СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ ИНФЕКЦИОННО-АЛЛЕРГИЧЕСКОГО МИОКАРДИТА У ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 1999 года по МПК A61K31/00 A61K35/04 

Изобретение относится к медицине, к способам исследования инфекционно-аллергического миокардита у лабораторных животных путем терапевтического лечения.

Известен способ исследования вирусного миокардита на мышечной модели путем иммунодепрессивной терапии с использованием нестероидных противовоспалительных средств (Rezkalla Sh. H., Kloner R.A. Management strategies in viral myocarditis//Amer. Heart J. - 1989, - v. 117, - p. 706-708).

Однако применение, например, циклоспорина или преднизолона при остром экспериментальном миокардите у мышей, особенно в позднюю стадию, способствовало даже ухудшению течения заболевания, что является основным недостатком способа.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ исследования воздействия лекарственных средств на модель инфекционно-аллергического миокардита у лабораторных животных (Плешкова С.М. и др. "Фосфолипидный спектр и пероксидное окисление липидов при инфекционно-аллергическом миокардите и на фоне его терапии" Сб. "Реактивность организма в норме и при патологии". Мин-во здравоохранения РК, АГМИ, Алма-Ата, 1992 г., с. 74-78).

На разработанной модели инфекционно-аллергического миокардита (ИАМ) изучалось воздействие на кроликов медикаментозной терапии, включающей антибиотикотерапию (бициллин-3 в дозе 100000 ед/кг один раз в три дня внутримышечно), противовоспалительную терапию (вольтарен в дозе 3 мг/кг 1 раз в день внутримышечно), десенсибилизирующую терапию (димедрол 1% по 0,5 мл 1 раз в день внутримышечно), а также средства, улучшающие метаболизм миокарда (оротат калия в дозе 0,3 г/кг 2 раза в день перорально).

Одной из наиболее важных проблем медицины является лечение больных с инфекционно-аллергическим миокардитом (ИАМ). Неотъемлемой составляющей комплекса терапевтических мероприятий в лечении данного контингента больных является лекарственная терапия.

К настоящему времени разработаны основные принципы лечения больных ИАМ, включающие: этиотропное лечение, противовоспалительную терапию, иммунодепрессивную терапию, воздействие на метаболизм миокарда, санацию очагов инфекции, симптоматическую терапию (Кедров А.А. Миокардиты. Руководство по кардиологии. М.: Медицина, 1982, т. 3, с. 119-145). Состояние животных оценивали по выживаемости и изменение массы тела.

В группе кроликов с экспериментальным инфекционно-аллергичеким миокардитом (без лечения) на протяжении всего срока наблюдения отмечалось снижение массы тела, наиболее выраженное на 15 сутки развития заболевания. В этот же срок отмечался и максимальный падеж животных - из 9 кроликов в живых осталось 6 (табл. 1).

При изучении показателей общего клинического анализа крови был выявлен умеренный лейкоцитоз, определялось повышение эозинофилов (6±0,7%), лимфоцитов (76±2,4%) на 1,7 сутки развития экспериментального ИАМ. К 30-му дню наблюдения отмечалась нормализация гематологических данных, за исключением содержания эозинофилов - их количество повысилось по сравнению с 1,7 днем ИАМ на 15-20%.

При применении медикаментозной терапии (МТ) по способу-прототипу наблюдалось уменьшение смертности животных. Вместе с тем отмечалось снижение массы тела (табл. 2).

Под влиянием медикаментозной терапии нормализации сдвигов гематологических показателей происходила уже на 15 день лечения, однако к 30-му дню выявлялась эозинофилия (до 12±1,0%), более выраженная, чем в группе нелеченных животных, что является подтверждением аллергической настроенности, усиливающийся в результате длительного применения медикаментозных средств. Кроме того, ферментная активность в сердце и почках к 30 дню достоверно снижена по сравнению с контрольной группой здоровых животных.

Таким образом, результаты исследования показали недостаточную эффективность терапевтического лечения ИАМ с помощью медикаментозных средств, выражающуюся в высокой смертности животных, значительном снижении массы тела и повышении аллергизации организма.

Достигаемым техническим результатом предлагаемого изобретения является повышение эффективности терапевтического лечения при исследовании экспериментальной модели инфекционно-аллергического миокардита у лабораторных животных.

Это обеспечивается тем, что терапевтическое лечение осуществляют введением мумие в количестве 0,01-0,02 г/кг массы тела, а мумие имеет состав, мас.%:
кремния 0,02, кальция 0,7-3,82, магния 2,13-2,98, калия 7,98-14,75, натрия 0,15-0,54, железа 0,004-0,04, фосфора 0,07-0,12, меди 0,0008-0,001, цинка 0,0026-0,0047, свинца менее 0,001, молибдена 0,0002-1,19, марганца 0,03-0,04, кобальта менее 0,0002, никеля 0,04-0,06, хрома 0,002-0,003, алюминия 0,008-0,014, титана 0,0008-0,0019, ванадия 0,0007-0,0037, вольфрама менее 0,0002, лития менее 0,15, рубидия 2,33-5,63, цезия менее 0,15, стронция 0,006-0,013, битумов группы "А" 1,20-4,38, битумов группы "Б" 3,95-5,47, гуминовых кислот 4,72-6,90, спирторастворимых веществ, в том числе фосфолипидов, стероидных соединений, фенолов 8,83-17,38, летучих жирных кислот 18,14-25,7.

Сущность изобретения заключается в следующем. Развитие инфекционно-аллергического миокардита характеризуется интенсификацией процесса свободнорадикального окисления, выражающегося в накоплении как начальных, так и конечных продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в сердце, печени, почках, лимфоцитах и наиболее выраженного в сердце.

Усиление степени пероксидации липидов в органах и лимфоцитах сопровождается значительным снижением активности антиоксидантных ферментов (АОФ), осуществляющих антиоксидантную защиту клеток и контролируемый ими процесс ПОЛ.

Лечение ИАМ лекарственной терапией по известному способу позволяет повысить активность ферментов в сердце, почках, однако к 30 дню лечения этот показатель остается более низким по сравнению с контролем (здоровые животные), а в лимфоцитах к этому сроку выявлена напряженность антиоксидантной системы. Кроме того лекарственная терапия приводит к снижению уровня циркулирующих иммунных комплексов ниже контрольных значений (на 30 сутки).

В результате проведенных исследований при осуществлении предлагаемого способа установлено, что использование для лечения ИАМ мумие определенного вышеприведенного состава в количестве 0,01-0,02 г/кг массы тела эффективно влияет на процесс свободнорадикального окисления липидов и состояние антиоксидантной системы, способствуя стимуляции ферментативной активности, особенно лимфоцитов, наиболее выраженной для каталазы, а также оказывает нормализующее влияние на содержание иммунных комплексов.

Объясняется это тем, что мумие используемого состава обладает следующими свойствами: противовоспалительным, десенсибилизирующим, антиоксидантным, антитоксическим действием, ускоряет репаративную регенерацию в миокарде, способствует нормализации коронарного кровообращения и метаболизма миокарда, восстанавливает сократительную функцию сердца, улучшает энергообеспечение миокарда, обладает адаптогенным эффектом.

Одним из эффектов мумие является его выраженное антиоксидантное действие, что подтверждается наличием в вышеприведенном составе мумие веществ, обладающих антиоксидантными свойствами: фосфолипидов, стероидных соединений и фенолов из группы спирторастворимых веществ, а также цинка и меди. Антиоксидантное действие выражается в повышение активности АОФ, в том числе путем непосредственннго включения компонентов мумие в антирадикальную защиту, что способствует снижению содержания продуктов ПОЛ и приводит к нормализации содержания указанных продуктов свободнорадикального окисления липидов на 15 день применения мумие, что на 15 дней раньше по сравнению с медикаментозной терапией.

Высокое содержание в составе мумие калия и магния оказывает положительное влияние на регуляцию сердечно-сосудистой системы, улучшает метаболизм миокарда. Наличие гуминовых кислот, стероидных соединений прегнанового ряда способствует проявлению противовоспалительных свойств.

Присутствие в составе мумие фосфолипидов является одним из факторов, позволяющих восстановить нарушенную структуру мембран микросом печени. При исследовании микровязкости мембран определялось выраженное нормализующее влияние мумие, в дозе 0,02 г/кг массы тела наиболее эффективно. Начиная с 7 дня применения мумие микровязкость в группе экспериментальных животных практически не отличалась от контрольной. При этом полное соответствие фракций фосфолипидов контрольным значениям, полученным на 30 день МТ, в случае применения мумие достигается на 15 день.

Процесс упорядочения фосфолипидного содержания на 7-15 день приема мумие проявляется в менее резких сдвигах количественного содержания фракций фосфолипидов. Наступившая нормализация в нарушенных звеньях фосфолипидного обмена при ИАМ подтверждает адаптационную роль мумие.

Важным фактором является также то, что мумие используемого состава не оказывает токсического действия на клетки нервной системы и осаждающего действия на белки, так как содержит очень низкие концентрации солей тяжелых металлов свинца и стронция, и анализами установлено отсутствие кадмия, мышьяка, висмута, ртути.

Таким образом, использование мумие вышеприведенного состава в дозе 0,01-0,02 г/кг массы тела в способе исследования экспериментальной модели инфекционно-аллергического миокардита у лабораторных животных обеспечивает высокую терапевтическую эффективность лечения, которая оценивалась состоянием животных по параметрам выживаемости и изменению массы тела.

Применение мумие снижало падеж животных, способствовало нормализации гематологических показателей и морфологических изменений в миокарде, уровня иммунных комплексов в более ранние сроки по сравнению с медикаментозной терапией. При применении мумие отмечался прирост массы тела в отличие от потери ее в известном способе лечения.

Примеры осуществления способа.

Работа выполнена на кроликах-самцах породы шиншилла массой 2,5-3,5 кг, получавших в ходе эксперимента общевиварный корм ad libitum. Эксперименты выполнены на пяти группах животных: контроль (здоровые животные), ИАМ без лечения, ИАМ + медикаментозная терапия, ИАМ + мумие (0,01 г/кг), ИАМ + мумие (0,02 г/кг).

В эксперименте модель ИАМ была воспроизведена путем последовательного введения кроликам цитотоксической сыворотки, кроличьего кардинального антигена и стрептококка группы А, тип I, штамм 2/55. Развитие экспериментального инфекционно-аллергического миокардита подтверждено морфологическим исследованием ткани сердца.

Исследования проводились через 24 часа, 7, 15, 30 дней после развития ИАМ. Результаты исследований в экспериментальных группах животных с ИАМ без лечения и ИАМ + медикаментозная терапия (известный способ) представлены в табл. 1 и 2 соответственно.

Лечение мумие проводили ежедневно (в зависимости от сроков лечения). Препарат вводили перорально в дозе 0,01 и 0,02 г/кг массы тела животного в виде 2% водного раствора 1 раз в день. При лечении использовали препарат мумие вышеприведенного состава, полученный по технологии, разработанной НПО "ВАК" и ТОО "КРАМДС-ДОСТЫК", из первичного сырья, собранного в горах Центрального и Восточного Казахстана.

Полученный препарат мумие имел следующую характеристику: коричневого цвета, хорошо растворим в воде, водный раствор имел pH 7,15. При проведении анализа на радиоактивность гамма-излучение в пределах фонда (54 имп/мин). Состав мумие определен спектральным методом на спектрографе ДФС-13, на установке ISR-плазма (индукционно-связанная плазма), а также с помощью метода ИК-спектроскопии и другими методами анализа.

Общее состояние животных оценивали по следующим параметрам: выживаемость животных, изменение массы тела.

Пример 1.

Применение мумие в дозе 0,01 г/кг массы тела значительно снижало падеж животных по сравнению с группой нелеченных и леченных медикаментозными средствами животных, приводило к приросту массы тела в отличие от потери ее при медикаментозной терапии (табл. 3).

К 30 дню применения мумие в дозе 0,01 г/кг наступала нормализация гематологических показателей. С первого же дня применения выявлялось выраженное активизирующее влияние на ферменты антиоксидантной системы.

Введение мумие в дозе 0,01 г/кг при ИАМ способствовало плавному снижению количества как начальных, так и конечных продуктов перекисного окисления липидов.

Прослеживалось и благоприятное влияние мумие в данной дозировке на уровень циркулирующих иммунных комплексов - с 15 дня лечения их уровень полностью нормализовался.

Пример 2.

Применение мумие в дозе 0,02 г/кг массы тела также, как и при применении мумие в меньшей дозировке, снижало падеж животных по сравнению с нелеченными животными и лечением медикаментозной терапией. При лечении мумие в дозе 0,01 г/кг падеж животных был минимальным и сопоставим с таковым при применении мумие в большей дозировке - 0,02 г/кг.

При применении мумие в данной дозировке также, как и при введении меньшего количества мумие в предыдущей группе, отмечался прирост массы тела, в отличие от потери ее в группе нелеченных и леченных медикаментозными средствами животных (табл. 4).

Анализ гематологических данных выявил нормализацию всех показателей уже к 15 дню применения мумие (0,02 г/кг).

Применение мумие в большей дозировке при экспериментальном ИАМ привело к изменению активности большинства АОФ и содержания продуктов ПОЛ также, как и в предыдущих группах, уже спустя 1 сутки.

15-дневное введение мумие способствовало нормализации интенсивности процесса ПОЛ в миокарде, что выражалось в снижении содержания как первичных, так и конечных продуктов свободнорадикального окисления липидов до уровня контрольных показателей.

В ведение мумие в дозе 0,02 г/кг оказывало также нормализующее влияние на уровень иммунных комплексов, содержание которых в плазме крови кроликов приближалось к контрольным значениям к 15 дню лечения, что не отмечалось в группе нелеченных животных.

Полученные в предлагаемом способе исследования экспериментальной модели ИАМ результаты морфологических исследований подтверждают высокую терапевтическую эффективность при применении мумие. Так, при введении мумие в дозе 0,02 г/кг начиная с 7 дня лечения уменьшалась степень выраженности дистрофических процессов. Уменьшалось число жировых вакуолей в мышечных волокнах, белковая зернистость становилась менее грубой, что придавало цитоплазме более гомогенный вид. Участки микронекрозов, в которых наблюдался зернистый распад отдельных мышечных волокон, уменьшались в размерах. В очагах контрактурных повреждений отмечались остаточные явления. Воспалительная инфильтрация стромы носила очаговый характер (фиг. 1).

Для сравнения на фиг. 2 и 3 представлены микрофотографии миокарда кролика на 7 и 15 сутки медикаментозной терапии - экспериментального ИАМ.

Таким образом, в целом полученные результаты в предлагаемом способе исследования экспериментальной модели инфекционно-аллергического миокардита у лабораторных животных свидетельствует о высокой эффективности и целесообразности клинической апробации применения мумие вышеприведенного состава в комплексной терапии неревматических миокардитов.

Способ предназначен для исследования инфекционно-аллергического миокардита. Способ включает терапевтическое лечение путем введения мумие определенного состава в количестве 0,01-0,02 г/кг массы тела и оценку состояния организма по изменению биохимических показателей, выживаемости и изменению массы тела животного, а также по гематологическим показателям и морфологическим изменениям миокарда. Способ повышает точность исследований и обладает более высокой информативностью по сравнению с известными аналогами. Введение мумие повышает эффективность лечения и ускоряет процесс выздоровления на 15 дней по сравнению с медикаментозной терапией. 3 ил. 4 табл.

Способ исследования экспериментальной модели инфекционно-аллергического миокардита у лабораторных животных, включающий терапевтическое лечение и оценку состояния организма по изменению биохимических показателей, отличающийся тем, что терапию осуществляют введением мумие, содержащим, мас.%:
Кремний - 0,02
Кальций - 0,7 - 3,82
Магний - 2,13 - 2,98
Калий - 7,98 - 14,75
Натрий - 0,15 - 0,54
Железо - 0,004 - 0,04
Фосфор - 0,07 - 0,12
Медь - 0,0008 - 0,001
Цинк - 0,0026 - 0,0047
Свинец - Менее 0,001
Молибден - 0,0002 - 1,19
Марганец - 0,03 - 0,04
Кобальт - Менее 0,0002
Никель - 0,04 - 0,06
Хром - 0,002 - 0,003
Алюминий - 0,008 - 0,014
Титан - 0,0008 - 0,0019
Ванадий - 0,0007 - 0,0037
Вольфрам - Менее 0,0002
Литий - Менее 0,15
Рубидий - 2,33 - 5,63
Цезий - Менее 0,15
Стронций - 0,006 - 0,013
Битумы группы "А" - 1,20 - 4,38
Битумы группы "Б" - 3,95 - 5,47
Гуминовые кислоты - 4,72 - 6,90
Спирторастворимые вещества, в том числе фосфолипиды, стероидные соединения, фенолы - 8,83 - 17,38
Летучие жирные кислоты - 18,14 - 25,7
причем введение осуществляют в дозе 0,01 - 0,02 г/кг массы тела, а оценку состояния организма осуществляют дополнительно по выживаемости и изменению массы тела животного, гематологическим показателям и морфологическим изменениям миокарда.