СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБСЕМЕНЕННОСТИ ПАТОГЕННЫМИ МИКОБАКТЕРИЯМИ ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ Российский патент 1998 года по МПК C12Q1/04 C12Q1/04 C12R1/32 C12R1/85 

Изобретение относится к бактериологии, а именно к способам определения обсемененности объектов окружающей среды микроорганизмами, и может быть использовано при диагностических исследованиях на туберкулез, а также при оценке результатов дезинфекции хозяйственных дворов неблагополучных по туберкулезу хозяйств.

Известны способы обнаружения микобактерий из объектов внешней среды, включающий отбор проб сена, соломы, силоса, сенажа, растительных трав, корнеплодов, торфа, опилок, смывы с поверхности различных предметов и т.п., обработку химическими веществами, которые, с одной стороны, полностью сохраняют жизнеспособность микобактерий туберкулеза, а, с другой стороны, подавляют рост неспецифической микрофлоры, посев на одну из ячеечных сред с последующим учетом роста культур и изучением выделенных первичных культур.

Общим недостатком известных способов является их недостаточная эффективность, что обусловлено ограниченностью исследований в результате общепринятого мнения о невозможности размножения и активного проживания инфекционного начала в окружающей среде.

Цель изобретения - повышение точности определения.

Поставленная цель достигается тем, что дополнительно учитывают быстрорастущие колонии дрожжей, которые окрашивают по Цилю-Нильсону с последующим выявлением внутриклеточно растущих микобактерий.

Способ осуществляется следующим образом.

Пробы из окружающей среды (соскобы с кормушек, автопоилок, смывы с поверхности предметов) деконтаминируют, т.е. обрабатывают химическими веществами, бактерицидно действующими на неспецифическую микрофлору и щадящими микобактериями, преимущественно 5%-ными и более концентрированными растворами серной, щавелевой или соляной кислоты, высевают на яичные среды и учитывают рост микобактериальных культур. При появлении колоний дрожжей через 10 дней роста определяют наличие внутриклеточного роста микобактерий. Способ основан на экспериментально подтвержденной возможности развития микобактерий в клетках дрожжей. Факт внутриклеточного развития микобактерий в доступной нам специальной литературе на описан, что подтверждает новизну предлагаемого способа. Существенный признак - выявление быстрорастущих колоний дрожжей с внутриклеточно растущими микобактериями - совпадает с отличительным, обеспечивающим получение положительного результата - повышение точности определения.

Пример. В хозяйстве, длительно неблагополучном по туберкулезу, проводят исследование смывов с поверхности автопоилок и кормушек, которые берут с помощью тампонов, помещенных в стерильные пробирки с физиологическим раствором. Обработку смывов проводят по методу Гона-Левенштейна-Сумиоши. Перед обработкой тампоны отжимают, к отжатой жидкости добавляют 5%-ный раствор щавелевой кислоты и высевают на среду Левенштейна-Йенсена. Через 3 дня выявляют белые колонии неопределенной формы, которые идентифицируют как дрожжи. Через 10 дней проводят их окраску по Цилю-Нильсену. В клетках дрожжей выявляют кислотоустойчивые включения в виде изогнутых палочек, коротких палочек и кокков, сходных с культурой микобактерий. Заражение культурой дрожжей двух морских свинок через 5 недель вызывают их истощение, увеличение лимфатических узлов и положительную реакцию (7 - 10 мм) на внутрикожное введение 5 ТЕ туберкулина млекопитающих. При вскрытии морских свинок обнаруживают увеличение лимфатических узлов, поражение легких, печени и селезенки, характерные для туберкулеза. В мазках, окрашенных по Цилю-Нильсену, выявляют кислотоустойчивые микобактерии с ярко выраженным полиморфизмом. Посевы органов морских свинок на среду Левенштейна-Йенсена в течение 3-4 месяцев не дают положительных результатов в виде визуально обнаруживаемых колоний, однако мазки с нижней части скоса среды позволяют при окраске по Цилю-Нилсену выявлять полиморфные культуры микобактерий. Дрожжевые культуры в возрасте 2 - 5 недель после обнаружения в них внутриклеточно растущих микобактерий исследуют на газовом хроматографе. В ходе газохроматографического анализа выявляют миколовые кислоты, характерные только для микобактерий, и пик гексакозановой кислоты (C_26:0), характерный только для патогенных микобактерий, в том числе для микобактерий бычьего вида.

Использование способа позволит выявить с большей точностью обсемененность окружающей среды патогенными микобактериями, что позволит своевременно и эффективно профилактировать туберкулез. Выявленные факты меняют взгляд на туберкулез только как на антропозооноз и позволяют рассматривать его как сапроноз, т.е. учитывать возможность размножения и активного проживания инфекционного начала - патогенных микобактерий в окружающей среде.

Изобретение относится к бактериологии, а именно к способам определения обсемененности объектов окружающей среды микроорганизмами. В посевах патологического материала после соответствующей деконтаминации при выявлении колоний дрожжей их окрашивают по Цилю-Нильсену с последующим выявлением внутриклеточно растущих патогенных микобактерий. Способ обеспечивает повышение точности определения микобактерий в объектах окружающей среды при диагностических обследованиях хозяйств на туберкулез и оценке результатов дезинфекции в хозяйствах, длительно неблагополучных по туберкулезу.

Способ определения обсемененности патогенными микобактериями объектов окружающей среды, включающий отбор проб, их деконтаминацию, посев на плотные питательные среды и выявление колоний микобактерий, отличающийся тем, что при выявлении колоний дрожжей их окрашивают по Цилю-Нильсену с последующим выявлением внутриклеточно растущих микобактерий.