ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ ГРУШИ Российский патент 1999 года по МПК C12N5/04 A01H4/00 

Использование: в сельском хозяйстве и биотехнологии, в частности, для микроклонального размножения груши.

Сущность изобретения: питательная среда на основе половинной концентрации макро- и микросолей среды Мурасиге-Скуга содержит в качестве стимулятора роста настойку лимонника 15 - 30 капель на 1 литр среды. 2 табл.

Известны питательные среды, используемые для биотехнического размножения груши: /Lane D.W. (1979) Regeneration of pear plauts from shoot meristem tips.-Pl.Sci.Letter, 16, 337-342; Здруйковская-Рихтер А.И. Воспитание зародышей груши на искусственной питательной среде. Тр. Гос. Никит. бот. сада, 36 /1962/.

Недостатками этих сред являются длительный период дифференциации эксплантов и развития побегов, сравнительно невысокий коэффициент размножения, дороговизна применяемых стимуляторов роста.

Наиболее близкой по технической сущности к изобретению является среда Мурасиге-Скуга /1962/-Туровская-Микроразмножение груши. Садоводство, 1987, 6, с. 22-24.

Состав среды прототипа следующий, мг/л:
NH₄NO₃ - 1650
KNO₃ - 1900
CaCl₂•2H₂O - 440
MgSO₄•7H₂O - 370
KH₂PO₄ - 170
H₃BO₃ - 6,2
MnSO₄•4H₂O - 22,3
CoCl₂•6H₂O - 0,025
CuSO₄•5H₂O - 0,025
ZnSO₄•7H₂O - 8,6
NaMoO₄•7H₂O - 0,25
KI - 0,83
FeSO₄•7H₂O - 27,8
Na₂ЭДТА - 37,3
Тиамин хлорид - 0,2
Пиридоксин хлорид - 0,5
Никотиновая кислота - 0,5
Аскорбиновая кислота - 1,5
Мезоинозит - 100
6-БАП - 1,0
Недостатками известной среды являются сравнительно длительный период размножения, дороговизна используемых стимуляторов роста.

Целью изобретения является сокращение срока размножения, уменьшение себестоимости питательной среды.

Цель достигается тем, что предлагаемая питательная среда для микроклонирования, содержащая половинную концентрацию макро- и микросолей по прописи среды Мурасиге-Скуга, в качестве стимулятора роста содержит настойку лимонника 15 - 30 капель на 1 л среды, выпускаемую медицинской промышленностью для лечебных целей. Благодаря новой совокупности компонентов достигается положительный эффект, а именно значительно сокращаются сроки размножения побегов и тем самым повышается коэффициент размножения, а также повышается эффективность выхода стандартных черенков для следующего этапа - укоренения.

Пример. Проводили исследования развития меристем боковых почек у сорта груши Кюре. В асептических условиях извлекали меристемы 1 - 2 мм длиной и помещали их на питательные среды используемых составов /табл. 1./ Питательные среды готовили общепринятыми методами. Пробирки с эксплантами ставили на рост в термокамеру со следующими условиями: температура 25 - 27^oC, освещенность 2000 лк, длительность светового дня 16 часов, влажность 70%. Через 15 - 20 дней каждый эксплант дифференцировал до 25 побегов длиной 1,5 - 2,5 см. Для дальнейшего размножения побеги рассаживали на свежую питательную среду того же состава, и через 20 дней от единичного побега образовывался целый конгломерат побегов, количество которых доходило до 40 - 45. Для укоренения побеги помещали на питательную среду, содержащую лишь неорганические соли по рецепту среды Мурасиге-Скуга, в результате чего корни образовывались в течение 10 - 15 дней.

В табл. 2 представлены основные параметры развития регенерантов при выращивании на испытуемых питательных средах с различным содержанием компонентов. Из табл. 2 следует, что питательная среда предлагаемого состава обеспечивает значительное по сравнению с прототипом сокращение сроков размножения до 15,5-0,8 дней вместо 60-100 и увеличение коэффициента размножения до 1: 120-140 вместо 1:30-40, а также повышение эффективности выхода стандартных черенков для укоренения в грунте.

Использование изобретения позволяет сократить сроки размножения побегов, повысить эффективность выхода стандартных черенков при коэффициенте размножения 1:120-140, повысить процесс дифференциации эксплантов независимо от генотипа, увеличить общую производительность селекционного процесса от помещения эксплантов на питательную среду до укоренения и высадки растений в грунт, значительно снизить себестоимость питательной среды.

Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в сельском хозяйстве для микроклонального размножения груши. Предлагаемая питательная среда, составленная по прописи основной среды Мурасиге-Скуга (1962), дополнительно содержит в качестве стимулятора роста настойку лимонника 15-30 капель на 1 л среды. Изобретение позволяет сократить сроки получения полноценных регенерантов, в несколько раз повысить коэффициент размножения и существенно снизить себестоимость питательной среды. 2 табл.

Питательная среда для микроклонального размножения груши, содержащая аммоний азотнокислый, калий азотнокислый, кальций хлористый двухводный, магний сернокислый семиводный, калий фосфорнокислый однозамещенный, борную кислоту, марганец сернокислый четырехводный, кобальт хлористый шестиводный, медь сернокислую пятиводную, цинк сернокислый семиводный, натрий молибденовокислый семиводный, калий йодистый, железо сернокислое семиводное, этилдиаминтетрауксусный натрий двухводный, мезоинозит, 6-бензиламинопурин, тиамин хлорид, пиридоксин хлорид, никотиновую кислоту, сахарозу, агар и воду, отличающаяся тем, что она содержит дополнительно в качестве стимулятора роста настойку лимонника при следующем соотношении компонентов, мг/л:
Аммоний азотнокислый - 815 - 835
Калий азотнокислый - 945 - 960
Кальций хлористый двухводный - 210 - 225
Магний сернокислый семиводный - 180 - 195
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 70 - 85
Борная кислота - 5,5 - 7,0
Марганец сернокислый четырехводный - 22,0
Кобальт хлористый шестиводный - 0,02
Медь сернокислая пятиводная - 0,02
Цинк сернокислый семиводный - 4,0 - 5,5
Натрий молибденовокислый семиводный - 0,2
Калий йодистый - 0,5 - 0,6
Железо сернокислое семиводное - 5,2
Этилдиаминтетрауксусный натрий двухводный - 1,5
Мезоинозит - 100,0
6-Бензиламинопурин - 1,0
Тиамин хлорид - 0,5
Пиридоксин хлорид - 0,5
Никотиновая кислота - 0,5
Настойка лимонника (капли) - 15 - 30
Сахароза - 30000
Агар - 5000
Вода - Остальное