АДАПТОГЕННОЕ СРЕДСТВО Российский патент 1998 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии.

Цель - повышение адаптогенной активности при детоксицирующем и мембраностабилизирующем действии.

Для этого используют жирорастворимый комплекс из отходов производства облепихового масла - масляного остатка после экстракции эфиром шрота облепихи.

Предлагаемое средство получают следующим образом.

Измельченный шрот-отход производства облепихового масла экстрагируют петролейным эфиром (темп. кип. 40-70^oC) в емкости с механической мешалкой до осветления экстрагента. Из объединенных экстрактов удаляют растворитель на роторном испарителе при остаточном давлении 16 мм рт. ст. и температуре водяной бани 40 - 45^oC, при этом остается масляный остаток оранжево-коричневого цвета (заявка N 3881184/28-14 от 08.04.85, положительное решение от 29.05.87). Химическое исследование жирорастворимого комплекса, полученного из отходов облепихи, показало наличие богатого набора жирорастворимых витаминов, в том числе: провитамин А - сумма каротиноидов, 45-65 мг% витамин E - сумма токоферолов, 100-120 мг%, витамин К 0,02% и следующую сумму высокомолекулярных жирных кислот: миристиновая 0,22%, пентадеценовая 0,06%, пальмитиновая 9,63%, пальмитоолеиновая 7,11%, стеариновая 3,74%, олеиновая 19,39%, линолевая 51,74% и линоленовая 9,38%, общая сумма которых составляет 100%, из них сумма линолевой и леноленолевой составляет ≈ 61%. Последняя сумма известна как витамин F.

Доказательства фармакологических свойств предлагаемого средства.

Адаптогенное свойство. Экспериментальные исследования проведены на беспородных белых крысах с исходной массой 150 - 160 г. Все животные подвергнуты химическому фактору воздействия в виде 50%-ного масляного раствора четыреххлористого углерода (CCl₄), который вводили подкожно в объеме 0,4 мл на 100,0 г массы животного в течение 4-х дней. Начиная с 3-его дня от начала введения CCl₄, внутрижелудочно вводили жирорастворимый комплекс в дозе 0,5 мл в течение 7 дней, другой группе - облепиховое масло (в той же дозе), а третьей группе - экстракт элеутерококка жидкий (адаптоген) в экспериментально-терапевтической дозе 5 мг/кг. Интактной и контрольной (CCl₄) группам животных вводили дистиллированную воду в аналогичных условиях. Об адаптогенной активности исследуемых препаратов судили по изменению физической выносливости животных под влиянием этих средств, которую определяли по продолжительности плавания крыс в воде и длительности бега в третбане до полного утомления. Результаты исследований обработаны математико-статистическим методом Монцевичюте - Эрингене.

В результате проведенных исследований установлено, что жирорастворимый комплекс из шрота облепихи увеличивает продолжительность плавания крыс в воде почти в 2 раза, длительность бега в третбане - на 67,5% (p<0,05) относительно к контролю (см. табл. 1). Продолжительность плавания крыс в воде под влиянием введенного облепихового масла увеличивалась на 32,8% и длительность бега в третбане на 21,6% (p > 0,05). Под влиянием четыреххлористого углерода физическая выносливость крыс снижена по сравнению с интактными животными (p<0,05). Многократное введение экстракта элеутерококка животным увеличивает продолжительность плавания на 39,06% и длительность бега в третбане на 35,8% (p<0,05) к контролю.

Влияние исследуемого средства и облепихового масла на физическую выносливость крыс, подвергнутых воздействию четыреххлористого углерода, приведены в табл. 1.

Таким образом, из представленных данных по исследованию адаптогенных свойств жирорастворимого комплекса можно сделать следующие выводы:
1. Предлагаемое средство - жирорастворимый комплекс из отхода производства облепихового масла обладает адаптогенным свойством, повышая физическую выносливость животных; так, увеличивает продолжительность плавания крыс в воде почти в 2 раза, длительность бега в третбане на 67,5% к контролю.

2. Адаптогенное свойство клинически используемого экстракта элеутерококка увеличивает продолжительность плавания крыс в воде на 39,06% и длительность бега в третбане на 35,8% относительно к контролю.

3 Адаптогенное свойство исследуемого жирорастворимого комплекса из отхода облепихи выше, чем экстракта элеутерококка, так продолжительность плавания животных в воде выше на 34,8% и длительность бега в третбане на 31,7%.

Мембраностабилизирующее свойство. Предлагаемое средство на мембраностабилизирующее свойство исследовалось при остром токсическом гепатите (CCl₄). Для фармакологической защиты биомембраны при остром токсическом гепатите в опыте на белых крысах были использованы жирорастворимый комплекс из отхода облепихи, а также как средство для сравнения облепиховое масло.

36-ти крысам - самцам массой 100-120 г однократно, внутрибрюшинно ввели 0,3 мл 50%-ного раствора CCl₄ на вазелиновом масле. Крысам опытной группы после введения CCl₄ через 12, 24, 36 ч проводили лечение жирорастворимым комплексом и облепиховым маслом в дозе 0,5 мг/100 г. Препараты вводили внутрижелудочно с помощью металлического зонда. Интактным животным вводили внутрижелудочно 0,5 мл дистиллированной воды.

В работе использовалась фракция микросом печени крыс, полученная методом дифференциального центрифугирования. Содержание цитохрома P-450 измеряли спектрофотометрически по методу Omusa и Sato.

О мембраностабилизирующем действии препаратов судили по скорости инактивации цитохрома P-450. Скорость инактивации восстановленного цитохрома Р-450 регистрировали в течение 20 мин при температуре 37^oC в 100 mM и трис-HCl-буфере, pH 7,4.

На чертеже приведены кривые зависимости скорости инактивации цитохрома Р-450.

На оси абсцисс - показатели перехода цитохрома Р-450 в цитохром Р-420 (A₄₅₀-420 mмоль, цит. 450^-1). На оси ординат - время, в мин.

Кривая 1 - динамика скорости инактивации цитохрома Р-450 при интоксикации CCl₄ (контроль). Кривая 2 - динамика скорости инактивации цитохрома Р-450 на фоне введения облепихового масла. Кривая 3 - динамика скорости инактивации цитохрома Р-450 на фоне введения жирорастворимого комплекса. Кривая 4 - динамика скорости инактивации цитохрома Р-450 у интактных животных.

На чертеже приведены данные по оценке фармакологической регуляции состояния биомембран после острой интоксикации CCl₄ по истечении 48 ч от начала опыта по скорости инактивации восстановленного цитохрома Р-450 микросом печени крыс.

О резком поражении мембран четыреххлористым углеродом свидетельствует процент инактивации цитохрома Р-450 у нелеченных животных в нулевой точке - 39% и в конце инкубации 69% от интактных животных (кривая 4). Наибольший мембраностабилизирующий эффект отмечается в группе животных, получавших жирорастворимый комплекс (кривая 3).

Таким образом, по-видимому, в механизме мембраностабилизирующего действия жирорастворимого комплекса и облепихового масла лежат процессы торможения перекисного окисления в липидном бислое мембран, благодаря содержанию в исследуемом средстве витамина E и сохранения ненасыщенных связей жирных кислот, которые способствуют репарации биомембран гепатоцитов. Функциональная активность цитохрома Р-450, который является мембранным белком, во многом зависит от фосфолипидного микроокружения в мембране и содержания высокотоксических метаболитов, образующихся в результате реакций окисления.

Таким образом, исследование мембраностабилизирующего свойства жирорастворимого комплекса из отхода производства облепихового масла дает возможность сделать следующие выводы:
1. Фармакологическая стабилизация биомембран после поражения четыреххлористым углеродом жирорастворимым комплексом из отхода облепихи свидетельствует о новом свойстве изучаемого средства - мембраностабилизирующем действии.

2. Исследование мембранных свойств жирорастворимого комплекса из отхода облепихи показало, что скорость инактивации цитохрома Р-450 больше на 26% по отношению к контролю; а облепихового масла - на 12% к контролю.

3. Детоксицирующее свойство.

Цель и задачи исследования - оценить состояние детоксицирующей функции печени крыс по продолжительности гексеналового сна при введении жирорастворимого комплекса из отхода облепихи при интоксикации четыреххлористым углеродом (CCl₄).

Опыты проведены на 40 белых крысах-самцах массой 150-200 г. В каждой группе было по 10 животных. Масляный жирорастворимый комплекс вводили внутрижелудочно, двукратно в дозе 0,5 мл на 100 г массы крыс.

Результаты исследования приведены в табл. 2.

I группа животных (интактные) - ввели генсенал и отмечали продолжительность сна в минутах.

II группа животных (опытные) - ввели CCl₄ из расчета 0,5 мл 50%-ного масляного раствора CCl₄ на крысу массой 200 г и через 1,5 ч ввели гексанал и отмечали продолжительность сна.

III группа животных - через 1 ч после второго внутрижелудочного введения исследуемого средства вводили внутрибрюшинно гексанал в дозе 70 мл/кг массы в 1 мл раствора.

IV группа животных - через 1 ч после второго введения внутрижелудочно исследуемого средства ввели внутрибрюшинно на крысу массой 200 г 0,5 мл 50%-ного масляного раствора CCl₄. Через 1,5 ч после введения CCl₄ этим же крысам ввели гексанал внутрибрюшинно и отмечали продолжительность сна.

Статистическую обработку экспериментального материала и достоверные границы определяли по критерию Стьюдента.

Как видно из табл. 2, результаты опытов подтверждают литературные данные о замедлении метаболизма гексанала при действии CCl₄ по длительности "гексаналового сна", что показывает время удлинения сна с 16,5 ±3,6 мин до 81,0±15,5 мин II группа, p < 0,001. При введении жирорастворимого комплекса происходит укорачивание "гексаналового сна" с 16,5±3,5 мин до 11,0±3,6 мин III группа, p <0,001. Четкий защитный (протекторный) эффект средства отмечается в IV группе животных после введения CCl₄ (p < 0,001).

Можно предположить, что содержащиеся в исследуемом средстве вещества антиоксидантного характера - витамин E, который за счет индукции монооксигеназной системы и стабилизации биомембраны гепатоцитов, содержащих ферменты, улучшает детоксицирующую функцию печени. Используя метод "гексеналового сна" как критерий активности монооксигеназ in vivo, рассматривается возможность регуляции этой системой гомеостатики организма, оценить возможность и степень адаптированности организма к действию химических факторов окружающей среды.

Таким образом, исследование детоксицирующего исследуемого средства - жирорастворимого комплекса из отхода производства облепихового масла дает возможность сделать следующие выводы:
1. При введении исследуемого средства - жирорастворимого комплекса из отхода производства облепихового масла отмечается достоверный защитный эффект при действии четыреххлористого углерода: укорачивается продолжительность "гексеналового сна" до 11,0±3,6 мин (16,3±7,2) при 81,0±15,5 мин к контролю.

2. При воздействии четыреххлористого углерода ухудшается метаболизм гексенала в печени, что приводит к значительному удлинению "гексеналового сна" (II группa) в 5,5 раза по отношению к интактным (I группа).

Таким образом, предлагаемое средство обладает способностью повышать работоспособность организма, а также детоксицирующим и мембраностабилизирующим действиями, что позволяет получить эффективное средство из природного, растительного, вторичного сырья с широким спектром свойств.

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и касается адаптогенного средства, которое предлагается использовать при детоксицирующем и мембраностабилизирующем воздействии на организм. В качестве такого средства предлагается жирорастворимый комплекс из отходов производства облепихового масла, являющийся масляным остатком после экстракции эфиром шрота облепихи. 2 табл., 1 ил.

Применение масляного остатка после экстракции эфиром шрота облепихи при производстве облепихового масла в качестве адаптогенного средства.