СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ЛИМФОИДНЫХ УЗЕЛКОВ В ТОТАЛЬНЫХ АНАТОМИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТАХ Российский патент 1998 года по МПК G01N33/48 G01N1/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии.

Наиболее близким к предложенному по техническому решению задачи является метод тотальной окраски по Т.Гельману (1921, 1953 с использованием раствора гематоксилина Гарриса).

При данной способе использовались куски расплавленного кишечника, которые помещались на 2 5 дней в 2 3% уксусную кислоту, после чего промывают в проточной воде в течение 2 3 ч и далее 12 60 ч окрашивают в растворе гематоксилина Гарриса; 12 24 ч дифференцируют в 2 3% растворе уксусной кислоты.

К недостаткам данного способа относятся:
большая продолжительность проведения метода выявления лимфоидных узелков;
лимфоидные узелки выявляются в пленочных препаратах;
не выявляются кровеносные сосуды и нервы;
не позволяет изучить взаимоотношение лимфоидных узелков с элементами субстрата.

Целью изобретения является устранение имеющихся недостатков метода с применением растворов гематоксилина и выявление лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах разных размеров и толщины в макромикроскопическом поле видения.

Поставленную цель нам удалось достичь, применяя для фиксации 1,5 3% раствор сульфосалициловой кислоты в течение 1,5 2 ч, в зависимости от толщины и плотности изучаемого объекта. Для окрашивания использовали реактив Шиффа (фуксинсерную кислоту, разведенную сернистой водой в соотношении 1:5) в течение 6 12 ч.

Предложенный нами способ выявления лимфоидных узелков дает стабильные результаты, полностью исключает артефакты, не требует дорогостоящих и дефицитных реактивов, намного сокращает сроки обработки материала, позволяет проследить вариабельность их топографического расположения, вариабельность количества и размеров в различных возрастных периодах жизни человека. Способ позволяет выявить их взаимоотношение с элементами субстрата, а также с нервами и кровеносными сосудами; глубину их расположения. Других подобных способов светооптического макромикроскопического выявления лимфоидных узелков нами не установлено.

Исходным материалом для выявления лимфоидных узелков в предлагаемом способе служили тотальные препараты пищевода, трахеи, оболочки мошонки взрослых, плодов и новорожденных, полученные в различные сроки после смерти (от 12 до 24 ч). Способ испытан на 30 анатомических препаратах.

Способ осуществляется следующим образом:
исследуемый материал хорошо промывается в холодной проточной воде в течение часа;
фиксация препарата в 1,5 3% растворе сульфосалициловой кислоты в течение 1 2 ч (в зависимости от толщины и плотности изучаемого объекта);
препарат полощут в 2 3 порциях холодной дистиллированной воды;
препарат помещают в реактив Шиффа на 6 12 ч, окрашивание происходит в темноте, в плотно закупоренном сосуде при температуре 3 4^oC; объем красителя превышает объем препарата в 2 3 раза;
препарат ополаскивают в 2 3 порциях сернистой воды;
препаровка под стереоскопическим микроскопом МБС-9; просветление препарата в смеси глицерина и сернистой воды в соотношении 1:1; препарат заключают в чистый глицерин и хранят при температуре 4 6^oC.

Пример выявления лимфоидных узелков в препаратах пищевода.

Берем любой участок пищевода вместе с окружающими образованиями (длина не имеет значения, можно на всем протяжении) и промываем 1 1,5 ч в проточной холодной воде; далее пищевод или вскрывается на всем протяжении, или выворачивается слизистой кнаружи. Препарат фиксируют в 2% р-ре сульфосалициловой кислоты в течение 1 ч, после чего полощут в двух порциях холодной дистиллированной воды. Для окрашивания препарат помещают в реактив Шиффа на 6 ч; окрашивание происходит в темноте при температуре 4^oC в плотно закупоренном сосуде. Объем красителя превышает объем препарата в 2 раза; препарат ополаскивают в 2-х порциях сернистой воды и далее изучают под стереоскопическим микроскопом МБС-9; просветление в смеси глицерина и сернистой воды в соотношении 1:1; заключают в чистый глицирин и хранят в холодильнике.

Другой пример: для исследования берем тотальный препарат мошонки новорожденного, препарат промывают от крови холодной водопроводной водой в течение 40 мин, далее фиксируют в 3% р-ре сульфосалициловой кислоты в течение 1,5 ч; полощут в двух порциях дистиллированной воды. Препарат помещают в реактив Шиффа на 12 ч; окрашивание проводят в темноте при температуре 4^oC в плотно закрытом сосуде. Объем красителя превышает объем препарата в 3 раза. Далее препарат ополаскивают в двух порциях сернистой воды, препаровка под стереоскопическим микроскопом МФС-9, просветление в смеси глицерина и сернистой воды; препарат заключает в глицерин (см. фиг. 1, 2: фото 1 - групповое скопление мелких лимфоидных узелков в мясистой оболочке яичка плода человека 7 месяцев. Об. 2, ок. 6; фото 2 лимфоидные узелки влагалищной оболочки яичка. Об. 2, ок. 6).

Таким образом, предложенный способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах прост в исполнении, не требует дорогостоящих реактивов, а выполнение предлагаемых оптимальных условий позволяет получить качественные тотальные препараты для макромикроскопического изучения узелков лимфоидной ткани различных органов и систем и может быть рекомендован для широкого использования в морфологической практике для изучения органов иммунной системы.

Использование: в медицине, а именно в анатомии, патологической анатомии и может применяться для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах в макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии. Сущность изобретения: для выявления лимфоидных узелков препарат предварительно промывают, а фиксацию проводят в 1,5 - 3% растворе сульфосалициловой кислоты в течение 1 - 2 ч, окрашивают реактивом Шиффа в темноте при температуре 3 - 4^oC в течение 6 - 12 ч в зависимости от характера и толщины объекта, ополаскивают в 2/3 порциях сернистой воды и затем заключают в чистый глицерин. Способ позволяет изучить особенности топографического расположения лимфоидных узелков, особенности их строения формы и размеры в различные возрастные периоды, взаимоотношения с элементами субстрата /нервами, лимфатическими и кровеносными сосудами/ в макроскопическом поле видения. 2 ил.

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах, включающий фиксацию, промывание и окрашивание препарата, отличающийся тем, что предварительно препарат промывают, а фиксацию проводят в 1,5 3,0% -ном растворе сульфосалициловой кислоты в течение 1 2 ч, затем ополаскивают дистиллированной водой, окрашивают реактивом Шиффа в темноте в течение 6 12 ч при температуре 3 4^oС, ополаскивают в 2 3 порциях сернистой воды и заключают в чистый глицерин.