ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ ЧЕРЕШНИ Российский патент 1999 года по МПК A01H4/00 

Использование: в сельском хозяйстве и биотехнологии, в частности для микроклонального размножения черешни.

Сущность изобретения: питательная среда на основе среды Мурасиге-Скуга содержит в качестве стимулятора роста раствор тауремизина 0,5% 20-40 капель на 1 л среды.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для ускоренного размножения посадочного материала черешни на основе культуры тканей зиготических незрелых зародышей.

Известны питательные среды для получения дополнительных побегов нормальных параметров (J. David J. Cell and tissul culture technology for the genetic manipulation of temperate fruit trees. - Biotechnology and Genetic Eng. Rev., v. 5, wimborne, 1987, 33, 33-79; Здруйковская - Рихтер А.И. Культура зародышей плодовых растений как метод селекции. - Труды ГНБС, 1969, т. 40, с. 121-144).

Недостатками этих сред являются длительный период дифференциации эксплантов и развития побегов, сравнительно невысокий процент размножения, дороговизна применяемых стимуляторов роста.

Наиболее близкой по технической сущности к изобретению является классическая питательная среда Мурасиге-Скуга (1962) - Плотникова Г.А. Высоцкий В.А. Получение сеянцев вишни и черешни из зародышей, изолированных на ранних стадиях развития. - Биол. аспекты повышения продуктивности животных и растений. - Тез. докл. 6 конф. молодых ученых-биологов. - Рига, 1984, с. 127-129.

Состав среды прототипа, мг/л:
NH₄NO₃ - 1650
KNO₃ - 1900
CaCl₂•2H₂O - 440
MgSO₄•7H₂O - 370
KH₂PO₄ - 170
H₃BO₃ - 6,2
MnSO₄•4H₂O - 22,3
CoCl₂•6H₂O - 0,025
CuSO₄•5H₂O - 0,025
ZnSO₄•7H₂O - 8,6
NMoSO₄•7H₂O - 0,25
KI - 0,83
FeSO₄•7H₂O - 27,8
Na₂ ЭДТА•2H₂O - 37,3
Тиамин хлорид - 0,2
Пиридоксин хлорид - 0,5
Никотиновая кислота - 0,5
Мезоинозит - 100
ИУК - 10,0
Кинетин - 4,0
6-БАП - 1,0
Недостатками данной среды является длительность получения большого числа побегов нормальных параметров, а также дороговизна применяемых синтетических регуляторов роста.

Целью изобретения является сокращение срока получения полноценных регенерантов и уменьшение себестоимости среды.

Цель достигается тем, что предлагаемая питательная среда, составленная по прописи среды Мурасиге-Скуга (1962), в качестве стимулятора роста содержит раствор тауремизина 0,5% - 20-40 капель на 1 л среды, выпускаемый медицинской промышленностью для приема внутрь. Благодаря его применению достигается положительный эффект, заключающийся в значительном сокращении срока получения полноценных регенерантов и тем самым в существенном увеличении коэффициента размножения.

Пример. Проводили исследования микроклонального размножения черешни - сорт Валерий Чкалов. От свободно опыляемых растений зародыши брались через 21 день после опыления - на стадии "сердечко". Экспланты стерилизовали в 0,1%-ном растворе диоцида - 5 мин, а потом трижды промывали в стерильной дистиллированной воде. Питательные растворы также готовили на дистиллированной воде, а для приготовления питательных сред использовали общепринятые методы. Автоклавирование проводили при 1 атм в течение 30 мин. Пробирки с эксплантами ставили в термокамеру со следующими условиями: температура 22-24^oС, освещенность 2000 лк, длительность светового периода 16 ч, влажность 70%. Через 2-3 недели каждый эксплант дифференцировал до 20 нормально развивающихся побегов длиной 20-30 мм. Для укоренения побеги пересаживали на питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую половинный объем всех солей и без стимулятора роста.

В табл. 1 представлены основные параметры развития регенерантов при выращивании на испытуемых питательных средах с различным содержанием компонентов. Из табл. 2 следует, что питательная среда предлагаемого состава обеспечивает значительное по сравнению с прототипом сокращение сроков размножения - до 16,8±0,4 вместо 80-120 и увеличение коэффициента размножения до 1:35-40, а также повышение эффективности выхода стандартных черенков для укоренения в грунте.

Использование изобретения позволяет сократить сроки размножения побегов, повысить эффективность выхода стандартных черенков при коэффициенте размножения 1: 35-40, повысить эффективность процесса дифференциации эксплантов независимо от генотипа, увеличить общую производительность селекционного процесса от высадки незрелых зародышей на питательную среду до укоренения и высадки растений в грунт, значительно снизить себестоимость среды.

Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству. Питательная среда составлена по прописи среды Мурасиге-Скуга (1962), дополнительно содержит в качестве стимулятора роста раствор тауремизина 0,5%-ный 20-40 капель на 1 л среды. Использование среды позволяет значительно сократить сроки получения полноценных регенерантов, в несколько раз повысить коэффициент размножения и существенно снизить себестоимость питательной среды. 2 табл.

Питательная среда для размножения черешни, содержащая аммоний азотнокислый, калий азотнокислый, кальций хлористый двухводный, магний сернокислый семиводный, калий фосфорнокислый однозамещенный, борную кислоту, марганец сернокислый четырехводный, цинк сернокислый семиводный, натрий молибденовокислый двухводный, калий йодистый, медь сернокислую пятиводную, кобаль хлористый шестиводный, железо сернокислое семиводное, мезоинозит, сахарозу, тиамин хлорид, пиридоксин хлорид, никотиновую кислоту, агар и воду, отличающаяся тем, что она содержит дополнительно в качестве стимулятора роста раствор тауремизина 0,5% при следующем соотношении компонентов, мг/л:
Аммоний азотнокислый - 1640 - 1660
Калий азотнокислый - 1800 - 1900
Кальций хлористый двухводный - 430 - 460
Магний сернокислый семиводный - 360 - 385
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 160 - 190
Борная кислота - 6,0 - 7,5
Марганец сернокислый четырехводный - 22,0 - 23,0
Кобальт хлористый шестиводный - 0,02 - 0,035
Медь сернокислая пятиводная - 0,02 - 0,035
Цинк сернокислый семиводный - 8,0 - 9,3
Натрий молибденовокислый двухводный - 0,2 - 0,4
Калий йодистый - 0,75 - 0,95
Железо сернокислое семиводное - 27,0 - 33,0
Тиамин хлорид - 0,2
Пиридоксин хлорид - 0,5
Никотиновая кислота - 0,5
Мезоинозит - 100,0
Сахароза - 30000
Агар - 7000
Раствор тауремизина 0,5% 20 - 40 капель на 1 л среды
Вода - До 1 л
рН 5,6.