СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ДИВЕРТИКУЛЯРНОЙ БОЛЕЗНИ ТОЛСТОЙ КИШКИ Российский патент 1998 года по МПК G01N33/92 

Изобретение относится к медицине, преимущественно к гастроэнтерологии и колопроктологии, и может быть использовано для прогнозирования развития сопутствующих заболеваний желудочно-кишечного тракта, в частности хронического панкреатита, с целью назначения превентивного лечения, предупреждающего рецидивы этого осложнения дивертикулярной болезни толстой кишки.

Известно, что дивертикулярная болезнь толстой кишки является распространенным заболеванием, особенно у лиц пожилого и старческого возраста, когда оперативное вмешательство чаще всего является противопоказанным и на передний план выходит консервативная терапия этого заболевания (Герман С.В. Дивертикулез толстой кишки. - М., 1974, 22 с.). В последние годы в литературе все чаще появляются публикации о патогномоничности язвенной болезни желудка, желчекаменной болезни и хронического панкреатита при дивертикулярной болезни толстой кишки (Федоров В.Д. Проктология. - М., 1984, 385 с.).

Имеющаяся при дивертикулярной болезни толстой кишки хроническая интоксикация и инициирование перекисного окисления липидов (Киркин Б.В. и др. Состояние перекисного окисления липидов у больных воспалительными заболеваниями толстой кишки. - Проблемы проктологии, вып. 11, М., 1990, с. 193) приводит к активации системы иммуногенеза, а в дальнейшем развитию аутоиммунного процесса и инициированию перекисного окисления липидов (ПОЛ), так Н.А. Жуков указывает на развитие аутоантителогенеза при хронических заболеваниях и хронических интоксикациях (особенно если она вызвана кишечной палочкой) как к панкреатоцитам, так и эндогенному трипсину, который принимает участие в обострении заболеваний поджелудочной железы (Жуков Н.А. и др. Механизмы активации и роль перекисного окисления липидов при обострении хронического панкреатита. Врачебное дело, N 11, 1990, с. 15).

Причем клинические проявления хронического панкреатита на фоне дивертикулярной болезни толстой кишки развиваются не сразу и, как правило, скрываются за проявлением основного заболевания (схваткообразные боли, кровотечения и т.д.). Однако длительно протекающий панкреатит может и сам усугубить течение основного заболевания. В связи с этим должна быть проведена ранняя диагностика сопутствующей или осложненной патологии дивертикулярной болезни толстой кишки, в частности хронического панкреатита, с целью его терапевтической коррекции. Следует также учитывать, что течение хронического панкреатита сопровождается нарушением ферментативных систем, угнетает функцию органов желудочно-кишечного тракта. Это в свою очередь усиливает тяжесть течения дивертикулярной болезни толстой кишки. Поэтому для уменьшения частоты неблагоприятных исходов при дивертикулярной болезни толстой кишки необходимы профилактические мероприятия, направленные на предупреждение осложнений этого заболевания. С этой целью разрабатываются различные способы ранней диагностики и прогностические индексы. Метод прогнозирования предназначен для дополнительной клинической характеристики больного и возможных патологических нарушений с целью предупредить врача о возможных нарушениях и побудить его к поиску оптимальной тактики лечения.

Проведенными исследованиями по патентной и научно-медицинской литературе обнаружен способ определения аутоиммунного поражения поджелудочной железы вследствие хронической интоксикации (в частности, определено наиболее частое поражение железы, если сенсибилизирующим агентом выступает кишечная палочка), генерации аутоантител к поджелудочной железе (Губергриц Н.Б. Клинико-иммунологические изменения у больных хроническим панкреатитом и их коррекция в процессе лечения. - Врачебное дело, N 11, 1990, с. 18). Проводились комплексные исследования реакции спонтанной бласттрансформации лимфоцитов, с фитогемагглютинином и с антигеном, приготовленным из ткани поджелудочной железы, а также реакции розеткообразования с определением относительного содержания в крови Т- и В-лимфоцитов, содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови; специфического лизиса лейкоцитов с бактериальными аллергенами; концентрации иммунных комплексов в сыворотке крови.

Недостатками предложенного метода являются:
1. Необходимость использования большого количества данных для объективной оценки исследования.

2. Приготовление антигена поджелудочной железы, требующее время.

3. Метод не учитывает непосредственного действия на панкреатоциты агентов хронического воспаления и альтернативных процессов перекисного окисления в клеточной стенке.

Близким также к изобретению является способ определения малонового диальдегида (конечного продукта перекисного окисления липидов) в крови (Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. - М.: Наука, 1972, с. 241). Содержание фонового малонового диальдегида (МД) устанавливали по его реакции с тиобарбитуровой кислотой и последующим количественным определением окраски раствора спектрофотометрически.

Однако при своем выполнении у больных с дивертикулярной болезнью толстой кишки способ обладает следующими недостатками:
1. Способ позволяет установить только степень перекисного окисления липидов и в частности содержание МД в организме.

2. Способ не является специфическим и не может служить объективным критерием поражения (тем более скрытого) поджелудочной железы.

3. При использовании данного способа нельзя с уверенностью говорить о причине экспрессии реакции, т.к. повышение концентрации МД в сыворотке крови больного может быть связано с любым другим патологическим процессом в организме.

Целью изобретения является повышение точности способа прогнозирования тяжести течения дивертикулеза толстой кишки, специфически учитывающего поражение поджелудочной железы, для последующей профилактики возможной манифестации сочетанного патологического процесса.

Поставленная цель достигается тем, что сыворотку крови больного дивертикулярной болезнью толстой кишки инкубируют с гомогенатом ткани поджелудочной железы экспериментального животного в присутствии комплемента, определяют концентрации малонового диальдегида между контрольной и опытной пробами и по разнице этих величин прогнозируют течение дивертикулярной болезни толстой кишки, при этом по уменьшению ее в сравнении с нормой на 20% и более прогнозируют осложнение дивертикулярной болезни толстой кишки хроническим панкреатитом.

Способ осуществляется следующим образом.

Для выполнения реакции используют гомогенат ткани поджелудочной железы белых нелинейных крыс. Поджелудочную железу берут после декапитации интактного животного, содержащегося в нормальных условиях вивария, непосредственно перед постановкой реакции. До момента декапитации животное никоим образом не готовят. Гомогенат получают путем измельчения ткани поджелудочной железы в присутствии фосфатного буфера (pH 7,4) из расчета 30 мл буфера на 1 г ткани. Все манипуляции выполняются в условиях пониженной температуры, готовый гомогенат, которого достаточно для выполнения 20 исследований, необходимо до постановки реакции хранить при T = 3-4^oC.

У больного берут кровь из локтевой вены по общепринятой методике натощак в сухую стерильную пробирку, Сыворотку крови приготавливают по общепринятой методике.

Далее производят постановку самой реакции. В предварительно подготовленные две пробирки (контрольная и опытная) наливают по 0,5 мл гомогената поджелудочной железы экспериментального животного. В опытную пробирку добавляют 0,3 мл исследуемой сыворотки и 0,1 мл комплемента морской свинки (сухой комплемент разводят в 20 мл физиологического раствора). Пробы инкубируют 2 ч в термостате при T = 37^oC с использованием прибора, создающего угловое вращение пробирок с частотой 60 об/мин для перемешивания. По окончании инкубации для остановки реакции в обе пробирки добавляют по 0,1 мл 100%-ной трихлоруксусной кислоты. Для объективной оценки получаемых результатов и выравнивания условий опыта в контрольную пробу добавляют 0,3 мл исследуемой сыворотки и 0,1 мл комплемента. В обеих пробирках определяют концентрацию малонового диальдегида - конечного продукта ПОЛ следующим образом. В обе пробирки добавляли по 2 мл 30%-ной трихлоруксусной кислоты и 1 мл 0,75%-ного раствора тиобарбитуровой кислоты. Затем пробы помещали в водную баню T = 100^oC на 15 мин. После охлаждения пробы центрифугируют при 7000 об/мин. Интенсивность окрашивания в розовый цвет определяют непосредственно по шкале спектрофотометра при длине волны λ = 535 нм или на фотоэлектрокалориметре с зеленым светофильтром. Концентрацию малонового диальдегида выражают в условных единицах на 1 мл сыворотки крови. В опыт берут 0,3 мл сыворотки, поэтому для расчета на 1 мл сыворотки разность экстинции умножают на коэффициент 3,33 (Владимиров Ю. А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. - М.: Наука, 1972, с. 241).

Концентрацию малонового диальдегида вычисляют по формуле
C = 3,33 • E_усл.ед./1 мл,
где C - концентрация малонового диальдегида в условных единицах на 1 мл крови;
E - разность экстинций (показаний на шкале спектрофотометра между контрольной и опытной пробами).

Вычисленная разность концентраций малонового диальдегида, образующегося в контрольной и опытной пробах, характеризует степень влияния сыворотки крови больного на процессы перекисного окисления липидов в гомогенате поджелудочной железы экспериментального животного.

По уменьшению разницы по сравнению с нормой более чем на 20% прогнозируют осложнение дивертикулярной болезни толстой кишки хроническим панкреатитом.

Способ апробирован на 10 больных в отделении гастроэнтерологии Ростовского государственного медицинского университета.

Пример 1. Больной К. 56 лет, поступил в клинику с диагнозом дивертикулярная болезнь толстой кишки.

В момент поступления состояние больного удовлетворительное. Признаков осложненного течения дивертикулярной болезни толстой кишки нет; данные за дивертикулит, парадивертикулярный инфильтрат, кровотечение и перфорацию дивертикула отсутствуют; клинические и лабораторные показатели в пределах нормы.

При инкубации сыворотки больного с гомогенатом поджелудочной железы крысы получена разность в концентрации малонового диальдегида (МДА) 0,073 у.е. /1 мл сыв. крови, что составляет 85,88% от разницы в концентрации МДА между контрольной и опытной пробами, образующейся при инкубации сыворотки здоровых людей с гомогенатом поджелудочной железы крысы. Таким образом, по сравнению со здоровыми разница в концентрации МДА между контрольной и опытной пробами снижена на 14,22%, что позволяет говорить о том, что влияние сыворотки крови больного на процессы перекисного окисления в ткани поджелудочной железы недостаточно для ее повреждения. Это дает возможность прогнозировать неосложненное течение дивертикулярной болезни толстой кишки. При наблюдении за клиническими и лабораторными показателями больного К. в динамике в процессе его лечения и спустя 3 месяца после выписки из стационара прогноз подтвердился; течение заболевания благоприятное, осложнений нет.

Доказательством прогностической значимости избранного показателя была последующая динамика уменьшения разности концентраций МДА между контрольной и опытной пробами при ее определении на день выписки и спустя 3 месяца; разность концентраций МДА была соответственно на 10,51% и на - 8,76%, т.е. разница постепенно уменьшалась и ее показатели незначительно отличались от разницы в концентрации МДА между контрольной и опытной пробами у здоровых.

Пример 2. Больной Ф. 52 года, поступил в клинику в удовлетворительном состоянии с диагнозом: дивертикулярная болезнь толстой кишки (тотальное поражение). Клинико-лабораторные показатели в пределах нормы.

Разница в концентрации МДА между контрольной и опытной пробами при инкубации сыворотки больного с гомогенатом поджелудочной железы крысы была 0,049 у.е./1 мл сыв. крови, что указывало на снижение ее по сравнению со здоровыми на 42,36% и настораживало в плане возможности развития хронического панкреатита. Была назначена превентивная корригирующая терапия. При выписке повторная постановка реакции показала уменьшение разности концентраций до 23,67%, что указывало на все еще существующую активность сыворотки крови больного повреждать панкреатоциты. После выписки больному было назначено продолжить принятие корригирующих средств, прием которых больной самостоятельно прекратил. Спустя 2,5 месяца больной Ф. поступил в клинику с диагнозом: дивертикулярная болезнь толстой кишки, хронический панкреатит.

При постановке реакции разность в концентрации МДА между контрольной и опытной пробами составила 0,012 у. е. /1 мл сыв. крови, т.е. снижение по сравнению со здоровыми на 85,88%, что указывает на высокую повреждающую активность сыворотки крови в отношении поджелудочной железы и позволяет сделать вывод об осложненном течении дивертикулеза толстой кишки.

Таким образом, изучение в динамике уменьшения разности в концентрации МДА дает возможность прогнозировать течение дивертикулярной болезни толстой кишки и рекомендовать назначение профилактической корригирующей терапии.

По сравнению с прототипом предлагаемый способ имеет следующие преимущества:
1. Является более информативным, так как дает возможность количественно оценить конечный результат и по уменьшению разницы концентрации МД между контрольной и опытной пробами по сравнению с разницей для здоровых предвидеть вероятность неосложненного течения дивертикулярной болезни толстой кишки и осложненного хроническим панкреатитом.

2. Дает возможность с учетом динамики уменьшения разности в концентрации МД прогнозировать сроки, в которых разовьется хронический панкреатит, и вероятность его течения.

3. Прост в исполнении, не требует квалифицированных специалистов, может быть выполнен лаборантом со средним образованием, имеющим навыки работы в лаборатории.

4. Не требует больших финансовых затрат, т.к. на одном экспериментальном животном может быть выполнено 30-45 определений.

Способ может быть использован в медицине, а именно в гастроэнтерологии и колопроктологии, и позволяет повысить точность способа прогнозирования тяжести течения дивертикулярной болезни толстой кишки, специфически учитывающего поражение поджелудочной железы, для последующей профилактики возможной манифестации сочетанного патологического процесса. Сыворотку крови больного дивертикулярной болезнью толстой кишки инкубируют с гомогенатом ткани поджелудочной железы экспериментального животного в присутствии комплемента, определяют концентрации малонового диальдегида между контрольной и опытной пробами и по разнице этих величин прогнозируют течение дивертикулярной болезни толстой кишки, при этом по уменьшению ее в сравнении с нормой на 20% и более прогнозируют осложнение дивертикулеза толстой кишки хроническим панкреатитом.

Способ прогнозирования тяжести течения дивертикулярной болезни толстой кишки, включающий исследование активности ПОЛ сыворотки крови, отличающийся тем, что сыворотку крови больного дивертикулярной болезнью толстой кишки инкубируют с гомогенатом ткани поджелудочной железы экспериментального животного в присутствии комплемента, определяют концентрации малонового диальдегида между контрольной и опытной пробами и по разнице этих величин прогнозируют течение дивертикулярной болезни толстой кишки, при этом по уменьшению ее в сравнении с нормой на 20% и более прогнозируют осложнение дивертикулярной болезни толстой кишки хроническим панкреатитом.