ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ ПОДВОЕВ ЯБЛОНИ Российский патент 1998 года по МПК A01H4/00 

Использование: в сельском хозяйстве и биотехнологии, в частности, для микроклонального размножения сортов и подвоев яблони.

Сущность изобретения: питательная среда на основе среды Мурасиге-Скуга содержит в качестве стимулятора роста экстракт родиолы жидкой 10 - 30 капель на 1 л питательной среды.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для ускоренного размножения посадочного материала яблони на основе применения методов культуры ткани.

Известны питательные среды для получения большого количества дополнительных побегов нормальных параметров: Jones O.P., Hopgood M.E., O'Farrell D. (1977) - Propagation in vitro of M. 26 apple rootstocks. - J. of Hort. Science, 52, 235-238; Lane D.W. (1978). Regeneration of apple plants from shoot meristem - tips. - Plant Science Letterts, 13, 281 - 285.

Недостатками этих сред являются сравнительно длительный период дифференциации эксплантов и развития побегов, невысокий коэффициент размножения, дороговизна используемых стимуляторов роста.

Наиболее близкой по технической сущности к изобретению является питательная среда Мурасиге-Скуга (1962), используемая в работе: Высоцкий В.А., Леонтьев-Орлов О.А. Микроклональное размножение подвоев яблони. Садоводство, 1983, N 7, с. 20 - 21.

Состав среды прототипа, г/л, следующий:
NH₄NO³ - 1650
KNO₃ - 1900
CaCl₂•2H₂O - 440
MgSO₄•7H₂O - 370
KH₂PO₄ - 170
H₃BO₃ - 6,2
MnSO₄•4H₂O - 22,3
CoCl₂•6H₂O - 0,025
CuSO₄•5H₂O - 0,025
ZnSO₄•7H₂O - 8,6
NaMoO₄•7H₂O - 0,25
KI - 0,83
FeSO₄•7H₂O - 27,8
Тиамин хлорид - 0,5
Пиридоксин хлорид - 0,5
Никотиновая кислота - 0,5
Мезоинозит - 100
6-БАП - 1,0 и 3,0
Агар - 5000
pH - 5,6
Недостатками данной среды являются длительность получения больного числа побегов нормальных параметров, а также дороговизна используемого стимулятора роста 6-БАП.

Целью изобретения является сокращение сроков получения полноценных регенерантов и уменьшение себестоимости питательной среды.

Цель достигается тем, что предлагаемая питательная среда, составленная по прописи среды Мурасиге-Скуга /1962/, в качестве стимулятора роста содержит экстракт родиолы 10 - 30 капель на 1 л среды. Благодаря его применению достигается положительный эффект, заключающийся в значительном сокращении срока получения полноценных растений, а следовательно, в существенном повышении коэффициента размножения.

Пример. Проводили исследования микроклонального размножения подвоев яблони. В качестве эксплантов использовали терминальные участки однолетних побегов и пазушные почки. Экспланты стерилизовали в 0,1%-ном растворе диоцида в течение 5 мин, затем трижды промывали в стерильной дистиллированной воде. Питательные среды готовили общепринятыми методами. Автоклавирование проводили при 1 атм в течение 20 мин. Пробирки с эксплантами ставили в термокамеру со следующими условиями: освещенность 3000 лк, длительность светового периода 16 ч, температура 22 - 24^oC, влажность 70%. Через 20 - 25 дней каждый эксплант образовывал до 45 побегов длиной 25 - 35 мм. Для укоренения побеги пересаживали на питательную среду такого же состава, но без стимулятора роста, и вновь ставили на рост в термокамеру. Корни образовывались в течение 15 дней.

В табл. 1 приведены составы предлагаемой питательной среды.

В табл. 2 представлены основные параметры развития регенерантов при выращивании на испытуемых питательных средах с различным содержанием компонентов. Из табл. 2 следует, что питательная среда предлагаемого состава обеспечивает значительное по сравнению с прототипом сокращение сроков размножения до 21 - 0,4 дня вместо 90 - 120 дней, увеличение коэффициента размножения до 1 : 100 - 120, а также повышение эффективности выхода стандартных черенков для укоренения в грунте.

Использование изобретения позволяет сократить сроки размножения побегов, повысить эффективность выхода стандартных черенков при коэффициенте размножения 1 : 100 - 120, повысить эффективность процесса дифференциации эксплантов независимо от генотипа, увеличить общую производительность селекционного процесса от высадки меристем на питательную среду до укоренения и высадки растений в грунт, значительно снизить себестоимость питательной среды.

Предлагаемая питательная среда, составленная по прописи среды Мурасиге-Скуга (1962), дополнительно содержит в качестве стимулятора роста экстракт родиолы 10 - 30 капель на 1 л питательной среды. Сочетание компонентов и концентрация стимулятора роста обеспечивают значительное сокращение сроков получения полноценных регенерантов из меристем, повышают коэффициент размножения и существенно снижают себестоимость питательной среды. 2 табл.

Питательная среда для микроклонального размножения подвоев яблони, содержащая аммоний азотнокислый, калий азотнокислый, кальций хлористый двуводный, магний сернокислый семиводный, калий фосфорнокислый однозамещенный, борную кислоту, марганец сернокислый четырехводный, цинк сернокислый семиводный, калий иодистый, медь сернокислую пятиводную, кобальт хлористый шестиводный, железо сернокислое семиводное, мезоинозит, натрий молибденовокислый семиводный, тиамин хлорид, пиридоксин хлорид, никотиновую кислоту, сахарозу, агар и воду, отличающаяся тем, что она содержит дополнительно в качестве стимулятора роста экстракт родиолы при следующем соотношении компонентов, мг/л:
Аммоний азотнокислый - 1640 - 1660
Калий азотнокислый - 1800 - 1900
Кальций хлористый двуводный - 430 - 460
Магний сернокислый семиводный - 360 - 385
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 160 - 190
Борная кислота - 6,0 - 7,5
Марганец сернокислый четырехводный - 22,0
Кобальт хлористый шестиводный - 0,02
Медь сернокислая пятиводная - 0,02
Цинк сернокислый семиводный - 8,0 - 8,5
Натрий молибденовокислый семиводный - 0,2 - 0,3
Калий иодистый - 0,75 - 0,8
Железо сернокислое семиводное - 27,0 - 30,0
Тиамин хлорид - 0,2
Пиродоксин хлорид - 0,5
Никотиновая кислота - 0,5
Мезоинозит - 100
Экстракт родиолы (капли) - 10 - 30
Сахароза - 30000
Агар - 5000
Вода - До 1 л
pH - 5,6в