Способ выявления микроциркуляторного русла и лимфоидной ткани кишечника Советский патент 1991 года по МПК A61B10/00 

00 00

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к морфологии, и может быть использовано для диагностики патологии желудочно-кишечного тракта у лабораторных животных в эксперименте и в ветеринарии. Цель- повышение информативности и наглядности за счет синтомиче- ской оценки и экономия сырьевой базы за счет совместной реализации способов. Через брюшную аорту проводят промывку сосудов кишечника раствором глюкозы с гепарином с предварительной перевязкой воротной вены и перерезкой ее дистальнее лигатуры. Пережимают брюшную аорту и под визуальным контролем заполняют сосу- ды кишечника 0,15-ным раствором азотно- кислотного серебра. Наливку производят при одновременном воздействии на кишечник ультразвука с частотой колебаний 830 кГц и помещении органа в физиологический раствор при 37°С в течение всей наливки. Инъекцию прекращают после появления раствора азотнокислого серебра в приносящих лимфатических сосудах брыжеечных лимфоузлов. Вводят цветную массу соответствующей концентрации в зависимости от конкретных задач исследования. Кишечник отсекают. После извлечения кишечника из брюшной полости серебро восстанавливают на свету или с помощью кварцевой лампы. Кишечник обрабатывают 1,5%-ным раствором хлористого натрия, промывают, просветляют 1%-ным раствором соляной кислоты в течение 1- 2 сут окрашивают гематоксилином Гарриса, затем повторно обрабатывают 0,1%-ным раствором соляной кислоты в течение 1-2 ч для дифференцировки лимфоидной ткани (лимфоидных узелков). Анализ результатов проводят с помощью микроскопа. (Л С о 00

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к морфологии, и может быть использовано для диагностики патологии желудочно-кишечного тракта у лабораторных животных в эксперименте и в ветеринарии.

В советской и зарубежной литературе нет описания аналогичных методик, позволяющих на одном биологическом объекте (препарате) последовательно выявлять микроциркуляторное русло, ассоциированную с кишечником лимфоидную ткань и их взаимоотношение.

Цель изобретения - повышение информативности и наглядности путем синтетической оценки и экономии сырьевой базы за счет совместной реализации способов, что достигается введением в сосуды кишечника азотнокислого серебра наркотизированному животному через брюшную аорту при

одновременном воздействии на кишечник ультразвука в теплом физрастворе и последующей обработке препаратов по модифи- цированому методу Гельмана: кишечник отсекают, промывают, а затем просветляют 1 %-ным раствором соляной кислоты в течение 1-2 суток, окрашивают гематоксилином Гарриса не более 12 ч, затем дифференцируют в 0,1 %-ном растворе соляной кислоты в течение 1-2 ч.

Способ осуществляют следующим образом.

После срединной лапартомии у животного через брюшную аорту проводят промывку сосудов кишечника раствором глюкозы с гепарином с предварительной перевязкой воротной вены и перевязкой ее дистальнее лигатуры. Затем пережимают брюшную аорту и под визуальным контролем заполняют сосуды кишечника 0,15%- ным раствором азотнокислого серебра. Для снятия спазма сосудов, предохранения их разрыва, ускорения заполнения интерстиция и лимфатических сосудов наливку произво- .дят при одновременном воздействии на кишечник ультразвука с частотой колебаний 830 кГц и помещении органа в теплый физраствор (37°С). Ультразвуком воздействуют в течение всей наливки. Иньекцию прекращают после появления раствора азотнокислого серебра в приносящих лимфатических сосудах брыжеечных лимфоузлов. С целью кон- страстирования того или иного звена кровеносного микроциркуляторного русла вводится цветная масса соответствующей концентрации в зависимости от конкретных задач исследования. Кишечник отсекают. После извлечения кишечника из брюшной полости серебро восстанавливают на свету или с помощью кварцевой лампы. Кишечник обрабатывают 1,5-ным раствором хлористого натрия, промывают, просветляют 1%- ным раствором соляной кислоты в течение 1-2 суток, окрашивают гематоксилином Гарриса, затем повторно обрабатывают 0,1 %-ным раствором соляной кислоты в течение 1-2 ч для дифференцировки лимфоид- ной ткани (лимфоидных узелков). Анализ результатов проводят с помощью микроскопа.

Пример . Под эфирным наркозом у крысы проводят срединную лапаротомию, препарируют брюшную аорту. В область бифуркации аорты вводят иглу с пластиковым катетером и фиксируют ее с помощью лигатуры. Выделяют структуры ворот печени, накладывают зажим на воротную вену, ниже зажима пересекают ее. Промывают сосуды 5%-ным раствором глюкозы (37°С) с гепарином (5000 ЕД на 0,5 мл глюкозы) через катетер в брюшной аорте. Пережимают брошную аорту ниже диафрагмы. Крысу помещают в чашку с теплым физиологическим раствором (37°С) и воздействуют на кишечник ультразвуком с помощью аппарата УТП-1 в непрерывном режиме с частотой колебаний 830 гКц. Через тот же катетер заполняют сосудистое русло 0,15%-ным раствором азотнокислого серебра. Затем с

0 целью контрастирования того или иного звена кровеносного микроциркуляторного русла вводят цветную массу соответствующей концентрации в зависимости от конкретных задач исследования. Извлекают

5 органы желудочно-кишечного тракта из брюшной полости, промывают их проточной водой. С помощью солнечного луча или кварцевой лампы восстанавливают серебро в сосудах в течение 5 мин. Заполняют ки0 шечник водой и исследуют сосудистое русло серозной и мышечной оболочек под бинокулярной лупой. Кишечник разрезают по линии прикрепления брыжейки, отделяют брыжеечные лимфоузлы, помещают кишеч5 ник на 1 ч в 1,5%-ный раствор хлористого , натрия, кратковременно промывают, а за- тем на 24 ч в 1%-ный раствор соляной кислоты. Промывают препараты в проточной воде 3 ч, затем обрабатывают гематоксили0 ном Гарриса. После сильного прокрашивания помещают препараты с целью дифференцировки лимфоидной ткани (лимфоидных узелков) на 1 ч в 0,1 %-нуюсоляную кислоту. Вновь исследуют препараты, но

5 уже со стороны слизистой оболочки кишечника под бинокулярной лупой с целью изучения одиночных и групповых фолликулов и их взаимоотношений с сосудистым руслом. Расслаивают стенку кишечника, послойно

0 изучают те же структуры, а также микроцир- куляторное русло лимфоидных фолликулов. Одновременно забирают часть кусочков кишечника на гистологическое исследование. Для консервации используют раствор Кай5 зерлинга.

Результаты окраски: все звенья микроциркуляторного русла и лимфоидная ткань кишечника выявляются одновременно. Звенья сосудистого русла хорошо диферен0 цируются, лимфоидные узелки четко контури- руют на фоне неокрашенной окружающей ткани, всегда видны взаимоотношения микроциркуляторного русла с лимфоидной тканью кишечника.

5 Положительный эффект состоит в повышении информативности способа, когда все звенья микроциркуляторного русла и лимфоидная ткань кишечника выявляются одновременно. Повышается достоверность результатов за счет суправитально иньекции сосудов, дифференцирования звеньев сосудистого русла и четкого контурирова- ния лимфоидных узелков на фоне неокрашенной окружающей ткани. Увеличивается наглядность, когда возникает возможность рассмотреть структуру микроциркуляторно- го русла и его взаимосвязи с лимфоидной тканью кишечника. Одновременно сокращается вдвое число лабораторных животных и время исследований за счет использования одного и того же препарата (а не двух различных) для одновременного выявления микроциркуляторного русла и (лимфоидной ткани . кишечника.

Формула изобретения Способ выявления микроциркуляторного русла и лимфоидной ткани кишечника путем инъекции его сосудов раствором

0

5

азотнокислого серебра и выявлением лимфоидной ткани по методу Гельмана, отличающийся тем, что, с целью повышения информативности и наглядности путем синтетической оценки и экономии сырьевой базы за счет совместной реализации способов, наливку сосудов кишечника азотнокислым серебром производят через брюшную аорту In vitro, одновременно воздействуют на кишечник, помещенный в теплый физиологический раствор, ультразвуком, затем кишечник отсекают, промывают, просветляют 1 %-ным раствором соляной кислоты в течение 1-2 суток, окрашивают гематоксилином Гарриса не более 12ч, затем дифференцируют лимфоидную ткань путем повторной обработки 0,1 %-ным раствором соляной кислоты в течение 1-2 ч.