метод инкубации опухолевых клеток с меченными предшественниками ДНК in vitro. Определяют долю ДНК-синтезирующих (индекс метки) и пролиферирующих клеток (фракция роста). По степени их снижения в процессе получения судят об эффективности лучевой терапии (А.С. Саенко, И.И. Пелевина, 1988 г.)
Вышеперечисленные методы с достаточно большой вероятностью (70-100%) прогнозируют опухоли, резистентные к лучевой терапии. Вероятность же прогнозирования чувствительных опухолей намного ниже (50-80%). При высокой чувствительности опухоли в конкретной модели эта же опухоль в организме человека может быть резистентной вследствие наличия зон гипоксии, недостатка питательных веществ и т.д. Кроме этого, на результаты исследований in vitro оказывают влияние состав питательной среды, газовой фазы и другие факторы. При исследованиях in vivo иммунологическое взаимодействие между трансплантатом и организмом животного реципиента.

V. Математический метод прогнозирования чувствительности опухоли к лучевой терапии (метод Блера-Дэвидсона-Корогодина, модели F. Ellis, Z. Cohen и др.). С помощью ЭВМ по предложенным математическим формулам рассчитывают вероятность чувствительности опухоли к облучению. При этом учитываются гистологическое строение опухоли, стадия процесса, продолжительность болезни, возраст, гормональный фон и другие факторы. Если брать во внимание, что эффективность лучевой терапии зависит от индивидуальной чувствительности опухоли к облучению и от точности подведения очаговой дозы (по данным ВОЗ отклонение от очаговой дозы на 5% наблюдают у 60% больных, на 10% у 18% больных, а отклонение от очаговой дозы на 5% приводит к клиническим результатам), то становится ясно, что рассчитать эффективность лучевой терапии у конкретного больного при помощи математического метода весьма проблематично (О.Н. Денисенко, 1988 г.).

Таким образом, существующие методы прогнозирования чувствительности опухоли к облучению сложны, дорогостоящи и не отличаются высокойй точностью.

Новизна данного изобретения заключается в разработке простого и доступного способа прогнозирования чувствительности опухоли РМЖ к лучевой терапии, суть которого состоит в том, что производят анализ динамики изменения количества эозинофилов (Э.) в периферической крови в процессе лучевой терапии и при значениях Э.≥4% при количестве лимфоцитов ≥0,3 г/л на 15-30 день от начала ДЛТ прогнозируют высокую чувствительность опухоли к облучению (лучевой патоморфоз III-IV степени), а при значениях Э.≅3% при тех же условиях прогнозируют слабую чувствительность опухоли РМЖ к лучевой терапии (лучевой патоморфоз I-II степени).

Принцип предлагаемого способа основан, по-видимому, на том, что в результате деструкции опухолевых клеток под воздействием лучевой терапии происходит освобождение медиаторов тучных клеток, что, как известно (Гриншпун Л. Д. Виноградова Ю.Е. 1983 г.), приводит к привлечению в очаг Э. которые, с одной стороны, дезактивируют гистамин и другие медиаторы тучных клеток, а с другой стороны, способствуют процессам фиброобразования. Чем чувствительнее опухоль к облучению, чем выраженнее деструктивные процессы в ней, тем выше будут значения Э. в периферической крови.

Необходимо добавить, что в литературе не встречались работы, связанные с изучением влияния лучевой терапии на количество Э. периферической крови.

Предлагаемый способ заключается в следующем: у больных РМЖ определяют изменения количества Э. в периферической крови в процессе лучевой терапии. Для этого необходимо только общий анализ крови (ОАК), который берется перед началом ДЛТ, на 8-10 день, 15-20 день и 25-30 день от начала облучения.

Обследовано 76 больных РМЖ, получавших предоперационную лучевую терапию на первом этапе комбинированного или комплексного лечения. Облучение проводилось на аппарате Луч-1 с 5 полей (1-2 поле на первичную опухоль, 3-4-5 поле на регионарные лимфоузлы: подмышечные, поднадключичные, парастернальные). РД 2 гр. СД на опухоль молочной железы 42-46 гр. на лимфоузлы 36-42 гр. Длительность облучения составила 30-35 дней. На втором этапе, через 20-30 дней после окончания предоперационной ДЛТ больным проводилось оперативное лечение. В основном выполнялись типичные радикальные мастэктомии, в 2-х случаях выполнены простые мастэктомии и в 5-ти широкие секторальные резекции с лимфоаденэктомией. Эффективность проводимой лучевой терапии оценивалась морфологическим способом, по степени лучевого патоморфоза опухоли. Лучевой патоморфоз III-IV степени оценивался как высокая чувствительность опухоли к облучению, I-II степени как слабая чувствительность опухоли к облучению. Распределение больных в зависимости от стадии процесса и степени лучевого патоморфоза опухоли представлено в табл.1. ОАК у больных брали до начала лучевой терапии, на 8-10 день, 15-20 день и 25-30 день от начала ДЛТ.

Излучалась динамика изменений количества палочкоядерных лейкоцитов, Э. лимфоцитов крови в процессе лучевой терапии.

Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием критерия . При проверке различий средних рассматривался уровень значимости P 0,05 для двусторонней критической области с t_кр 1,96. Результаты представлены в табл. 2 и 3.

Проведенные исследования выявили, что у больных РМЖ в процессе лучевой терапии наблюдаются изменения количества Э. в периферической крови, причем характер данных изменений в группе больных с лучевым патоморфозом III-IV степени (1 группа больных) и I-II степени (2 группа больных) различен. В 1 группе больных на 15-30 день от начала ДЛТ наблюдалось повышение абсолютного и относительного количества Э. по сравнению с исходным уровнем. Во 2 группе больных количество Э. в процессе лечения практически не менялось.

На основе этих данных разработан новый способ прогнозирования чувствительности опухоли РМЖ к лучевой терапии.

При анализе изменений количества Э. в процессе лучевой терапии выявлено следующее.

1. Исходный уровень Э. в 1-й и 2-й группах больных одинаков.

2. На 8-10 день от начала ДЛТ показатели Э. в обеих группах не отличаются друг от друга и от исходного уровня.

3. На 15-30 день от начала лучевой терапии в 1-й группе больных наблюдается повышение количества Э. по сравнению с исходным уровнем. Во 2-й группе больных этого не происходит. Характерным отличием между двумя группами (см. табл. 4) является то, что в первой группе больных на 15-30 день от начала предоперационной ДЛТ в 21-м случае (50% больных 1-й группы) при количестве лимфоцитов ≥0,3 г/л количество Э. было ≥4% Во второй группе при количестве лимфоцитов ≥0,3 г/л количество Э. на 15-30 день от начала ДЛТ у всех больных было ≅3%
Проведенный факторный анализ (см. табл. 5) для выявления связей между показателями крови показал наличие прямой зависимости между количеством Э. и количеством лимфоцитов (эти два показателя объединились в 1-м факторе, коэффициент парной корреляции при этом составил r₆ 1, r₄ 0,38-0,53). Другими словами при низких значениях лимфоцитов в периферической крови повышения количества Э. не происходит. С этим, по-видимому, связано то, что у 19-ти больных 1-й группы с высокой чувствительностью опухоли к облучению не наблюдалось повышения количества Э. в процессе лучевой терапии. У 85% этих больных отмечено снижение количества лимфоцитов < 0,3 г/л. Даже если в дальнейшем происходило повышение количества лимфоцитов, то количество Э. в данной группе больных все равно оставалась ниже 3%
Во второй группе больных в 3-х случаях количество Э. на 15-20 день от начала ДЛТ было ≥4% Во всех 3-х случаях это наблюдалось при количестве лимфоцитов < 0,3 г/л.

4. Количество лимфоцитов в процессе лечения уменьшилось в обеих группах. Количество палочкоядерных лейкоцитов к концу лучевой терапии несколько увеличилось. Отличий между 1-й и 2-й группами больных не выявлено.

5. Количество моноцитов и гемоглобина крови в процессе лечения существенно не менялось.

Пример 1. Больная М. 57 лет 25/I-93 г. обратилась в ООД г. Оренбурга с жалобами на образование в правой молочной железе. 25/I-93 пункция опухоли. Цитология N 2024: клетки рака молочной железы. С 26/I-20/II-93 г. больной проведен курс предоперационной ДЛТ. СД на опухоль 42 гр. на л/узлы 36-38 гр.

ОАК от 26/I-93 133 г/л, 4 г/л, п3 с78 л16 м3 РОЭ 20 мм/ч;
ОАК от 06/II-93 130 г/л, 4,55 г/л, п3 с81 э2 л10 м4 РОЭ 21 мм/ч;
ОАК от 20/II-93 133 г/л, 7 г/л, п3 с73 э5 л11 м5 РОЭ 32 мм/ч.

10/III-93 больной произведена операция РМЭ по Пейти. Гистология N 6938-39: инфильтрирующий РМЖ с признаками лучевого патоморфоза (ПЛП) III ст. В л/узлах метастазов не найдено.

Диагноз: Ca glandulae mammae dextr T₃N₀M₀.

Как видно из данного примера, при высокой чувствительности опухоли к лучевой терапии на 25 день от начала ДЛТ наблюдается повышение абсолютного (0,35 г/л) и относительного (5% ) количества Э. Количество лимфоцитов у данной больной в процессе лечения колебалось от 0,45 до 0,77 г/л.

Пример 2. Больная Б. 53 лет 21/VI-91 обратилась в ООД с жалобами на опухоль в правой молочной железе. 21/VI-91 пункция опухоли. Цитология N 2681: клетки солидно-железистого рака. С 24/VI по 26/VII-93 больной проведена предоперационная ДЛТ. СД на опухоль 46 гр. на л/узлы 38-40 гр.

ОАК от 24/VI-91 152 г/л, 4,8 г/л, п2 с52 л36 м10 РОЭ 24 мм/ч;
ОАК от 04/VII-91 125 г/л, 3,15 г/л, п2 с64 л22 э5 м7 РОЭ 18 мм/ч;
ОАК от 15/VII-91 137 г/л, 2,75 г/л, п4 с86 э1 л7 м2 РОЭ 15 мм/ч;
ОАК от 24/VII-91 117 г/л, 3,15 г/л, п9 с73 л14 м4 РОЭ 22 мм/ч.

20/VIII-91 больной произведена операция РМЭ справа. Гистология N 18463-72: РМЖ с ПЛП IV ст. и метастазами в 2-х подмышечных л/узлах.

Диагноз: Ca glandulae mammae dextr. T₂N₂M₀.

Из данного примера видно, что при снижении количества лимфоцитов менее 0,3 г/л повышения количества Э. на 15-30 день от начала ДЛТ не происходит. У данной больной количество лимфоцитов на 20 день от начала лучевой терапии составило 0,19 г/л, Э. 0,03 г/л или 1% В последующем, на 29 день от начала ДЛТ, количество лимфоцитов увеличилось до 0,44 г/л, повышения же количества Э. не произошло, несмотря на высокую чувствительность опухоли к облучению.

Пример 3. Больная Б. 59 лет 15/I-93 обратилась в ООД с жалобами на образование в левой молочной железе. 15/I-93 пункция опухоли. Цитология N 1137-38: клетки солидно-железистого рака. С 19/I по 19/II больной проведен курс предоперационной ДЛТ. СД на опухоль 46 гр. на л/узлы 38-40 гр.

ОАК от 19/I-93 177 г/л, 5,6 г/л, п4 с74 л17 м5 РОЭ 14 мм/ч;
ОАК от 29/I-93 148 г/л, 3,8 г/л, п2 с86 э1 л9 м2 РОЭ 12 мм/ч;
ОАК от 11/II-93 156 г/л, 5,3 г/л п2 с79 э1 л11 м6 РОЭ 12 мм/ч;
ОАК от 19/II-93 142 г/л, 3,15 г/л, п1 с82 э1 л12 м4 РОЭ 5 мм/ч.

22/III-93 больной произведена операция РМЭ по Пейти слева. Гистология N 8222-30: инфильтрирующий РМЖ с ПЛП II ст. и метастазами в 3-х подмышечных и 3-х подключичных л/узлах.

Диагноз: Ca glandulae mammae Sinistr. T₃N₃M₀.

Таким образом, при низкой чувствительности опухоли к облучению повышения количества эозинофилов в процессе лучевой терапии не происходит. Количество лимфоцитов у данной больной колебалось от 0,34-0,95.

Пример 4. Больная А. 65 лет 10/III-93 обратилась в ООД с жалобами на опухоль в правой молочной железе. 10/III-93 пункция опухоли. Цитология N 57-58: клетки железистого рака. С 11/III по 09/IV-93 больной проведена предоперационная ДЛТ. СД на опухоль 46 гр. на л/узлы 40 гр.

ОАК от 11/III-93 124 г/л, 3,8 г/л, п2 с76 э1 л17 м4 РОЭ 26 мм/ч;
ОАК от 17/III-93 121 г/л, 3,85 г/л, п2 с86 л8 м4 РОЭ 18 мм/ч;
ОАК от 31/III-93 120 г/л, 3,6 г/л, п3 с83 э5 м2 л7 РОЭ 20 мм/ч;
ОАК от 06/IV-93 109 г/л, 2,75 г/л, п2 с85 э1 л7 м5 РОЭ 20 мм/ч.

07/V-93 больной произведена РМЭ по Пейти слева. Гистология N 12729-37: инфильтрирующий РМЖ с ПЛП II ст. и метастазами в 3-х подмышечных и 2-х подключичных л/узлах.

DS: Ca gland mammae dextr T₃N₃M₀.

Из данного примера видно, что на 20-й день от начала ДЛТ у больной с низкой чувствительностью опухоли к облучению наблюдалось повышение количества Э. до 0,17 г/л (5%), но количество лимфоцитов при этом было ниже 0,3 г/л (0,26 г/л).

Таким образом, повышение количества Э. ≥4% на 15-30 день от начала облучения при количестве лимфоцитов ≥0,3 г/л может служить прогностическим тестом для определения индивидуальной чувствительности опухоли к лучевой терапии. Данный способ прост, доступен, не требует никаких дополнительных затрат и вероятнее всего может применяться и при других локализациях злокачественных опухолей.

Список литературы.

1. Красюк Н.М. Эозинофилии у больных злокачественными новообразованиями. Врачебное дело, 1988 г. N 12, с. 34.

2. Абрамычев А.И. Гриншпун Л.Д. Опухолевые эозинофилии. Терапевтический архив, т. 58, 1986 г. N 9, с. 80-83.

3. Абрамычев А.И. Иванов В.Г. Гриншпун Л.Д. Эозинофилии различной природы. Терапевтический архив, т. 57, 1985 г. N 7, с. 88-91.

4. Современные методы оценки эффективности лучевой терапии. Обнинск, 1988 г.

а) Ю.С.Мардынский, В.Г.Андреев. Прогностическое значение регрессии опухоли в процессе лучевой терапии.

б) И. И. Пелевина, А.С.Саенко. Перспективы использования методов экспериментальной радиобиологии для оценки эффективности лучевой терапии.

в) И.А.Изотова. Применение радионуклидных методов определения гормонального гемеостаза для оценки эффективности лечения больных раком легкого.

5. А. С. Саенко, И.И.Пелевина. Прогнозирование реакции опухоли на облучение. XI Всесоюзный съезд рентгенологов и радиологов, Обнинск, 1984 г.

6. Barendsen Z.W. Analysis of tumor responses by exsion and in vitro assay of cellular clonogenic capacity. Brit. Z.Cancer, 1980, N 4, p 209-216.

7. Георгиев И. Новые возможности за использоване на клеточные модели в культури в експеринтальната канцерогенеза и терапия на рак. III Национальный когресс по онкологии, Варна, 1979 г. с. 110.

8. В. И.Шамаев. Метод диффузных камер "IN VIVO" в онкологических исследованиях. Экспериментальная онкология, 1980 г. N 3, с. 8-16.

9. Suit H.D. Prediction of response of tumors to radiation treatmeut.// Abstract of the Jhird. Jnternational Meeting on Progress in Radio-Oncoljgy. Vienna. 1985, p. 5.

Использование: в области медицины, в частности в онкологии. Сущность изобретения: производят анализ динамики изменений количества эозинофилов периферической крови в процессе лучевой терапии и при значении эозинофилов ≥4%, при количестве лимфоцитов ≥0,3 г/л на 15-30 день от начала лучевой терапии прогнозируют высокую чувствительность опухоли к облучению (лучевой патоморфоз III-IV степени), а при значении эозинофилов ≅3% при тех же условиях прогнозируют слабую чувствительность опухоли к облучению (лучевой патоморфоз I-II степени). Предложенный способ прост, доступен, не требует дополнительных средств и может найти применение при комбинированном и комплексном лечении больных РМЖ. 5 табл.

Способ прогнозирования чувствительности опухоли к лучевой терапии у больных раком молочной железы путем исследования показателей периферической крови, отличающийся тем, что определяют количество эозинофилов на 15 30 день от начала лучевой терапии и при количестве эозинофилов не менее 4% при количестве лимфоцитов не менее 0,3 г/л прогнозируют высокую чувствительность опухоли к облучению (лучевой патоморфоз III IV степени), а при значениях эозинофилов не более 3% и при том же количестве лимфоцитов прогнозируют слабую чувствительность опухоли к облучению (лучевой патоморфоз I II степени).