ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ РЕГЕНЕРАЦИИ РАСТЕНИЙ АБРИКОСА ИЗ НЕЗРЕЛЫХ ЗАРОДЫШЕЙ Российский патент 2003 года по МПК A01H4/00 C12N5/04 

Использование: в сельском хозяйстве и биотехнологии, в частности, для микроклонального размножения ценных сортов абрикоса.

Сущность изобретения: питательная среда по рецепту среды Мурасиге-Скуга содержит дополнительно в качестве стимулятора роста экстракт элеутерококка жидкий 0,5-2 мл на 1 л среды (2 таблица).

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для ускоренного размножения посадочного материала абрикоса на основе культуры ткани незрелых зародышей.

Известны питательные среды для получения дополнительных побегов с целью микроклонального размножения и получения побегов нормальных параметров (Ja micropropagajione in ortoflorofruiticulturae, Riv, Fruttic. Ortofloric, 1989, 51,5,5-41; Dvorak A. Metody minozeni a zajistem zdraveho vychoziho materialu, Fruit grouring, Sullp, 1988, 311-315).

Недостатками этих сред являются длительный период культивирования, часто встречающаяся витрифицированность побегов, дороговизна добавляемых в среды стимуляторов роста.

Наиболее близкой по технической сущности к изобретению является питательная среда Мурасиге-Скуга /1962/ в полном объеме (R.Е.Pieterse. Regeneration of plants from callus anol embryos of "Royal" Apricot, Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 19: 175-179, 1989.

Состав среды прототипа следующий, в переводе миллимолей в мл/л:
NН₄NО₃ - 1650
KNO₃ - 1900
CaCl₂ 2H₂O - 440
МgSО₄ 7Н₂О - 370
KH₂PO₄ - 170
Н₃ВО₃ - 6,2
MnSO₄ 4H₂O - 22,3
CoCl₂ 6H₂O - 0,025
СuSO₄ 5Н₂О - 0,025
ZnSO₄ 7Н₂О - 8,6
Na₂МоО₄ 2Н₂О - 0,25
КI - 0,83
FеSO₄ 7Н₂О - 27,8
Na₂ ЭДТА 2Н₂О - 37,3
Тиамин хлорид - 0,2
Пиридоксин хлорид - 0,5
Никотиновая к-та - 0,5
Миоинозитол - 100
2,4-Д - 1,0
6-БАП - 0,5
α-НУК - 0,1
Агар - 6000
Недостатками данной среды являются длительность процесса размножения, т. к. на ней возможно получение лишь каллуса, а для регенерации побегов нужен перенос на питательные среды другого состава, что намного усложняет и увеличивает длительность процесса получения сеянцев нормальных параметров.

Целью изобретения является сокращение сроков размножения и уменьшение себестоимости питательной среды.

Цель достигается тем, что предлагаемая питательная среда, составленная по основной прописи среды Мурасиге-Скуга /1962/, в качестве стимулятора роста содержит экстракт элеутерококка 0,5-2 мл/л, выпускаемый медицинской промышленностью для лечебных целей.

Пример. Проводили исследования развития узелкового каллуса и регенерации побегов из незрелых зародышей Prunus armeniaca L. сорта Royal /как и в прототипе/. От свободно опыляемых деревьев зародыши брались через 35 дней после полного цветения. Семена стерилизовались в 0,5% р-ре сулемы в течение 7 минут, трижды промывались стерильной дистиллированной водой, после чего из них в асептических условиях вычленяли зародыши. В 2-3 местах делали неглубокие надрезы и высаживали на питательные среды составов, приведенных в табл.1. Маточные растворы макро- и микросолей готовили на бидистиллированной воде, а питательные среды готовили общепринятыми методами. Автоклавирование проводили при 1 атм в течение 20 минут. Пробирки с эксплантами ставили в термокамеру со следующими параметрами: температура 23-25^oС, длительность светового периода 16 часов, освещенность 1500 лк, влажность 70%. Через 15-25 дней каждый эксплант в местах надрезов образовывал узелковый каллус. Для получения побегов зародыши с каллусом пересаживали на свежую питательную среду того же состава, в результате чего через 25-30 дней каждый комочек каллуса образовывал до 10-15 побегов длиной 15-25 мм. Регенеранты укореняли и высаживали в теплицу.

В табл. 2 представлены основные параметры развития узелкового каллуса и дифференциации побегов при выращивании на испытуемых питательных средах. Из данных табл. 2 следует, что питательная среда предлагаемого состава обеспечивает значительное по сравнению с прототипом сокращение сроков образования узелкового каллуса до 15,8-0,3 дней вместо 90-120, увеличение коэффициента размножения до 1:40-50, а также повышение эффективности выхода стандартных черенков для укоренения в грунте.

Использование изобретения позволяет сократить сроки размножения побегов, повысить эффективность выхода стандартных черенков при коэффициенте размножения 1:40-50, увеличить общую производительность селекционного процесса от высадки незрелых зародышей на питательную среду до укоренения и высадки растений в грунт, значительно снизить себестоимость питательной среды.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и биотехнологии, может быть использовано для микроклонального размножения ценных сортов абрикоса. Питательная среда, составленная по прописи среды Мурасиге-Скуга /1962/, дополнительно содержит в качестве стимулятора роста экстракт элеутерококка 0,5-2 мг/л. Сочетание компонентов и концентрация стимулятора роста обеспечивает значительное сокращение срока получения полноценных регенерантов, значительное повышение коэффициента размножения, снижение себестоимости питательной среды. 2 табл.

Питательная среда для регенерации растений абрикоса из незрелых зародышей, содержащая аммоний азотнокислый, калий азотнокислый, кальций хлористый двухводный, магний сернокислый семиводный, калий фосфорнокислый однозамещенный, борную кислоту, марганец сернокислый четырехводный, цинк сернокислый семиводный, натрий молибденовокислый двухводный, калий иодистый, медь сернокислую пятиводную, кобальт хлористый шестиводный, железо сернокислое семиводное, мезоинозит, сахарозу, тиамин хлорид, пиридоксин хлорид, никотиновую кислоту, агар и воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит в качестве стимулятора роста экстракт элеутерококка при следующем соотношении компонентов, мг/л:
Аммоний азотнокислый - 1640-1660
Калий азотнокислый - 1800-1900
Кальций хлористый двухводный - 430-445
Магний сернокислый семиводный - 360-390
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 160-190
Борная кислота - 6,0-7,5
Марганец сернокислый четырехводный - 22,0-23,0
Кобальт хлористый шестиводный - 0,02
Медь сернокислая пятиводная - 0,02
Цинк сернокислый семиводный - 8,0-9,5
Натрий молибденовокислый двухводный - 0,2-0,5
Калий иодистый - 0,75-0,9
Железо сернокислое семиводное - 27,0-30,0
Тиамин хлорид - 0,2
Пиридоксин хлорид - 0,5
Никотиновая кислота - 0,5
Мезоинозит - 100
Экстракт элеутерококка - 0,5-2
Сахароза - 30000
Агар - 6000
Вода - До 1 лд