Изобретение относится к профилактическим и терапевтическим препаратам с улучшенной эффективностью их проникновения через кожу, которые оказываются особенно ценными при доставке в организм ингибиторов ацетилхолинэстеразы карбаматного основного типа, а более конкретно - типа физостигмина.
Карбаматы пиридостигмина и физостигмина являются неконкурентоспособными ингибиторами ацетилхолинэстеразы, но имеют свойство диссоциировать из этого фермента таким образом, что через относительно короткий промежуток времени, например около 15 мин, достигается значительное восстановление активности эстеразы. Этот эффект является полной противоположностью таковому, который наблюдается у органофосфатных веществ нервно-паралитического действия, таких, например, как зарин и табун, которые изменяют в химической отношении место активного действия эстеразы, постоянно разрушая активность эстеразы и тем самым относящиеся к ней холинергические системы.
Было обнаружено, что определенную профилактическую дозу таких карбаматов можно использовать для защиты частичного количества ацетилхолинэстеразы субъекта от взаимодействия с органофосфатами, благодаря их способности блокировать место или участок активного действия данного фермента. Хотя прошедший обработку субъект может терять сознание или проявлять другие симптомы, будучи подверженным действию органофосфата, исследователи нашли, что частичное количество эстеразы, сохранившееся в результате защиты с помощью физостигмина, может оказаться достаточным для предотвращения смертельного исхода, по мере того, как и когда она освобождается из блокированного состояния посредством карбамата, диссоциирующего из фермента.
Очевидно, для обеспечения долговременной противохолинэстеразной защиты или других способов обработки долговременно и обратимо действующим ингибитором потребовался бы препарат, приносящий устойчивое облегчение. Приносящий устойчивое облегчение препарат орального применения мог бы уменьшить частотность введения его с одновременным обеспечением удобного способа дозирования, который не требует специального оборудования. До сих пор для достижения этой скромной цели не появилось удовлетворительного препарата.
В качестве профилактического средства защиты от нервно-паралитических веществ в настоящее время применяют карбамат в форме таблеток пиридостигмина. Пиридостигмин не переходит гематоэнцефалический барьер и, следовательно, не обеспечивает центральной нервной защиты. То же самое химическое свойство, которое не позволяет пиридостигмину входить в мозг, а именно его положительный заряд, предотвращает его проникновение в кожу. Однако физостигмин не несет в себе заряда, благодаря чему является идеальным кандидатом для трансдермальной доставки в организм. Но физостигмин обладает коротким периодом полувыведения из плазмы и имеет низкий терапевтический индекс, что обуславливает использование состава, приносящего устойчивое облегчение.
Хотя известен способ введения физостигмина путем инъекций, привлекательным альтернативным способом введения защитных доз представляется трансдермальный (т. е. через кожу) с использованием пластыря, несущего подходящую композицию трансдермальной доставки. Такая известная композиция доставки физостигмина раскрыта в патенте Великобритании N GB 2163347-А; она содержит смесь физостигмина с пропионовой кислотой в соотношении 50 вес.% к объему. В недавней работе, посвященной лечению болезни Альцгеймера (разновидность пресенильного слабоумия), авторы (Christie et al; Br. J. Psychiatry, 138 46-50 (1981)) идентифицировали такие трансдермальные фармацевтические составы, которые осуществляют доставку в организм через кожу физостигмина в терапевтически полезных дозах, а также в дальнейшем недавнем исследовании (Pardo et al; J. Pharm. Sci. 79 p. 573-578 (1990)) было показано, что термодинамическая активность физостигмина, которая направляет диффузию лекарства в кожу, получается наивысшей в случае бинарного носителя: изопропил миристат и изопропиловый спирт в пропорции 9:1 об/об.
Эти композиции можно применять для лечения целого ряда холинергических расстройств нервной системы, но при введении в дозировках, требуемых в случаях отравления органофосфатом, выяснилось, что необходимо было накладывать неудобно большие по размеру лоскуты пластыря. Более того, большие количества физостигмина, которые должны были быть в наличии на таких лоскутах, могли оказаться летальными в случае, если вдруг у пациента имеется повреждение кожи, например проникающее ранение, на участке наложения лоскута лечебного пластыря.
Изобретение обеспечивает улучшенные композиции, которые позволяют доставлять через кожу увеличенные количества основных соединений в расчете на единицу соединения в повязке. Весьма благотворно данные композиции применяют для доставки основных соединений неионной формы, т.е. такие, которые не подвержены ионизации путем, например, кватернизированных азотных групп. Таким образом, предлагаемые настоящим изобретением композиции позволяют уменьшить количество соединения, которое требуется помещать в повязку, с достижением того преимущества, что площадь повязки может быть уменьшена.
Следует учесть, что композиции настоящего изобретения можно применять для трансдермальной доставки основных (протонакцептирующих) соединений, в частности физостигмина и его аналогов, для любой профилактической и терапевтической цели, особенно при длительных лечебных процессах. Так, возможное лечение, между прочим, болезни Альцгеймера (старческий склероз мозга или разновидность пресенильного слабоумия), болезни Парксинсона (дрожательный паралич), синдрома Пика (предстарческая ограниченная атрофия мозга), синдрома Герштмана-Штраусслера, миастении-гравис (спинальный паралич) и глаукомы осуществляется с применением таких композиций. Патент Великобритании N GB 2163347-А делает далее предположение относительно холинергических дисфункций, где можно было бы применить такую трансдермальную доставку, и они также будут представлять собой потенциально ценные области для применения композиций настоящего изобретения.
Конкретные предпочтительные композиции согласно данному изобретению не только достигают требуемых дозировок, но и обеспечивают стабильное подавление ферментативной активности.
В своей самой широкой форме настоящее изобретение обеспечивает композиции, содержащие жирную кислоту низкого молекулярного веса, отличающиеся тем, что они далее содержат жирную кислоту с длинной цепью молекулярной структуры или сложный эфир низшего алкила жирной кислоты с длинной цепью молекулярной структуры, где указанная длинная цепь представляет собой цепи C13-C21, предпочтительно содержащая, по меньшей мере, одну цис-олефиновую связь; и далее, настоящее изобретение обеспечивает использование этих композиций в качестве носителей трансдермальной доставки.
Предпочтительной длиной цепи для указанной длинной цепи жирной кислоты или сложного эфира жирной кислоты, исключая углерод гидроксильной группы, будет C15-C19, а наиболее предпочтительно это значение C17. Предпочтительно, чтобы эта длинная цепь была прямой, неразветвленной (n-) цепью, и чтобы она имела предпочтительно только одну цис-олефиновую (C=C) связь. Когда кислота является этерифицированным низшим алкилом, то в качестве такой группы низшего алкила предпочтительно брать алкил C1-C4, более предпочтительно алкил C1-C2. Таким образом, миристеиновая кислота является пригодной к употреблению насыщенной кислотой, но более предпочтительными являются ненасыщенные кислоты с более длинными цепями молекулярной структуры, как, например, олеиновой кислоты. Компонентом жирной кислоты низкого молекулярного веса предпочтительно является жирная кислота C2-C4, и еще более предпочтительно пропионовая кислота или масляная кислота. Особенно предпочтительным компонентом жирной кислоты низкого молекулярного веса является пропионовая кислота.
Специалисту в данной области понятно, что увеличение длины цепи молекулярной структуры жирной кислоты может вызывать все более вероятный разрыв тканевых липидных слоев, тогда как уменьшение длины цепи, как это можно ожидать, понижает способность проникновения такой композиции, а стало быть ведет и к уменьшению количества подлежащего доставке через кожу самого целевого соединения (т.е. лекарственного препарата); таким образом, эти факторы, между прочим, нельзя упускать из виду при подборе композиции к выбираемому конкретному активному ингредиенту. Необходимо также отметить, что используемый здесь термин "активный ингредиент" подразумевает в первую очередь профилактическую или терапевтическую активность, а не повышенную активность, связанную с процессом перехода кожного покрова.
Предпочтительные отношения жирной кислоты с длинной цепью молекулярной структуры или ее сложного эфира к жирной кислоте низкого молекулярного веса лежат в пределах от 40:60 до 60:40 (об/об), более предпочтительно в пределах от 40:55 до 55:45 (об/об) и наиболее предпочтительно иметь это отношение равным приблизительно 50:50 (об/об), тогда как предпочтительное содержание активного ингредиента в этой смеси составляет величину от 10 до 50 вес.% к объему смеси. Более предпочтительно это значение в пределах от 20 до 30 вес.% к объему смеси и наиболее предпочтительно значение 25% мас/об.
Композиция для трансдермальной доставки, указанная выше, особенно пригодна для доставки неионогенных основных антихолинэстеразных ингибирующих соединений карбаматного типа, в частности физостигмина и его аналогов. Из дальнейшего рассмотрения будет ясно, что данная композиция пригодна для трансдермальной доставки и многих других типов основных, особенно неионных основных соединений.
Предпочтительные компоненты жирных кислот с длинной цепью - олеиновая кислота и этилолеат - являются токсикологически приемлемыми для введения лекарств, но никогда не употреблялись в композициях физостигмина для трансдермального применения. Ни олеиновая кислота, ни этилолеат не влияют на устойчивость физостигмина, тогда как проведенные изобретателями исследования некоторых длинноцепочечных жирных кислот и сложных эфиров, например изопропилмиристата, показали медленное ухудшение качества физостигмина. Применение кислотного компонента, а данном случае жирной кислоты с низким молекулярным весом, например пропионовой кислоты, требуется для того, чтобы сольватировать и нейтрализовать основный активный агент, например свободное основание физостигмина.
Как указано выше, профилактика карбаматом отравления, вызванного веществом нервно-паралитического действия, зависит от доли ацетилхолинэстеразы, ингибированной карбаматом (например, физостигмином или пиридостигмином), которая сохранилась под воздействием нервно-паралитического отравляющего вещества, когда вся несвязанная ацетилхолинэстераза оказывается фосфонилирована органофосфатным веществом нервно-паралитического действия. После отравления карбамилированная доля ацетилхолинэстеразы имеется в наличии для спонтанного обращения в функциональный фермент, восстанавливающий организм до нормальной физиологической функции. Таким образом, субъект оказывается либо полностью защищенным, либо по крайней мере спасен от летательных поражающих факторов отравляющих веществ нервно-паралитического действия. Исследователи обнаружили, что для осуществления такой профилактики необходимо защитить (накопить и сохранить в организме) указанным образом примерно 30% из имеющейся ацетилхолинэстеразы.
Изобретатели изучили абсорбцию физостигмина через кожу человека, чтобы произвести оценку выполнимости его трансдермальной доставки в организм, как предварительного введения лекарства при воздействии отравляющих веществ нервно-паралитического действия. Проникновение радиоактивно меченого физостигмина через эпидермис человека было измерено (in vitro) с использованием стеклянных диффузионных ячеек, где оптимизация абсорбции физостигмина была достигнута путем применения композиций настоящего изобретения, как средств усиления процесса проникновения.
Доставка лекарств в организм трансдермальным путем представляет собой область повышенного интереса и предлагает преимущество при необходимости длительного и стабильного ввода лекарства в кровь. Однако отличные свойства кожи, как барьера, налагают серьезное ограничение на лекарство в отношении требуемой дозировки. Следовательно, прежде чем заняться разработкой системы трансдермальной доставки, необходимо определить, проникает ли лекарство, подлежащее введению в организм, через кожу человека в требуемом терапевтическом количестве.
Клинические исследования показывают, что скорость внутривенного вливания 400 мкг/ч создает ингибирование холинэстеразы в крови приблизительно на 30%. Это ингибирование не вызывает явных признаков отравления холинэстеразой и не ухудшает ее клинического эффекта. При доставке лекарства трансдермальным способом, если проницаемость кожи становится ограничивающим фактором, биологическая доступность может быть увеличена путем использования большей площади поверхности. Практические соображения ограничивают размер повязки (или лоскута пластыря), накладываемой на тело человека, величиной примерно 20 см, что обуславливает скорость проницаемости по меньшей мере 20 мкг/см2/ч. для практически выполнимой трансдермальной доставки физостигмина. Более высокие значения скорости проницаемости позволяют уменьшить приготовленное к введению общее количество физостигмина, как и размер повязки (или накладываемого на кожу лоскута пластыря) с лекарством, тем самым сводя к минимуму опасность интоксикации физостигмином после ранения на участке указанной повязки.
Пригодность композиций настоящего изобретения для вышеуказанной трансдермальной доставки в организм активных ингредиентов теперь будет проиллюстрирована на конкретных примерах таких композиций, которые приведены для облегчения понимания преимущества последних специалистами в данной области.
Приведенные примеры приведены для иллюстрации изобретения, но не ограничивают его.
Фиг. 1 - график абсорбированного активного соединения (кумулятивное количество поглощенного вещества, мкг/время в часах), иллюстрирующий проникновение физостигмина через эпидермис человека из следующих веществ:
(о) - насыщенный пропиленгликоль;
(+) - изопропилмиристат;
(▪) - пропиленгликоль/олеиновая кислота в соотношении 10:90.
Точки на графиках представляют средние значения результатов 3-5 идентичных опытов.
Фиг. 2 - график абсорбированного активного соединения (кумулятивное количество поглощенного вещества, мкг/время в часах), иллюстрирующий проникновение физостигмина через эпидермис человека из следующих веществ:
(+) - 50% физостигмина в пропионовой кислоте;
(о) - 25% физостигмина в смеси пропионовая кислота/изопропилмиристат (в соотношении 50:50 об./об.);
(▪) - 25% физостигмина в смеси пропионовая кислота/олеиновая кислота (в соотношении 50:50 об./об.).
Точки на графиках представляют средние значения результатов 3 - 5 идентичных опытов.
Фиг. 3 - график абсорбированного активного соединения (кумулятивное количество поглощенного вещества, мкг/время в часах), иллюстрирующий проникновение физостигмина через эпидермис человека из смеси пропионовая кислота/олеиновая кислота (смешанных в пропорции 50:50 объемных единиц) со следующими добавками физостигмина:
(▪) - 1% (вес/объем);
(+) - 25% (вес/объем);
(о) - 10% (вес/объем).
Фиг. 4 - график абсорбированного активного соединения (кумулятивное количество поглощенного вещества, мкг/время в часах), иллюстрирующий проникновение физостигмина через эпидермис человека из 10%-ного раствора пропионовой кислоты/олеиновой кислоты (смешанных в пропорции 10:90 объемных единиц).
Фиг. 5 - схематический разрез трансдермального аппликатора для локального применения физостигмина на коже морской свинки; этот аппликатор приклеивают к участку кожи с короткосостриженной шерстью на задней грудной части, примерно в 2 см книзу от ушей.
Фиг. 6 - график ингибирования холинэстеразы в крови трансдермальным физостигмином в пропионовой кислоте (50:50 вес/объем), с аппликатором, приложенным в момент нулевой временной отметки и снятым через 72 часа (показанный стрелкой). Штриховыми линиями показаны значения активности холинэстеразы в плазме, непрерывными линиями - то же, в эритроцитах, а треугольники означают данные по животным контрольной группы, не подверженным обработке препаратом. Точки на графиках предоставляют средние значения с +/- допустимым отклонением по 5 животным. Площадь аппликации составляет 1 см2.
Фиг. 7 - график ингибирования холинэстеразы в крови посредством 25% (вес/объем) физостигмина в смеси пропионовой/олеиновой кислот (в пропорции 50: 50 об. ед. ). Аппликатор установили в нулевой временной момент и сняли спустя 72 часа после этого (момент снятия указан стрелкой). Штриховыми линиями показаны значения активности холинэстеразы в плазме, непрерывными линиями - то же, в эритроцитах, а треугольники означают данные по животным контрольной группы, не подверженным обработке препаратом. Точки на графиках представляют средние значения с +/- допустимым отклонением по 5 животным. Площадь аппликации составляет 0,5 см2.
Материалы и методы - Химические реактивы
Наименование реактивов - Фирма-поставщик
[3H] вода и [3H]физостигмин степень радиохимической чистоты: более 90%. - Amersham International plc (Amersham, UK)
Этиолеат, сквален, пропиленгликоль, пропионовая кислота (все со степенью чистоты более 90%) и олеиновый спирт (66%) - Aldrich chemical company Ltd (Gillingham, UK)
Изопропилмиристат (98%), N - гидроксиэтиллактамид (70%-водный раствор) и физостигмин (свободное основание). - Sigma Chemical Company Ltd (Poole, UK)
Сцинтилляционная жидкость и Солуен-350. - United Techologies, Packard (Illinois, USA)
Олеиновая кислота (чистота более 99%). - BDH chemicals Ltd (Eastleigh, UK)
Монометиловый эфир дипропиленгликоля. - Dow Chemicals (Rotterdam)
Физостигминовое основание в количестве 10 - 20 мг взвесили и поместили в мерную колбу (с 1 мл делениями). Туда же добавили первоначальный объем 25 мл выбранного носителя, и смесь подвергли ультразвуковому перемешиванию в течение 30 минут. Если в конце указанного периода времени растворения не произошло, в колбу добавляли дополнительные 10 - 50 мкл - аликвотные количества носителя и процесс повторяли до тех пор, пока не добивались полного растворения.
2%-ный раствор физостигмина приготовили в носителе, подлежащем оценке. Два миллилитра этого раствора поместили в ампулу, добавив туда известное количество радиоактивного физостигмина (А0 отсчетов в минуту). Данный раствор подвергли встряхиванию и 50 мкл-аликвоту взяли для подсчета в 5 мл сцинтилляционной жидкости (A1 отсчетов в минуту). Взвешенный кусочек эпидермиса человека (г) поместили в ампулу, содержащую указанный раствор физостигмина, полностью утопив его. Ампулу инкубировали в течение 48 часов при температуре 30oC, при этом подвергая ее время от времени встряхиванию; затем взяли 50 мкл-аликвоту и подсчитали в 5 мл сцинтилляционной жидкости (А2 отсчетов в минуту).
2 мл 2%-ного раствора физостигмина в каждом носителе - кандидате поместили в отдельные пробирки и в каждую пробирку добавили по 10 мкл запаса радиоактивного физостигмина. Дополнительное количество в 10 мкл было добавлено к 5-мл сцинтилляционной жидкости и произведен подсчет радиоактивности с получением дозы общей добавленной радиоактивности (А0 отсчетов в минуту). Затем произвели подсчет радиоактивности у аликвотных проб каждого раствора-кандидата с получением доз общей радиоактивности в растворе после гашения (А1 отсчетов в минуту). Поправка гашения для каждого раствора дается выражением:
A0/A1
Известная навеска эпидермиса (г) была затем добавлена в каждый раствор с инкубированием в течение 48 часов при температуре 30oC и периодическим встряхиванием. Затем производили измерение уровня радиоактивности, остающейся в каждом двухмиллилитровом объеме носителя (A2 отсчетов в минуту), и концентрация радиоактивных веществ в растворе (CS) была подсчитана по следующей формуле:
CS = (A0/A1)•(A2/2) распадов в минуту/мл (1)
Эпидермальную мембрану высушивали между листами фильтровальной бумаги, солюбилизировали в 1 мл Солуена-350, подсчитывали радиоактивность в 10 миллилитрах сцинтилляционной жидкости (S1 отсчетов в минуту). Двадцать пять микролитров стандартного физостигминового раствора с известным уровнем радиоактивности (S0 отсчетов в минуту) было добавлено в ампулу, после чего в ней был проведен повторный подсчет радиоактивности (S2 отсчетов в минуту). Принимая значение плотности кожи равным 1 г/мл, была подсчитана концентрация радиоактивности в ткани (Ct) по следующей формуле:
Ct = S1•S0/W(S2-S1) распадов в минуту/мл (2)
Были также определены значения фонового счета с введением соответствующих поправок для ткани, солуена и сцинтилляционной жидкости (в образуемых системах). Коэффициент разделения (Km) был затем подсчитан следующим образом:
Km = концентрация в ткани/концентрация в растворе = Ct/Cs (3)
Насыщенные растворы физостигмина в изопропилмиристате, пропиленгликоле и в пропиленгликоль/олеиновой кислоте (50:50 об.ед.) были приготовлены путем добавления избыточного количества физостигмина к 1 мл носителя. Эти растворы подвергали бурному перемешиванию с помощью вихревой мешалки, после чего давали возможность постоять. После проведения пяти сеансов очередных перемешиваний излишнему количеству физостигмина позволили осесть. Полученный раствор, названный "насыщенным", отбирали с помощью пипетки Пастера и затем "заостряли" его посредством 5 - 10 мкл [3H]-физостигмина перед тем, как использовать его для исследований чрескожной абсорбции (т.е. впитывания препарата в кожу).
Все остальные композиции (вес/объем) были приготовлены следующим образом. Физостигмин отвешивали и переносили в 10 мл колбу с круглым дном. Носитель вводили в эту колбу пипеткой и полученный образец "заостряли" с помощью 5 - 10 мкл [3H]-физостигмина. Полученную смесь подвергали бурному перемешиванию в ультразвуковой бане до тех пор, пока не происходило растворение. Все наработанные составы (композиции) были защищены от света и хранились при температуре 4oC до востребования.
Кожу с живота умершего человека брали, помещая ее в герметически закрываемые полиэтиленовые пакеты и обеспечивая их хранение при температуре минус 20oC. При потреблении, ткани давали возможность оттаивать при комнатной температуре и удаляли подкожный жир. Эпидермические пленки (т.е. кожицу или наружный слой эпидермиса) отделяли от полной толщины кожи путем погружения ее в воду при температуре 60oC на время 45 сек с последующим медленным и аккуратным отдиранием эпидермиса.
Эксперименты по чрескожному поглощению препаратов выполняли методом in vitro с использованием стеклянных диффузионных ячеек. Эпидермические мембраны установили в диффузионных ячейках Франца с площадью поперечного сечения 2,54 см2. Ячейки поместили в водную баню, в которой поддерживали температуру 30oC, при этом верхнюю поверхность мембраны подвергали воздействию донорского раствора. Нижнюю поверхность этой мембраны обмывали непрерывно перемешиваемой рецепторной жидкостью (в объеме 4 - 5 мл).
Перед нанесением композиции, содержащей физостигмин, производили оценку целостности каждого приготовленного кожно-мембранного элемента путем определения проницаемости последнего для воды, меченной тритием. Эксперименты по проницаемости для воды протекали на протяжении 6-часового периода, что гарантирует достижение условий стабильного состояния. В качестве рецепторной жидкости применяли физиологический солевой раствор, а 1 мл солевого раствора, содержащего меченную тритием воду (0,2 милликюри/см3), ввели в донорскую камеру. Затем с интервалом в один час производили пробоотборы (по 25 мкл) из рецепторной части ячейки. В конце цикла прогонки на меченной тритием воде удалили как донорский, так и рецепторный растворы, и, пользуясь дистиллированной водой, сделали 2-3 промывки поверхностей кожи. Затем камеры заполнили дистиллированной водой и оставили на ночь, чтобы десорбировать эпидермические мембраны, лишив их остаточной активности.
При обследовании на следующий день любая мембрана с коэффициентом проницаемости более чем 1,5 • 103 см/ч. считалась поврежденной и отстранялась от последующих измерений проницаемости. Рецепторные камеры наполнили 50%-ным водным раствором этанола, а в донорские камеры внесли 200 мкл меченого физостигмина (1 мккюри). Степень прохождения физостигмина через мембрану отмечалась путем пробоотборов рецепторного раствора (50 мкл) на протяжении периода 3-х суток.
Подсчет радиоактивности рецепторных проб производили в 5 мл - объеме сцинтиляционной жидкости на жидкостном сцинтилляционном счетчике модели 1215 Ракбета - II.
Результаты экспериментов по впитыванию кожей препаратов представлены в виде графиков, как кумулятивное количество поглощенного вещества в зависимости от времени. Скорость стабильного проникновения или поток J (мкг•см-2•ч-1) вычисляли методом линейного регрессионного анализа, исходя из линейных участков графиков. Коэффициент проницаемости Кр (см•ч-1) получили, пользуясь следующим математическим выражением:
J = Km•D•c/S = Кр•с (4)
где
c - концентрация проникающего вещества (мкг•см-3) в донорской камере;
Km - коэффициент распределения проникающего вещества между носителем и кожей;
D - коэффициент диффузии проникающего вещества в эпидермис;
S - толщина мембраны.
Точка пересечения на временной оси названа временем запаздывания τ и связана с коэффициентом диффузии D следующим образом:
Величину потока можно также выразить исходя из активности лекарства в носителе (a)
где
f - коэффициент активности лекарства в кожном барьере, обычно принято считать f константой, так что изменения фактора проникновения связаны с изменениями активности лекарства в носителе. По определению, твердое вещество имеет термодинамическую активность, равную единице, и поэтому насыщенный раствор, который находится в равновесии с данным твердым телом, должен также иметь эту активность, равной единице. Следовательно, при идеальных условиях максимальная скорость проникновения будет достигнута с насыщенными растворами лекарства. Выполнять измерения активности - трудная задача, и обычно определяют отношение концентрации растворенного вещества к значению его растворимости (процентное насыщение), чтобы получить указание (или характеристику) этой активности, или "тенденцию ухода" проникающего вещества в носителе. На практике количество лекарства в донорском растворе будет убывать во время эксперимента, но если его истощение не превышает 10% общего количества в доноре, то влияние на скорость проникновения будет незначительным. Если содержание лекарства в донорском растворе снижается менее чем на 10% в течение эксперимента, то можно допустить, что данный донорский раствор является неистощимым источником и эксперимент проходит в условиях наличия неорганической дозы лекарства.
Коэффициенты нарушения водопроницаемости определяли для оценки разрушающего мембрану потенциала различных композиций физостигмина. Это связано с измерением коэффициента проницаемости воды, меченой тритием, через данную мембрану до и после наложения испытуемой композиции на эпидермальную поверхность в течение заданного промежутка времени. Тогда коэффициент повреждения (DR) задается следующим соотношением:
DR = Кp воды после введения носителя/Кp воды до введения носителя (7)
Пропиленгликоль, изопропилмиристат и смесь пропиленгликоль/олеиновая кислота (в пропорции 50:50 об.ед.) были отобраны в качестве сравнительных композиций для оценки их как носителей для трансдермальной доставки физостигмина. Композиции физостигмина в двухкомпонентных системах, состоящих из смесей пропионовая кислота/изопропилмиристат (в пропорции 50:50 об.ед.) и пропионовая кислота/олеиновая кислота (в пропорции 50:50 об.ед.) были подвергнуты оценке в сравнении с композицией содержащей 50% физостигмина в пропионовой кислоте, описанной в патенте N GB 2163347A. Также были исследованы влияния изменения концентрации физостигмина и пропорций в носителе пропионовой кислоты/олеиновой кислоты.
Исследования распределения и фактора растворимости были использованы для оценки олеилового спирта, этилолеата, сквалена, монометилового эфира дипропиленгликоля и N-гидроксиэтиллактамида в качестве альтернативных носителей для трансдермальной доставки в организм физостигмина.
На фиг. 1 - 4 представлены временные характеристики процесса проникновения физостигмина через эпидермис человека из испытуемых смесей. Соответствующие данные по проницаемости сведены в табл.1. За исключением насыщенного изопропилмиристата, а также 1%- и 10%-ного состава пропионовая кислота/олеиновая кислота, индекс проникновения составил величину менее 10% от нанесенной дозы, что удовлетворяет условиям наличия "безграничной" дозы лекарства (т. е. неистощимого донорского источника), обеспечивая достижение и поддержание режима стабильности состояния. Отметим, что из состава изопропилмиристата (см. фиг.1) количество физостигмина быстро уменьшалось. В результате лишь переходное стабильное состояние наблюдалось, когда за 50 ч. было поглощено почти 50% нанесенной дозы.
Физостигмин должен быть химически стойким в каждом составе в течение периода измерения диффузии. Физостигмин разлагается на рубресерин и другие продукты молекулярной деградации путем гидролиза и последующего окисления, чему способствует воздействие света и тепла. Рубресерин имеет яркий красный цвет, а из соединений, изученных в данной работе, только пропиленгликоль, пропиленгликоль/олеиновая кислота и N-гидроксиэтиллактамид приобрели розовую/красную окраску (спустя 10 - 24 ч). Точная степень распада физостигмина не определена. Названные "насыщенными" растворы изопропилмиристата, пропиленгликоля и смеси пропиленгликоль/олеиновая кислота, использованные для получения скоростей потока, указанных в таб.1, были получены путем вихревого перемешивания, как это указано выше. Последующий анализ методом ультрафиолетовой спектроскопии и сравнение с растворами, приготовленными способом гомогенизации ультразвуком, подтвердили, что они имеют значения степени насыщения, указанные в таблице 1. Вероятно, что расхождение результатов имело место из-за несоответствующего перемешивания растворов вихревой мешалкой в противоположность таковому с помощью ультразвукового гомогенизатора. Значения скорости диффузии оказываются слишком низкими, чтобы можно было их использовать с повязками практически удобного размера, но маловероятно, что в этом повинны химическая нестойкость или разброс в степени насыщения. Различие в значениях скорости диффузии между этими носителями и таковыми, содержащими пропионовую кислоту, оказывается слишком велико, чтобы его преодолеть путем увеличения концентрации при насыщении.
Применение пропионовой кислоты в качестве сорастворителя с изопропилмиристатом и олеиновой кислотой повышает растворимость и устойчивость физостигмина (фиг. 2). Составы физостигмина на основе двухкомпонентных растворителей, а именно 25% в смеси пропионовая кислота/изопропилмиристат и 25% в смеси пропионовая кислота/олеиновая кислота, обеспечили более высокие значения трансдермальных потоков (17 мкг • см-2 • ч-1 и 24 мкг • см-2 • ч-1, соответственно), чем 50%-ный состав пропионовой кислоты (13 мкг • см-2• ч-1) (табл. 1). Применение насыщенных растворов физостигмина может увеличить потоки при двухкомпонентных системах и можно заключить, что обе двухкомпонентные системы способны доставлять терапевтические количества физостигмина через кожу от повязок с площадью контакта, указанной в таблице 2.
Повышенные значения потоков, наблюдаемые в случаях двухкомпонентных систем, имеют место, по-видимому, благодаря сочетанию эффектов распределения/разделения и диффузионной способности. Эти носители имеют одинаковые коэффициенты распределения, Km (табл.3), способствуя внедрению физостигмина в кожу. Было принято без доказательства, что олеиновая кислота и изопропилмиристат стимулируют проникновение, создавая помеху липидным слоям рогового слоя и открывая проходы для диффузии (Albery et al, J. Pharm. Pharmacol.31 140-147 (1979)). Такой механизм обуславливает диффузию стимулятора в роговой слой до того, как проявится его усиливающее действие, чем можно объяснить увеличение значения времени задержки от этих носителей.
Уменьшение концентрации физостигмина в носителе "пропионовая кислота/олеиновая кислота" приводило в большим увеличениям проницаемости кожи (фиг. 3). Однако эти увеличения были связаны с повышенными значениями коэффициента повреждения водой (DR), как показано в таблице 4, что указывает на порчу мембраны, как виновника возросшей проницаемости, при 1%- и 10%-ных составах по сравнению с олеиновой кислотой (DR = 1,5). Значение DR, равное 2,4, вызываемое 25%-ным составом, представляет собой маленькое повреждение барьерного слоя. Хотя пропионовая кислота и является раздражающим средством, вероятно, что физостигмин, будучи в пропионовой кислоте, образует пропионат, благодаря чему уменьшается или даже устраняется раздражительное действие со стороны составов, содержащих физостигмин в большой концентрации. При низких концентрациях в этих составах может быть достаточное количество свободной кислоты, чтобы вызвать повреждение мембраны.
Для того, чтобы получить не наносящий повреждения состав, содержащий 10% физостигмина, соотношение объемов в смеси пропионовая кислота/олеиновая кислота было понижено с 50 : 50 до 10 : 90 (фиг.4). Этот носитель был насыщен физостигмином и, как ожидалось, не был бы раздражающим средством. По-видимому, олеиновая кислота все еще взаимодействовала с кожным липидом, на что указывает большое значение времени задержки, но трансдермальный поток физостигмина был очень мал. Такая картина может иметь место из-за менее благоприятного коэффициента отделения физостигмина от олеиновой кислоты, чем от смеси (в пропорции 50 : 50 об.ед) пропионовая кислота/олеиновая кислота. Следовательно, увеличение содержания олеиновой кислоты может понижать отделение физостигмина (от материала носителя) и внедрение его в эпидермис.
Концентрация и отделение являются критическими детерминантами трансдермального потока, как это видно из зависимости потока стабильного состояния (см. уравнение (4)). Из этого следует, что увеличение Km и c приведет к повышенным значениям скорости потока. Однако эти два параметра являются взаимозависимыми в том отношении, что носитель с высокой степенью растворимости для физостигмина будет, вероятно, в меньшей степени позволять физостигмину отделяться и внедряться в кожу, и наоборот. Как и предсказывалось, сквален, изопропилмиристат и этилолеат - все имеют относительно низкие степени растворимости для физостигмина, но высокие значения Km (табл. 3). И наоборот, олеиловый спирт, монометиловый эфир дипропиленгликоля, N-гидроксиэтиллактамид и олеиновая кислота имеют более высокую степень растворимости для физостигмина, но более низкие значения Km. Очевидно, что должен быть найден компромисс между Km и c при оптимизации составов носителя, что было выполнено и достигнуто у двухкомпонентных систем, испытанных к настоящему времени. Из пяти предпочтительных альтернативных носителей, находящихся в процессе оценки, по-видимому, этилолеат в сочетании с пропионовой кислотой является наилучшим носителем для трансдермальной доставки физостигмина. Он имеет более благоприятный Km, чем олеиновая кислота, и содержит цис-двойную связь, которая, как полагают, служит причиной усиливающего/стимулирующего действия этого соединения.
Тогда как изопропилмиристат повышает чрескожное поглощение посредством увеличения отделения и внедрения физостигмина в кожу, олеиновая кислота и этилолеат увеличивают как отделение, так и диффузионную способность его через указанную ткань. Более того, обнаружено, что изопропилмиристат влияет на устойчивость физостигмина, причем применение композиций настоящего изобретения, содержащих изопропилмиристат, ведет к очень медленному появлению розовой окраски, указывающей на продукты распада. Включение олеиновой кислоты и этилолеата в трансдермальные составы позволяет применять меньшие по площади трансдермальные повязки для введения нужной дозы человеку (например, повязку с площадью соприкосновения с кожей около 16 - 20 см2), содержащей меньшее количество физостигмина для данной потребности в дозировке, вследствие чего уменьшается опасность отравления от механического повреждения повязки и расположенной под ней кожи.
Примечание к табл. 3. Значения растворимости определялись посредством ультразвуковой гомогенизации смесей, как это описано в разделе "Материалы и методы". Все пропорции компонентов в смесях даны в объемных единицах (например, 10:90).
Примечание к табл. 4. Коэффициент разрушения -это отношение констант проницаемости для воды, меченой тритием, до и после подвержения мембраны воздействию лекарственного состава, как это подробно изложено в разделе "Материалы и методы".
Для дальнейшего исследования эффективности композиций настоящего изобретения было рассмотрено применение пропионовой кислоты и олеиновой кислоты в качестве носителей при трансдермальной доставке физостигмина в организм морской свинки. Эти эксперименты показывают, что составы препаратов, содержащие олеиновую кислоту, не обладают раздражающим действием спустя 48 часов после наложения с помощью аппликатора.
Материалы
Физостигмин (поставщик - фирма Сигма Кемикал компани, Пул, Дорсет);
Пропионовая кислота (поставщик - фирма Олдрич, Гиллингхам, Дорсет);
Олеиновая кислота (поставщик - Бритиш Драг Хаузиз, Пул, Дорсет).
Все вышеназванные вещества имели степень чистоты выше 99% и были употреблены в эксперименте сразу по поставке.
Животные - морские свинки (Dunkin - Hartley) - были закуплены у фирмы Интерфауна Лтд, Животных содержали в экспериментальном питомнике на протяжении всех экспериментов, позволяя им свободный доступ к воде и пище. В экспериментах по измерению активности холинэстеразы были использованы самки морских свинок (весом 700 - 1200 граммов), а в экспериментах по изучению раздражающего действия препаратов были использованы самцы указанных животных (весом 300 - 500 граммов).
Композиции с физостигмином.
Физостигмин в пропионовой кислоте готовили путем растворения свободного основания физостигмина в пропионовой кислоте в равных пропорциях (вес/объем) с помощью ультразвуковой гомогенизации. Олеиновую кислоту вводили в смесь путем растворения 25% (вес/объем) свободного основания физостигмина в смеси "пропионовая кислота/олеиновая кислота", составленной в пропорции 50 : 50 об./об.
Приготовленные композиции (1) наносили на коротко остриженный участок кожи (2) в резиновом колпачке (3), снятом с поршня одноразового шприца; полученное таким образом устройство будем называть "аппликатор". Мертвое пространство внутренней полости аппликатора заполнили силиконовой резиной (4), оставив место объемом примерно 100 мкл, которое заполнили составом-кандидатом. Колпачок приклеили с помощью адгезионного средства (5) к участку предварительно остриженной кожи заднегрудной области животного, приблизительно в 2 см в направлении книзу от ушей, с помощью цианоакрилового клея. Экспериментаторы нашли, что "СуперГлу Экстра (РТМ)", выпускаемый в форме геля, является наиболее эффективным клеем, так как он заполняет область вокруг волосковой щетины, обеспечивая более надежное уплотнение, чем жидкие адгезивы.
Аппликаторы, содержащие физостигмин, устанавливали после взятия пробы крови в первый день, и снимали после взятия пробы крови на третий день эксперимента. Животных слегка анестезировали с помощью Халотана для облегчения снятия аппликаторов, которые можно было бы оторвать рукой, и место аппликации прочистили водным раствором спирта с целью удаления остающегося медикамента. Площадь аппликации составляла 1 см2 для физостигмина в пропионовой кислоте и 0,5 см2 для физостигмина в смеси пропионовой и олеиновой кислот.
Взятие проб крови производили посредством прокола ушной вены, ежедневно, в течение пяти дней, и еще раз на седьмой день, с отбором непосредственно в пробоотборные трубки, содержащие этилендиаминтетраукусную кислоту в качестве антикоагулянта. Взятие пробы крови держали на льду вплоть до момента анализа. Эритроциты отделяли путем центрифугирования в течение 30 секунд при 14000 оборотов/мин на центрифуге фирмы Эппендорф модели 5415. При этом плазму резервировали, а эритроциты промывали в холодном (ледяном) физиологическом растворе. Промытые клетки были вновь суспендированы до первоначального объема в холодном, как лед, солевом (физиологическом) растворе. Гематокриты первоначальной крови и ресуспендированных клеток измеряли с помощью микрогематокритной системы Хоксли (Hawksley microhaematocrit system).
Активность ацетилхолинэстеразы была количественно оценена по методу Эллмана и др. (Ellman et al; Biochem. Pharmacol. 7 88 (1961)). Смеси для анализа содержали либо эритроциты, либо плазму (разбавленные в пропорции 1 : 600 в окончательной смеси для анализа), 0,01 М 5,5'-дитиобис-2-нитробензойной кислоты и 1 мМ ацетилтиохинолина в 0,1 М фосфатном буфере. Аналитические количества были приведены к окончательному объему 5 мл и разделены на две кюветы для спектрофотометрического мониторинга с использованием спектрофотометра производства фирмы Пай-Юникам, Англия, модели SP 8-100. За реакцией следили на волне 412 нанометров в течение 10 минут (неингибированный процесс) или в течение 20 минут (ингибированный процесс), и первоначальную скорость реакции вычисляли из графиков изменения спектральной поглощательной способности (или оптической плотности) в зависимости от времени. Анализ подвергали ежедневной калибровке с помощью стандартных (титрованных) растворов цистеина. Реакции начинали путем добавления субстрата.
Бланки, используемые в спектрофотометрических эталонных ячейках, содержали все компоненты реакции за исключением субстрата. Значения скорости спонтанного гидролиза измеряли отдельно и вычитали из значений скорости катализа фермента. Поправки вводили с помощью гематокритных значений, так, чтобы значения активности фермента можно было выражать в виде количество продукта • мин-1 • мл-1 первоначального объема крови.
Ферментные активности на первый день использовали как базовые значения для каждого индивидуума, а результат выражали как относительное ингибирование (подавление в процентах) этого значения. У контрольной группы животных также производили отбор проб крови каждый день в течение недели в отсутствие обработки физостигмином, чтобы убедиться, нет ли влияний от многократных отборов проб крови.
Самцов морских свинок (весом 300 - 500 граммов каждый) подвергали чрескожному воздействию препарата на базе олеиновой кислоты (25 мкл) в течение 48 часов, причем участок аппликации предварительно выстригали от шерсти и закрывали. Место приложения аппликатора промывали водно-спиртовым раствором, чтобы исключить излишки препарата, а оценку мест аппликации производили по балльной системе Дрейза (Draize Scoring system). Число баллов усредняли в соответствии с опубликованной методикой этой системы подсчета (EEC Guideline N L/257; Off. J. Eur. Community 26 19 (1983)).
Физостигмин в пропионовой кислоте (в пропорции 50 : 50 вес/об.) давал возрастающее ингибирование холинэстеразы в плазме и эритроцитах до момента снятия трансдермального аппликатора через 72 часа (фиг. 6). Рост ингибирования продолжался на протяжении следующих 24 часов. Спустя 72 часа с момента удаления аппликатора начала восстанавливаться активность, однако холинэстераза в плазме и эритроцитах все еще оставалась подавленной более чем на 50% в это время. В течение 24 часов применения препарата отмечена гибель одного животного в испытуемой группе, а все другие животные не проявили никаких признаков отравления холинэстеразой (т.е. остались "безсимптомными").
Физостигмин, в количестве 25% (вес/объем) присутствующий в смеси пропионовой и олеиновой кислот (в соотношении 50 : 50 объемных единиц), спустя 24 часа с момента начала аппликации вызывал 80%-ное подавление холинэстеразы в плазме и 60%-ное подавление холинэстеразы в эритроцитах (фиг. 7). Эти значения подавления (ингибирования) держались еще 24 часа после снятия аппликатора. Через 72 часа после снятия аппликатора значения ингибирования упали до 60% в плазме и до 30% в эритроцитах. В этой группе двое животных погибли в течение 24 часов с момента аппликации, остальные оставались "безсимптомными" на протяжении всего эксперимента.
Как выяснилось, 25%-ное содержание (вес/объем) физостигмина в смеси пропионовой и олеиновой кислот (в соотношении 50 : 50 об./об. единиц) не оказывает раздражающего действия (т.е. не является препаратом-раздражителем) в модифицированном тесте по Дрейзу. Из шести обработанных животных три особи проявили признаки мягкой формы эритем спустя 24 часа после аппликации препарата и две особе - спустя 48 часов. Через 6 - 7 дней после обработки 5 из 6 животных проявили легкое разбросанное шелушение участка аппликации (таблица 5). Усредненный балльный подсчет проявлений эритемы, отека и шелушения в любое время не превышал двух единиц.
В данном исследовании физостигмин доставляли в организм трансдермальным путем морским свинкам в количествах, достаточных для сдерживания активности холинэстеразы в крови. Кроме того, включение олеиновой кислоты в рецептуру препарата уменьшает концентрацию физостигмина, а также площадь аппликации, требуемую для создания нужной степени ингибирования холинэстеразы в крови (приблизительно 80% плазме и 60% в эритроцитах).
Невозможно было воспроизвести результаты, изложенные в документе N GB 2163347A, где было достигнуто 30% ингибирования холинэстеразы в цельной крови морской свинки от физостигмина в составе с пропионовой кислотой, причем это значение ингибирования было постоянным на протяжении промежутка времени от 5 часов до 3-х дней и получено при площади аппликации препарата 1 см2; с предложенной настоящим изобретением рецептурой смеси не было получено постоянного уровня ингибирования.
Физостигмин лабилен в крови морских свинок, причем период полувыведения его из плазмы составляет примерно 40 - 50 минут (Lukey et al; J. Pharm. Sci, 79 796-798 (1990)). Ввиду такого быстрого самовыведения активного физостигмина, продолжение ингибирующего действия на холинэстеразу крови в течение 3-х дней после прекращения лечения аппликатором указывает на продолжающуюся доставку (и сохранившееся поступление) физостигмина в кровь из какого-то депо. Этот "депо-эффект" может быть клинически благотворным или неблаготворным в зависимости от обстоятельств. Загрузка такого депо за счет краткосрочной аппликации повязки уменьшает опасность раздражительности или сенсибилизации от повторных многократных обработок лекарством или сеансов лечения. И наоборот, наличие загруженного препаратом депо будет поддерживать дозирование после удаления повязки, что может быть нежелательным, если пациент стал жертвой (ранения, несчастного случая и т.п.) и требует лечения лекарством.
Место расположения такого депо в организме является предметов догадок и предположений, но поскольку "депо-эффекты" не наблюдаются при внутривенном введении физостигмина, то, вероятно, что такое депо находится в коже. Роговой слой является наиболее вероятным местом расположения депо. Лекарство, которое отделяется от носителя и попадает в этот слой, будет медленно диффундировать в кровь. Однако на основе имеющихся в настоящее время данных нельзя исключать возможность, что депо находится где-то еще, например в верхних слоях кожи.
Степень ингибирования холинэстеразы в крови, полученная в данной работе, оказывается выше, чем это требовалось для защиты при отравлении организма веществами нервно-паралитического действия (30%). Отмеченные случаи смертности на ранней стадии периода лечения были связаны с тем фактом, что подопытным животным удавалось выскребать лекарственный препарат из аппликатора. Вероятно, что эти животные проглатывали болюсную дозу физостигмина, которая, в сочетании с трансдермальной дозой, оказывалась летальной. Таким образом, площадь аппликации должна быть соразмерена с конкретным реципиентом с тем, чтобы достичь требуемой степени ингибирования, как это будет очевидно для специалистов в данной области.
Включение в состав препарата олеиновой кислоты, этилолеата или изопропилмиристата позволило наполовину уменьшить как количество физостигмина в композиции, так и размер повязки. Это хорошо согласуется с данными экспериментов, проведенных in vitro, а именно, что олеиновая кислота удваивала скорость проникновения препарата через кожу.
Чтобы быть клинически применимым, трансдермальный препарат физостигмина не должен обладать раздражающим действием. И хотя пропионовая кислота, как таковая, является раздражителем для кожи, будучи в смеси с физостигмином (в пропорции 50 : 50) она уже не является раздражителем (согласно патенту N GB 2163347). Согласно результатам настоящей работы, 48-часовой контакт кожи с препаратом, содержащим олеиновую кислоту, давал очень слабую эритему и шелушение с усредненным подсчетом менее двух баллов, что согласно Руководству Европейского экономического сообщества "EЕC Guideline L/257" не позволяет классифицировать данный препарат как раздражающий.
Добавление олеиновой кислоты к смеси позволило наполовину уменьшить площадь аппликации (0,5 см2), а содержание физостигмина в ней снизить на 25% при сохранении той же степени ингибирования холинэстеразы в крови, однако достигнув постоянного значения ингибирования до истечения 24 часов с начала аппликации. Эффективность этих составов при доставке физостигмина в организм трансдермальным способом, в частности композиций на базе олеиновой кислоты и этилолеата, указывает на возможность дальнейшего уменьшения размера повязки при задаче получить лишь 30%-ное ингибирование холинэстеразы. Оба состава дают степени ингибирования холинэстеразы в крови, которые сохраняются на протяжении 72 часов после удаления физостигмина с кожи (т.е. после снятия аппликатора). Включение олеиновой кислоты в указанный состав не создает раздражительного отклика у морских свинок после аппликации препарата в течение 48 часов.
В таблице 5 представлены первичные проявления раздражения от воздействия на кожу физостигмина (25% вес/объем) в пропионовой и олеиновой кислотах (смесь в пропорции 50 : 50 объемных единиц). Средний балльный показатель по Дрейзу указан для группы из шести животных в зависимости от времени, истекшего с момента первой аппликации. Необходимо заметить, что для классификации соединения в качестве раздражителя средний показатель должен быть минимум два балла.
Пример наполненной жидкостью трансдермальной повязки, содержащей композицию, согласно настоящему изобретению.
Трансдермальную повязку, напитанную жидкостью, содержащей композицию согласно примеру 2, собрали, пользуясь (липкой) лентой и проницаемыми мембранами, поставляемыми фирмой "3М-Медика". Диффузию физостигмина через капиллярные мембраны, содержащие различные концентрации винилацетата, измеряли, пользуясь диффузионными ячейками Франца. Через мембрану, содержащую 19% винилацетата, (кат. N MSP 987192) физостигмин диффундируют с большей скоростью, чем через отделенный эпидермис. Эту мембрану употребили для изготовления наполненной жидкостью повязки с непроницаемой тыльной стороной (материал фирмы "Скотчпак" кат. N 1006-RTM), которую приклеили к коже с помощью чувствительного к давлению адгезивного средства на базе силикона (материал фирмы "Дау-Корнинг", кат. N 282A).
Изобретение относится к области медицины и касается трансдермальный композиции и ленты или повязки для трансдермальной доставки. Сущность изобретения заключается в том, что трансдермальная композиция для местного введения терапевтически и /или профилактически активного агента содержит жирную кислоту с длинной цепью молекулярной структуры или сложный эфир низшего алкила жирной кислоты с длинной цепью молекулярной структуры, где указанная длинная цепь представляет собой цепь C13-C21 и предпочтительно содержит по меньшей мере одну цис-олефиновую связь. Предпочтительными компонентами с длинной цепью являются олеиновая кислота и этилолеат, а предпочтительной жирной кислотой низкого молекулярного веса является пропионовая кислота. Лента или повязка для трансдермальной доставки содержит непроницаемый тыльный слой, адгезивное средство, способное удерживать ленту или повязку на эпидермисе, местную терапивтическую или профилактическую композицию по пп.1 - 13 и проницаемую мембрану. Предложение обеспечивает устойчивое облегчение орального применения с уменьшенной частотой введения. 2 с. и 12 з.п. ф-лы, 5 табл., 7 ил.
| САМОХОДНАЯ УСТАНОВКА ДЛЯ ЛОКАЛИЗАЦИИ ВЗРЫВА | 2000 |
|
RU2163347C1 |
| Pardo et al | |||
| J | |||
| Pharm | |||
| Sci | |||
| Цилиндрический сушильный шкаф с двойными стенками | 0 |
|
SU79A1 |
| Котел для водяного отопления с внутренним перегревателем воды для побуждения циркуляции в сети и с регулятором наружной температуры котла | 1924 |
|
SU573A1 |
| Шланговое соединение | 0 |
|
SU88A1 |
