ПРОТИВОЯДИЕ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СПОСОБ ПРОТИВОДЕЙСТВИЯ ЯДУ И КОМПЛЕКТ Российский патент 1998 года по МПК A61K39/38 A61K35/38 

Изобретение касается антитоксинов и способа их получения. Более конкретно, изобретение касается змеиных противоядий и способа их получения.

Ряд животных, включая змей gilamonsters, пауков и пчел, вырабатывают яды, которые опасны для человека, например, во всем мире ежегодно около миллиона человек страдают от укусов ядовитых змей, причем установлено, что умирает из них 100000, а 300000 других страдают в течение всей своей остальной жизни теми или другими формами нетрудоспособности. Вероятно, что это большая недооценка из-за недостатка подробных сообщений из некоторых частей мира.

Яды, выделяемые змеями в основном для умерщвления жертвы или в целях защиты, являются комплексными биологическими смесями, состоящими более чем из 50 компонентов. Смерть жертвы от укуса змеи наступает в результате дыхательной недостаточности или недостаточности кровообращения, вызываемых разными нейротоксинами, кардиотоксинами (называющимися также цитотоксинами), факторами коагуляции и другими веществами, действующими в чистом виде или синергически. Змеиные яды содержат также ряд ферментов, которые при попадании внутрь жертвы начинают расщеплять ткань. Таким образом, яды содержат вещества, предназначенные поражать жизненные процессы, такие как нервная и мускульная функции, работа сердца, циркуляция крови и проницаемость оболочек. Главными составными частями змеиных ядов являются белки, но присутствуют также соединения с низким молекулярным весом, такие как пептиды, нуклеотиды и ионы металлов.

Ядовитые змеи могут быть подразделены на 4 основные семейства: Colu bridae, Viperidae, Hydrophidae и Erapictac.

Систематика этих змей описана в табл. 1 и 2. Гремучие змеи, которые водятся исключительно на Американском континенте, входят в подсемейство ядовитых змей семейства, известного как Crotalinae, вид Crotalus или Sistrusus (гремучие змеи) Bothrops, Aqka strodon и Trimerisurus. Оба вида гремучих змей могут быть разбиты также на виды и подвиды. Эти змеи называются также "pit-гадюки" за счет наличия лицевых теплочувствительных ямок, однако их самым известным признаком является кольцо, которое, когда оно есть, отличает их от всех остальных змей.

Каждый вид или подвид распространен в отдельном географическом регионе в Северной или Южной Америке. Яд каждого вида гремучей змеи содержит компоненты, которые могут быть общими для всех гремучих змей, общими только для некоторых небольших групп или он может быть специфическим только для одного вида или подвида.

Противоядием является сыворотка или частично очищенная фракция антитела сыворотки от животных, которые были сделаны невосприимчивыми (иммунными) к токсичности яда в результате схемы инъекции возрастающих доз змеиного яда.

Научное исследование противоядия началось с разработки Генри Сивелла в 1887 г. и продолжалось в течение настоящего столетия. В настоящее время большое число и разнообразие моноспецифических и полиспецифических противоядий производится во всем мире.

Классификация ядовитых змей.

Класс Reptilla (рептилии)
Отряд Sqamata (змеи и ящерицы)
Подотряд Serpentes (змеи)
Подподотряд Alethinophidia (очковые змеи)
Сверхсемейство Colu broidea (ползучие змеи)
Применяемый здесь термин "Моноспецифическое противоядие" относится к противоядию, выработанному против яда одного вида или подвида ядовитых животных. Термин "полиспецифическое противоядие" относится к противоядию, выработанному против смеси двух или более ядов разных видов или подвидов ядовитых животных.

Термины моноспецифическая и полиспецифическая антисыворотка используется здесь для того, чтобы избежать путаницы, которая может быть названа использованием общих альтернативных выражений "моновалентная" и "поливалентная" антисыворотка. Эта терминология используется потому, что термин "валентность" применяется иммунологами для выражения числа мест связи (сайтов связывания), имеющегося у антитела или продукта расщепления антитела, так, например, Ig G молекула является двухвалентной в то время, как F (ав) фрагмент, который имеет только один участок связи, является одновалентным. Использование термина "специфическая" в описании антисыворотки исключает всякую путаницу.

В первой исследовательской работе Г.Сивелла голубям были инокулированы сублетальные дозы для яда гремучей змеи с последующими инъекциями возрастающих доз до уровней выше тех, которые должны были при введении в самом начале вызывать смерть. Таким образом, выявлено, что птицы выработали резистентность к яду. В 1889 г. Кауфман получил подобные результаты, используя европейскую змею Viperk beras, а в 1892 г. Калметт, работая в Сайгоне с ядом кобры, сообщал, что можно придавать резистентность постепенными инъекциями яда. Однако именно Кантхак первым привил резистентность другому животному, после того как смешиванием яда с кровью от иммунизированного животного он выявил резистентность к летательным дозам змеиного яда.

Основной целью Калметта было приучить животное к частым, повторным, постепенно возрастающим дозам яда (обычно яда кобры). Он нашел, что спустя 16 месяцев иммунизированные лошади становятся толерантными к 80-кратной летальной дозе яда. Он показала также, что антисыворотка, полученная из крови, взятой у этих лошадей, обладает нейтрализующим эффектом в 20000 единиц при введении кроликам, т.е. 1 мл сыворотки мог нейтрализовать минимальную летальную дозу яда для 20000 г кроликов.

Основные известные противоядия представляют собой рафинированные концентраты конских сывороточных глобулинов, приготовленных в жидком или сухом виде. Противоядия получают от лошадей, которые были иммунизированы по отношению к только одному яду для получения моноспецифического противоядия или смеси ядов для получения полиспецифического противоядия. Противоядия были приготовлены для лечения основных типов отравлений змеиным ядом. С тех пор за последнее столетие способы получения изменились мало. Иммунная лошадиная сыворотка может подвергаться этапу грубой очистки обычно с применением сульфата аммония для выделения глобулиновой фракции, и в некоторых случаях это и является формой конечного продукта. Так как противоядия в этой форме могут вызывать тяжелые сывороточные реакции, известно применение пепсинового дигарирования для удаления Fc части иммуноглобулина, которая главным образом ответственная за такие иммуногенные реакции.

Эффективность известных противоядий при нейтрализации как вредных, так и, по-видимому, невредных эффектов специфического яда может изменяться очень значительно и зависит от ряда факторов. Наиболее важными среди таких факторов являются специфичность противоядия, титр полученных антител и степень концентрации или очистки конечного продукта.

Вообще самым специфическим противоядием с большим будущим является то, которое будет нейтрализовать провоцирующий яд. Моноспецифические противоядия, выработанные против одного яда, являются поэтому более эффективными по отношению к соответствующему им яду. Тем не менее подобные противоядия применяются только для лечения змеиного укуса только в том случае, если установлен вид или подвид напавшей змеи. Если напавшая змея не установлена, как бывает обычно, в "полевой" ситуации, предпочтительным является полиспецифическое противоядие, выработанное против целого спектра разных ядов с целью повышения вероятности противоядия, которое эффективно по отношению к яду неопознанной змеи. Известные полиспецифические противоядия, однако, страдают отсутствием специфичности моноспецифических противоядий и поэтому являются менее эффективными при нейтрализации фармакологической активности яда.

Было сделано неожиданное открытие, что противоядие (называемое здесь "смешанным моноспецифическим противоядием"), содержащее смесь разных антисывороток, разработанных отдельно для разных ядов, является более эффективным для нейтрализации фармакологической активности яда, чем известное полиспецифическое противоядие, полученное выработкой одной антисыворотки для целого спектра ядов, но сохраняет широкую специфичность полиспецифических противоядий.

Согласно первому аспекту изобретения предлагается противоядие, включающее смесь по меньшей мере двух разных антисывороток, выработанных против разных ядов.

Полагают, что противоядия, содержащие смесь разных антисывороток, являются более эффективными, чем известные полиспецифические противоядия, поскольку первые могут содержать большую пропорцию антетел, направленных против компонентов ядов с низким молекулярным весом и/или недостаточно иммунногенных.

Змеиные яды представляют собой сложные многокомпонентные смеси белка, нуклеотидов и ионов металла. Эти компоненты различаются по молекулярному весу, по степени их антигенности и по их концентрации в яде. Когда яд вводят животному для выработки антисыворотки, может возникнуть целый ряд популяций антитела. Концентрация и средство выработанных антител будет меняться согласно различным критериям, например по числу эпитопов на поверхности компонента, иммуногенности каждого эпитопа, концентрации каждого компонента. Летальные, нейротоксичные компоненты ядов (включая, например, яды гремуччих змей) часто включают компоненты с низким молекулярным весом, слабо иммуногенные, присутствующие лишь в низких концентрациях. Маловероятно, что такие компоненты вызовут высокие титры антител.

Полагают, что данная проблема усугубляется при производстве полиспецифического противоядия с помощью использования иммунизирующей смеси, включающей смесь ядов, в которой компоненты с низким молекулярным весом и слабо иммуногенные далее разбавляются высокоиммуногенными компонентами. Производство полиспецифического противоядия дает в результате противоядие, в котором антитела к некоторым компонентам не существуют или присутствуют в такой малой концентрации, что их эффективность ничтожна.

В противоположность этому смешанные моноспецифические противоядия изобретения содержат смесь антисывороток, выработанных против разных ядов на отдельных группах животных. При выработке антисывороток отдельное число возможных популяций антител, которое доступно для каждой сыворотки, является одним и тем же, но число эпитопов в иммуногене значительно меньше.

Таким образом, полагается, что антисывороточные компоненты содержат более высокую пропорцию защитных антител против низкомолекулярных, слабоиммуногенных компонентов, чем полиспецифические противоядия. Сочетание моноспецифических антисывороток для получения смешанной моноспецифической антисыворотки приводит к противоядию, которое имеет все популяции моноспецифической сыворотки и поэтому обеспечивает лучшую защиту, и обладает также преимуществами полиспецифического противоядия в том смысле, что перекрестная реакционноспособность противоядия становится максимальной.

Очевидно, что каждый компонент противоядия смешанного моноспецифического противоядия по изобретению может сам быть моноспецифическим противоядием или полиспецифическим противоядием.

Например, смешанное моноспецифическое противоядие может включать смесь полиспецифического противоядия, выработанного против ядов A + B, и моноспецифического противоядия, выработанного против яда C.

Предпочтительно каждым компонентом противоядия является моноспецифическое противоядие. Например, смешанное моноспецифическое противоядие может включать смесь моноспецифических противоядий, выработанных против ядов A, B и C.

Антисыворотки, которые включают смешанное моноспецифическое противоядие могут смешиваться в любой подходящей пропорции. Предпочтительно смешанное моноспецифическое противоядие содержит антисыворотку, смешанную в пропорции, соответствующей географической зоне, для применения в которой предназначается смешанное моноспецифическое противоядие. Факторами, которые могут учитываться при изготовлении такого "заказного" смешанного моноспецифического противоядия являются население, распределение, поведение и токсичность конкретного ядовитого животного в конкретной области.

Состав смешанного моноспецифического противоядия может определяться статистическим анализом укусов людей в конкретной географической местности конкретными видами или подвидами ядовитых животных. Предпочтительно каждый компонент антисыворотки смешанного моноспецифического противоядия присутствует прямо пропорционально относительной частоте укусов людей в конкретном географическом районе конкретными видами или подвидами ядовитого животного, против яда которого вырабатывается антисыворотка.

Например, гремучая змея Diamond-back подразделяется на два географических типа, известных как Восточная (C. ademauteus) и Западная (C. atrox/Diamoud-back). Поэтому может быть изготовлено смешанное моноспецифическое противоядие, которое подходило бы для змей конкретного географического района. Включение противосыворотки против змей, которые не встречаются в этом районе, которая могла бы разбавить эффективность любого продукта, следовательно, является ненужным. Данная способность производить заказные противоядия дает возможность смешанным моноспецифическим противоядиям изобретения приближаться к эффективности или даже улучшать эффективность гомологичного моноспецифического противоядия без проведения статистического исследования типов змеиных укусов в географической местности.

Антисыворотки, включающие противоядие, могут вырабатываться на любом подходящем животном, например, мышах, крысах, овцах, козах, ослах или лошадях. Предпочтительно вырабатывать антисыворотку на овцах. Вырабатывание антисыворотки на овцах особенно предпочтительно по сравнению с традиционным способом выработки антисыворотки на лошадях, так как выбранная на овце антисыворотка не содержит ни одного из особенно иммуногенных Ig Gu Gg G(T) компонентов лошадиной антисыворотки, которые вызывают нежелательные иммунногенные сывороточные реакции у людей или животных, которым вводится такое противоядие.

Антисыворотка, которая включает противоядие, может быть цельной антисывороткой. Предпочтительно антисыворотка может частично расщепляться (дигерироваться) на фрагменты F(ав¹)₂ или F(ав). Целесообразно удалять фрагменты Fc для снижения иммуногенной реакции пациента на противоядие.

Получение фрагментов антитела может выполняться с помощью обычных приемов, например, расщеплением пепсина или папаина.

Антисыворотка, которая включает противоядие, может вырабатываться против яда любого ядовитого животного, включая змей, gilа mousters, пауков и пчел. Противоядие может содержать антисыворотку, выработанную для яда только одного типа животного, например, антисыворотка, выработанная для яда различных видов или подвидов змей. Альтернативно противоядие может включать антисыворотку, выработанную для яда более чем одного типа животных. Предпочтительно ядом является змеиный яд. Еще предпочтительнее, когда ядом является яд гремучей змеи.

Яд, против которого вырабатывается каждая антисыворотка, может состоять целиком из яда, частично очищенного яда или одного или более выбранных компонентов яда. Предпочтительно, когда ядом является цельный яд.

Согласно еще одному аспекту изобретения предлагается способ получения противоядия по первому аспекту изобретения, предусматривающий смешение по меньшей мере двух различных антисывороток.

Согласно третьему аспекту изобретения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество противоядия по первому аспекту изобретения в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или наполнителем.

Предпочтительно фармацевтическая композиция является подходящей для парентерального приема пациентом. Еще предпочтительнее фармацевтическая композиция, пригодная для внутренней инъекции.

Согласно четвертому аспекту изобретения предлагается способ нейтрализации яда, включающий введение субъекту, страдающему от воздействия яда, противоядия по первому аспекту изобретения в эффективном количестве.

Согласно пятому аспекту изобретения предлагается набор для введения противоядия в организм человека или животного, включающий: a) противоядие, согласно первому аспекту изобретения, b) средство для инъекции противоядия в организм.

На фиг. 1 показана активность A2 фосфата в 1 мкг четырех кроталидных ядов; на фиг. 2 - количество противоядия, необходимое для нейтрализации 50% активности A2 фосфолипазы в 1 мкг кроталидного яда.

Понятно, что изобретение описывается с помощью примера только в качестве иллюстрации, и в объеме изобретения могут производиться модификации и другие изменения.

Экспериментальные исследования.

1. Получение противоядий.

Противоядие было получено иммунизацией группы из уэльских овец ядом по известной схеме иммунизации Сидки и др. (табл.3). Яд для иммунизации был предложен профессором Ф. Расселом из Аризонского университета. Яд был собран у большого числа змей того же вида. Были включены особи разного возраста и географического размещения, и яд собирали на протяжении года. Известно, что эти факторы влияют на состав яда и поэтому являются важными для эффективного производства противоядия. Собиралась кровь (300 мл) от группы и сливалась ежемесячно, и сыворотку отсасывали после достижения образования сгустка при 4^oC в течение 18 ч.

Концентрат получают из антисывороточного фонда осаждением сульфата натрия. Фракцию иммуноглобулина затем частично очищают осаждением сульфата натрия из антисывороточного фонда. Объемы антисыворотки смешивают с разными объемами 6%-ного сульфата натрия, и полученную смесь перемешивают в течение 1,5 ч при комнатной температуре для осаждения иммуноглобулина. После центрифугирования при 3500 об/мин в течение 60 мин сгусток промывают дважды 18%-ным сульфатом натрия, и конечный сгусток затем реконструируют буферным раствором фосфата (PBS) до объема, равного объему исходного антисывороточного депо. Затем раствор циализуют по отношению к 20 объемам ПВС, и продукт хранят при 4^oC до востребования.

Продукт может подвергаться анализу способом микро-Кьельдаля для определения точной концентрации белка в пробе. Если требуется, может осуществляться расщепление данного Gg J для образования F(ав¹)₂ и F(ав) с применением пепсина или папаина, соответственно. Эти продукты могут быть также анализироваться по методу S S/PAGE, микро-Кьельдаля и ЕЛИЗА с целью обеспечения сохранения эффективности.

2. Сравнение противоядия "ин витро".

Введение
Змеиный яд является многокомпонентной смесью протеинов, ионов металла и нуклеотидов. Хотя точная природа каждого отдельного конкретного яда является особенной для генотипа змеи, существуют некоторые общие протеины.

Одним из таких общих протеинов является фермент фосфолипаз A₂(PLA 2). Этот фермент ответствен прежде всего за распад жиров организма, но может обладать и рядом других активностей, таких как разрыв клетки из-за продуктов жирового гидролиза и нейротоксичностью, обусловленной фармакологически активным сайтом у фермента.

Активность PLA2 в ядах кроталидных или гремучих змей может определяться простым колорометрическим анализом. PLA2 гидролизует жиры, давая жирную кислоту и глицерин, приводящих в результате к падению pH системы.

PLA2+жир ___→ жирная кислота+глицерин
Такое падение pH может регулироваться введением окрашенного pH индикатора в систему.

Оценка активности PLA2.

Следующий анализ может применяться для регулирования активности A2 фосфолипазы (PL K2. EC 3.1.1.4.) конкретных ядов. Активность ядов оценивается измерением высвобождения свободной жирной кислоты из фосфолипидного субстрата (фосфатидилхолин) фирмы "Сигма-Кемикал", номер продукта P-9671 (с применением pH индикатора Крезол красный, фирма "Сигма-Кемикал", номер продукта C-9877).

Буферная проба:
1. 100 мм NaCl
2. 100 мм KCl (Все сорта GPR реагента)
3. 10 мм CaCl₂
Для обычного анализа берут 500 мл данного раствора и доводят pH до 6,8 с использованием разбавленного раствора гидроокиси натрия.

Приготовление индикатора: 10 мг креозола красного (натриевая соль, Сигма, N C-9877) растворяют в буферной пробе (10 мл) и обертывают сосуд тонкой фольгой.

Приготовление субстрата: фосфатидилхолин (1,2 г из яичного желтка, тип XY-E, 60% форма L-альфа, Сигма, N 9671) растворяют в метаноле (1 мл) и доводят раствор до 10 мл буфером (конечная концентрация 120 мг/мл). Это следует делать заново для каждой серии экспериментов.

Метод: сырой высушенный замораживанием моновалентный яд растворяется в дистиллированной воде до конечной концентрации 10 мг/мл. Обычно 10 мл раствора яда берут для каждой серии экспериментов. Раствор субстрата затем подготавливают следующим образом.

В 1 мл свежеприготовленной липидной суспензии добавляют 25 мл буфера для анализа и 0,3 мл тритон-X-100 (ВДН N 30632). Тщательно перемешивают раствор до тех пор, пока он не становится прозрачным. Доводят pH до 8,6 с использованием разбавленной гидроокиси натрия. Добавляют 1 мл полученного раствора индикатора и доводят конечный объем субстратного раствора до 30 мл буфером. Субстратный раствор должен быть красным по цвету, в противном случае следует проверить pH буфера. Данный раствор следует также обернуть серебряной фольгой.

К 2,8 мл субстратного раствора в пластиковой 3-мл кювете добавляют 100 мкг буфера и измеряют CD_573нм. Добавляют 100 мм раствора яда и включают секундомер. Во вторую кювету, содержащую 2,8 мл субстратного раствора и 100 мкл буфера, добавляют еще 100 мкл буфера для регулирования любого случайного падения pH. Это проводится параллельно с кюветой для анализа. Считывания производились каждую минуту в течение 30 мин. Затем строят график OD в зависимости от времени с учетом предпосылок падения pH контрольной пробы, и вычитают данное значение из значения, полученного при добавлении яда. После этого все показания выражают в процентах систематизированного контрольного показания.

Исследования нейтрализации.

Эксперименты по нейтрализации проводились с применением Ig G отрезков соответствующей антисыворотки. Эти препараты получают осаждением соли из всей антисыворотки, (18% сульфата натрия, 25^oC в течение 1,5 ч).

Аналитический и субстратный буферы, применяемые для этих исследований, были идентичными применяемым в вышеописанных экспериментах.

1 л противоядия в 10-кратном разбавлении в буфере (исходный раствор) разбавляют еще два раза и добавляют 100 мкл количества к 100 мкл раствора конкретного яда (10 мкг). Подготавливают два дополнительных комплекта проб для регулирования падения pH (200 мкл аналитического буфера) и общего гидролиза (100 мкл буфера и 100 мкл раствора яда). Затем пробы выдерживают 30 мин при комнатной температуре. В течение данного периода подготавливают субстратный раствор и проверяют pH. После этого измеряют нулевое время OD 2,8 мл количеств субстратного раствора. Это проделывается непосредственно перед добавлением 200 мкл раствора яд/противоядие (после 30-мин инкубационного периода). Проводят дополнительные 15-мин инкубирование при комнатной температуре, и затем считывают OD. Результаты затем обрабатывают, как описано выше, и выражают в виде процента нейтрализации яда в результате гидролиза.

Результаты.

Вышеназванные испытания проводились с использованием ядов четырех гремучих змей, которыми были Apiscivorous, C. adamanteus, C. atrox и C. scutulatus.

На фиг. 1 показано, что каждый из этих ядов содержит сильнодействующие PLA2 ферменты, и показан порядок активности: A. piscivorous > C. adamanteus = C. scutulatus > C. atrox. Затем устанавливают способность нейтрализации PLA2 описанных выше противоядий.

Исследование нейтрализации проводилось с использованием смешанного моноспецифического противоядия, приготовленного смешенным равных объемов одинаковой концентрации моноспецифических Ig G, полученных иммунизацией четырех групп овец против яда A pisivorous, C. adamanteus, C. atrox и C. scutulatus. Концентрации определяли с помощью метода азотного анализа Кьельдаля и уравнивали добавлением соответствующих количеств ПВС.

Контрольные исследования нейтрализации также проводились с использованием многоспецифических противоядий, выработанных для каждого из ядов, и с использованием полиспецифических противоядий, выработанных для смеси 1:1:1:1 этих ядов. В контрольных экспериментах использовали в точности аналогичные схемы, включая источники яда, иммунизацию, очистку и испытания, как и в эксперименте со смешанным моноспецифическим противоядием.

Результаты показаны на фиг.2, где видно, что смешанное моноспецифическое противоядие обладает большей или равной эффективностью по сравнению с соответствующими полиспецифическими антисыворотками для нейтрализации активности PLA2 яда. Действительно, для трех из четырех испытываемых ядов потребовалось значительно меньше противоядия для достижения 50%-ной нейтрализации.

Кроме того, смешанные моноспецифические противоядия обладают также сходной или большей эффективностью, чем гомологическое моноспецифическое противоядие, указывая на то, что смешанное моноспецифическое противоядие имеет более высокую степень перекрестной реакционноспособности.

Эти результаты привели к выводу, что в случае нейтрализации PLA2 смешанная моноспецифическая антисыворотка гораздо эффективнее, чем ее полиспецифический аналог.

Противоядие от укусов ядовитого животного на основе антисыворотки, включает смесь по крайней мере двух антисывороток, выработанных по отношению к различным ядам. Набор для введения противоядия включает противоядие и средство для инъекции. Противоядие обладает более высокой иммуногенностью. 4 с. и 7 з.п. ф-лы, 3 табл., 2 ил.

1. Противоядие от укуса ядовитого животного на основе антисыворотки, отличающееся тем, что оно включает смесь по крайне мере двух антисывороток, выработанных по отношению к различным ядам. 2. Противоядие по п.1, отличающееся тем, что каждый компонент антисыворотки является моноспецифическим. 3. Противоядие по пп.1 и 2, отличающееся тем, что каждая антисыворотка включает F(ab¹)₂ или F(ab) фрагменты, получаемые частичным дигерированием IgG всей сыворотки. 4. Противоядие по пп.1 - 3, отличающееся тем, что каждой антисывороткой является овечье антисыворотка. 5. Противоядие по пп.1 - 4, отличающееся тем, что каждая антисыворотка присутствует в количестве, обусловленном токсичностью и частотой укусов людей в конкретной географической местности конкретным ядовитым животным, против яда которого выработана каждая антисыворотка. 6. Противоядие по п.5, отличающееся тем, что каждый компонент антисыворотки присутствует в прямой пропорции относительно частоты укусов людей в конкретной географической местности конкретными видами или подвидами ядовитого животного, против яда которого выработана каждая антисыворотка. 7. Противоядие по пп.1 - 6, отличающееся тем, что каждая антисыворотка выработана против змеиного яда. 8. Противоядие по п.7, отличающееся тем, что каждая антисыворотка выработана против яда гремучей змеи. 9. Способ получения противоядия от укуса ядовитого животного, включающий смешивание антисывороток отличающийся тем, что берут по крайне мере две антисыворотки. 10. Способ противоядия яду, включающий введение противоядия субъекту, страдающему от действия яда, отличающийся тем, что вводят противоядие по пп. 1-8 в эффективном количестве. 11. Набор для введения противоядия в организм человека или животного, включающий противоядие и средство для инъецирования противоядия, отличающийся тем, что в качестве противоядия он содержит противоядие по пп.1-8.