СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ИЗЪЯЗВЛЕНИЙ РОГОВИЦЫ Российский патент 1998 года по МПК A61F9/00 A61K31/16 A61K31/195 

Изобретение относится к области офтальмологии, а именно к способам профилактики и лечения изъявлений роговицы.

Важным моментом в лечении воспалительных заболеваний роговицы является предупреждение развития глубоких изъявлений, последствия которых - от бельма до перфорации роговицы - могут привести к значительному ослаблению зрения или полной его утрате. Воспалительные заболевания наиболее распространены среди патологий роговицы, которые составляют около 25% от всех заболеваний органа зрения и имеют высокий удельный вес (50%) среди причин снижения зрения и слепоты /IV Всесоюз. съезд офтальмологов, М., 1985, т.VI, стр. 3/.

В связи с вышесказанным актуальным является расширение арсенала лекарственных средств, предупреждающих развитие язв роговицы при ее воспалении. С этой целью применяются ингибиторы протеолитических ферментов, так как известно, что эти ферменты играют ведущую роль в деструкции соединительнотканых структур, типичным представителем которых является роговица. К используемым в настоящее время препаратам подобного действия относятся следующие. 1. Хелатирующие агенты (ЭДТА, цитрат и др.), связывающие ионы, необходимые для проявления активности ряда протеиназ. 2. Ингибиторы протеиназ (гордокс и др. ), созданные на основе поливалентного ингибитора сериновых протеиназ апротинина. 3. Ингибиторы металлозависимых протеиназ, к этим ферментам относится коллагеназа, играющая ведущую роль в разрушении коллагеновых структур роговицы при ее изъязвлении.

Поскольку в процессе изъязвления роговицы принимают участие протеолитические ферменты, выполняющие различные функции и расщепляющие различные субстраты, поэтому в своих исследованиях мы изучали активность широкого спектра протеолитических ферментов /Офтальмол. журн., 1990, N 6, стр. 351/. Например, исследование трипсиноподобных протеиназ и их ингибиторов в слезной жидкости позволило обосновать метод лечения воспалительных процессов в роговице с помощью поливалентных ингибиторов протеиназ /Klin. Mbl. Augenheilk., 1990, Bd.197, S.1/.

Процесс изъязвления роговицы может быть вызван не только чрезмерной активацией протеолитических ферментов, непосредственно осуществляющих деструкцию ткани путем расщепления тканевых субстратов, но и протеолитических ферментов, регулирующих этот процесс. Однако в настоящее время контроль активности ферментов с подобным действием не нашел должного применения в лечении процессов изъязвления тканей, в том числе роговицы. Принимая во внимание участие ангиотензин-превращающего фермента (АПФ), относящегося к подклассу протеолитических ферментов, в регуляции уровня физиологически активных пептидов, а также появившиеся в литературе указания на роль АПФ в медиации и/или модуляции воспаления, нами было предпринято исследование активности АПФ в слезной жидкости при экспериментальной ожоговой болезни глаз у кроликов. Ангиотензин-превращающий фермент - это цинкзависимая пептидаза, катализирующая гидролитическое отщепление дипептидов с карбоксильного конца ряда физиологически активных олигопептидных субстратов: ангиотензина 1, брадикинина и др. Он также проявляет эндопептидазную активность при гидролизе некоторых пептидов, таких, как, например, вещество P и нейротензин.

Нами был разработан метод измерения активности АПФ в элюате слезной жидкости, полученном после забора слезы с помощью фильтровальной бумаги, помещаемой в нижний конъюнктивальный мешок. Активность АПФ определяли по гидролизу специфического синтетического субстрата N-бензилоксикарбонил-L-фенилаланил-L-ги-стидил-L-лейцина (Serva, Германия). Образующийся в результате гидролиза продукт гис-лей модифицировали офталевым альдегидом (Koch-Light, Великобритания) для образования флуоресцентного аддукта.

При изучении динамики активности АПФ в слезной жидкости кроликов после ожога роговицы оказалось, что у животных с глубокими язвами роговицы активность АПФ в слезе существенно выше, чем у животных, у которых изъязвление ограничивалось лишь поверхностными слоями роговицы, особенно в периоды усиления процессов изъятия /табл.1/.

В связи с выявленными закономерностями нами была поставлена цель разработать способ эффективной профилактики и лечения изъязвлений роговицы путем подавления активности АПФ в переднем отрезке глаза.

Для подавления активности АПФ при лечении гипертонической болезни и сердечно-сосудистой недостаточности успешно применяют препараты ингибиторов АПФ, такие, как каптоприл, эналоприл, ренитек, трандолаприл, фозеноприл, пентоприл и др. Настоящие исследования мы провели на примере каптоприла, а именно субстанции каптоприла (Sigma, США). Раствор каптоприла (33 мг/мл) в 0.1 M фосфатном буфере pH 7,0 закапывали в нижний конъюнктивальный мешок кроликов 4 раза в день. Концентрацию препарата в растворе подбирали исходя из терапевтической концентрации каптоприла в крови при применении его внутрь и учитывая обычным способом потерю препарата (смывание слезой) при его инстилляциях в нижний конъюнктивальный мешок. В качестве модели использовали щелочной ожог роговицы у кроликов - модель, широко используемую как в нашей стране, так и за рубежом для исследования процессов изъязвления роговицы и действия на эти процессы различных препаратов /Acta Opthalmologica, 1987, Suppl. 187, p.7/.

Щелочной ожог роговицы у кроликов вызывает развитие персистирующих язв роговицы и включает все компоненты этого процесса, характерные для изъявления роговицы у человека.

Дозированный ожог центральной области роговицы наносили кроликам на оба глаза под наркозом и местной анестезией с помощью круга из хлопчатобумажной ткани (диаметр 7 мм), пропитанной 10% NaOH, через 40 с круг удаляли и глаза промывали физиологическим раствором. Состояние глаз оценивали биомикроскопически после окрашивания роговицы 0,1%-ном флоуресцеином. После ожога роговицы на 1 сутки наблюдали гиперемию и отек конъюнктивы, отек стромы и десквамацию эпителия роговицы. К 3 суткам дефект эпителия роговицы в большинстве случаев восстанавливался, отмечался отек конъюнктивы и роговицы, а область роговицы, окружающая зону ожога, теряла прозрачность. После 3 суток вновь образованный эпителий в зоне ожога начинал отторгаться, усиливались гнойно-слизистые выделения и инъекция роговицы и возникали язвы стромы роговицы. После 3 суток отмечался интенсивный рост новообразованных сосудов со стороны лимба, и в большинстве глаз сосуды достигали обожженной области роговицы через две недели после травмы. В период от 14 до 21 суток развитие язвенных дефектов роговицы достигало максимума. В половине глаз образовывались глубокие язвы роговицы, вплоть до десцеметовой оболочки, в ряде случаев отмечались перфорации роговицы, в другой половине глаз процесс ограничивался изъязвлением поверхностных и средних слоев роговицы. Последующий период характеризовался новообразованием соединительной ткани и формированием рубца. Клинические проявления ожоговой болезни глаз оценивали в условных баллах в зависимости от их интенсивности. Оценивали глубину и площадь изъязвлений роговицы, ее отек и инфильтрацию, длину и густоту новообразованных в роговице сосудов, отек и гиперемию конъюнктивы, количество отделяемого и интенсивность инъекции глазного яблока.

Слезу отбирали с помощью кружкой и фильтровальной бумаги, которые помещали в нижний конъюнктивальный мешок кроликов на 5 мин, затем переносили в физиологический раствор и в элюате измеряли активность АПФ. Забор слезы проводили до нанесения ожога и через 1, 3, 7, 14, 21, 28 и 36 суток после ожога.

В первой серии экспериментов сравнивали характер течения ожоговой болезни глаз и активность АПФ у кроликов, получивших инстилляции раствора каптоприла с первого по 28 день после ожога (7 кроликов, 14 глаз) и у кроликов, которым закапывали растворитель - фосфатный буфер (7 кроликов, 14 глаз). Оказалось, что у кроликов, получивших инстилляции каптоприла, во все периоды наблюдения определяемая активность АПФ в слезе была значительно (в 4-5 раз) ниже, чем у животных, получавших буфер. При сравнении клинических проявлений ожоговой болезни глаз у леченных и нелеченных животных были обнаружены статистически достоверные различия в развитии эрозивно-язвенного процесса, а именно при локальном применении ингибитора АПФ снижается интенсивность деструктивных процессов в роговице (фиг.1). Таким образом, ингибиторы АПФ могут быть использованы для профилактики изъязвлений роговицы при воспалении.

Во второй серии экспериментов сравнивали характер течения ожоговой болезни глаз и активность АПФ у кроликов, получавших инстилляции раствора каптоприла с 7 по 28 день после ожога, когда имелись выраженные язвы роговицы (7 кроликов, 14 глаз) и у кроликов, которым в этот период закапывали буфер (7 кроликов, 14 глаз). После закапывания ингибитора в слезе резко снижалась активность АПФ и язвы роговицы на 21 сутки после ожога были статистически достоверно менее глубокие и менее обширные, чем без применения каптоприла (фиг.2).

Полученные данные свидетельствуют о том, что ингибиторы АПФ могут применяться для профилактики и лечения язв роговицы.

Способ профилактики и лечения изъязвлений роговицы осуществляется следующим образом. При наличии признаков угрозы изъязвления роговицы или уже при образовавшейся язве в конъюнктивальный мешок вводят ингибитор ангиотензинпревращающего фермента, при этом в зависимости от свойств препарата подбирают его дозу и вводят препарат в виде инстилляций. Для одного из препаратов этой группы каптоприла доза составляет 1-2 капли раствора 33 мг/мл 4 раза в день.

Пример 1. Кролик, протокол N 5.

Кролику был нанесен щелочной ожог роговицы вышеописанным методом и в первый же день после ожога было начато лечение каптоприлом. Данные по оценке клинических проявлений ожоговой болезни глаз и активности АПФ в слезной жидкости представлены в табл. 2. Как следует из приведенных данных, изъязвление роговицы у этого кролика ограничилось поверхностными слоями роговицы и по площади было относительно небольшим, активность АПФ в слезе не превышала 1,5 мкмоль/мин мг 10⁴.

Пример 2. Кролик, протокол N 17.

Лечение каптоприлом начато на 7 сутки после ожога, когда отмечалось образование язв средних слоев роговицы. Как видно из табл.3, после начала лечения процесс углубления язв роговицы приостановился и началось их заживление. После начала лечения снизилась активность АПФ в слезной жидкости.

Пример 3. Кролик, протокол N 10.

После нанесения ожога с первых суток кролик получал инстилляции 0,1 M фосфатного буфера 4 раза в день в течение 28 дней.

У кролика образовались глубокие изъязвления роговицы, а на 21 сутки в правом глазу произошла перфорация роговицы, активность АПФ в слезе была высокой, особенно на 7 и 21 сутки (табл.4).

Из приведенных примеров видно, что лечение каптоприлом эффективно для профилактики и лечения изъязвлений роговицы.

Всего предлагаемым способом было пролечено 14 кроликов (28 глаз) - семь кроликов начали получать лечение сразу же после нанесения ожога в течение 4 недель, а семь кроликов начали лечить только через неделю после травмы, когда образовались стромальные язвы роговицы. Контролем послужили 14 кроликов, которым был нанесен ожог обоих глаз, 7 из них получали инстилляции растворителя сразу же после ожога и в течение 28 дней, а семь - с 7 по 28 день.

В 36% леченых глаз процесс изъязвления роговицы ограничивался поверхностными слоями стромы роговицы, а у 49% - средними слоями, только в 15% глаз образовались глубокие язвы роговицы, перфораций роговицы не отмечалось. В нелеченых глазах язвы средних слоев роговицы образовались в 50% глаз, а глубоких в 50%, из них в 20% глаз происходили перфорации роговицы.

Представленные данные указывают на высокую эффективность применения ингибиторов АПФ для профилактики и лечения язв роговицы. Поскольку используемая в экспериментах модель изъязвления роговицы адекватна изъязвлению роговицы у человека, то препараты, действующим началом которых являются ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента, могут быть использованы в клинической практике с целью профилактики и лечения язв роговицы, при этом дозы и режим подбираются исходя из терапевтической концентрации препарата в крови и с учетом потерь его при смывании слезой.

Предлагаемое изобретение относится к офтальмологии и состоит в том, что для профилактики и лечения изъязвлений роговицы местно в виде инстилляций вводят раствор ингибитора ангиотензин-превращающего фермента (АПФ), например каптоприл в дозе 1 - 2 капли раствора в концентрации 33 мг/мл 4 раза в день. Способ позволяет расширить арсенал средств, предупреждающих развитие язв роговицы при ее воспалении. 4 табл., 2 ил.

Способ профилактики и лечения изъязвлений роговицы, включающий местное введение ингибитора фермента, отличающийся тем, что используют ингибитор ангиотензин-превращающего фермента каптоприл, доза 1 - 2 капли раствора в концентрации 33 мг/мл 4 раза в день.