СПОСОБ ПОДАВЛЕНИЯ ГИПЕРАКТИВНЫХ КЛЕТОК Российский патент 1998 года по МПК A61K31/505 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в онкологии, в исследовании онкологических заболеваний, в медицинской практике.

Известен широкий спектр разработок (исследовательских и уже нашедших применение в клинике), предлагающих использование для лечения онкологических заболеваний ряда препаратов и средств.

Так, в патентах Великобритании (например, N 14731148, 1570555, 2111997, 2217709, 2239599 и др., кл. A 61 K 31/505), EP (например, 0044705, 0215200, 0240820 и др. , кл. тот же), PCT (например, 82/04192, 87/01283, 90/09793, 92/04028 и др., кл. тот же ) сообщается о возможности использовать для лечебных целей препаратов, содержащих в качестве активного начала пиримидиновые основания, их производные, а также смеси указанных веществ с другими противоонкологическими средствами.

Названные источники не исчерпывают разумеется всех известных в настоящее время средств, применяемых в онкологии. Литература по данному вопросу чрезвычайно многообразна. Вместе с тем известные препараты на основе пиримидиновых оснований отличает то, что они, как правило, получены синтетическим путем. Последнее не может не сказываться на их токсичности. Кроме того, эффект пиримидиновых оснований, вводимых, например, внутрибрюшинно в эксперименте на лейкозных мышах (см. Вопросы онкологии, 1965, 11, 12, 54-60), свидетельствует скорее всего о том, что средство лишь сдерживает, но не блокирует синтез ДНК раковых клеток.

Наиболее близким аналогом способа предлагается считать способ, описанный в заявке EP M 0044705, A 61 K 31/505, 1982. В этом источнике описываются замещенные пиримидины для подавления стадии деления клеток. Указывается, что в зависимости от цикла деления клеток препараты могут избирательно действовать только на опухолевые клетки и не влияют на нормальные. К недостаткам аналога следует отнести получение активного начала химическим путем.

Принимая во внимание сказанное, а также актуальность выявления и разработки новых средств для задач онкологии, техническим результатом предлагаемого изобретения является расширение диапазона биоматериалов, проявляющих противоопухолевое действие.

Предпосылками данного изобретения являются наблюдения, сделанные ранее и оформленные в качестве самостоятельной заявки на изобретение, свидетельствующие о том, что продукты гидролиза ДНК, содержащие пиримидины, являются мощными ингибиторами пролиферации раковых клеток. В этой связи интересным представлялось исследовать возможное противоопухолевое действие гидролизата ДНК, полученного из зародышей пшеницы. Известно, что зародыши пшеницы богаты ДНК, при этом они являются натуральным и дешевым сырьем.

Сущность изобретения.

1. Получение солянокислого гидролизата ДНК.

Зародышевые хлопья пшеницы обезжиривают хлороформом, затем высушенный материал подвергают кислотному гидролизу на кипящей водяной бане в течение часа. Далее гидролизат центрифугируют при 10000g в течение 15 мин. Полученный осадок отбрасывают, а супернатант нейтрализуют, охлаждают и освобождают от выпавшего осадка пуриновых оснований путем центрифугирования в течение 15 мин при 10000g. Целевой продукт, содержащий пиримидиновые нуклеотиды и следовые количества пуриновых оснований, доводят до конечной концентрации 10 мг/мл физраствора. Полученный продукт используют для введения животным с онкологическим заболеванием, подбирая дозу в соответствии с характером течения заболевания и под контролем. Интервал доз находится в пределах от 50 до 150 мл. Контроль за действием препарата осуществляют по показателям клеточного распада. Широкий диапазон доз обусловлен отсутствием токсичности предлагаемого средства, его свойствами натурального продукта.

В качестве растворителя необязательно использовать физраствор, им может быть любой физиологически приемлемый растворитель, учитывающий природу активного начала (кислотного гидролизата ДНК).

Способ поясняется следующим примером.

В качестве объекта исследования использовали лейкозных мышей линии AKR, которым гидролизат давали в качестве питья в количестве 0,2 мл на 1 животное в день в течение всего срока эксперимента.

Контрольные животные той же линии получали 0,2 мл физраствора на мышь. Воду всем животным в опыте и контроле давали без ограничения. Животных содержали на стандартной диете.

Результаты исследования.

Все контрольные животные в количестве 20 мышей пали к 20-ому дню от начала эксперимента. Из 30 животных опытной группы, принимавших гидролизат ДНК из зародышей пшеницы, на 20-ый день были живы 25 мышей; на 40-ой - 19, на 60-ый -16 и на 80-ый -15.

Полученные результаты свидетельствуют о выраженном торможении заболевания при использовании в качестве препарата кислотного гидролизата ДНК из зародышей пшеницы.

Дополнительные исследования позволили уточнить механизм действия гидролизата. Использованный нами способ гидролиза биоматериала дает основание предполагать, что длина результирующих апуриновых фрагментов находится в пределах декануклотидов.

По-видимому, фрагменты такой длины без особых трудностей преодолевают тканевые и клеточные барьеры гиперактивных клеток в силу особого состояния их мембраны. Поэтому можно предположить, что заявляемое средство и способ могут быть эффективны не только в отношении онкологических, но также вирусных, аутоиммунных и других заболеваний и, в частности, в отношении различного рода невропатий.

В силу пиримидиновой природы фрагментов ДНК, составляющих активное начало предлагаемого средства, они скорее всего реагируют со смысловыми пурин-обогащенными зонами ДНК, блокируя их репликацию, препятствуя продвижению ДНК-альфа-полимеразы, и транскрипцию, скорее всего путем избыточного метилирования транскрибируемой цепи ДНК. Напомним, что ДНК пшеницы содержит в 4- 6 раз больше 5-метилцитозина по сравнению с ДНК животных, а реципрокная зависимость метилирования в экспрессии ДНК хорошо известна из литературы.

С учетом сказанного предлагаемые средство и способ могут быть с успехом применены не только в практике исследовательских лабораторий, но и в медицинской практике.

Использование: медицина и онкология, для подавления роста опухолевых клеток. Сущность изобретения: на опухолевые клетки в условиях in vivo воздействуют кислотным гидролизатом ДНК из зародышей пшеницы, содержащим пиримидиновые нуклеотиды. Технический результат: расширение диапазона биоматериалов, проявляющих противоопухолевое действие. 2 з. п. ф-лы.

1. Способ подавления гиперактивных клеток, включающий воздействие средством, содержащим пиримидины, отличающийся тем, что воздействие осуществляют средством, полученным в результате кислотного гидролиза ДНК из обезжиренных зародышей пшеницы и содержащим пиримидиновые нуклеотиды и следы пуриновых оснований, растворенные в физиологически приемлемом растворителе. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что концентрация пиримидинов в физрастворе составляет 10 мг/мл. 3. Способ по пп.1 и 2, отличающийся тем, что воздействие осуществляют средством в дозе 50 150 мл в сутки.