СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ДИАРЕИ МОЛОДНЯКА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 1999 года по МПК A61K35/74 A61K39/108 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам профилактики желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных, а именно диареи.

Известен способ профилактики желудочно-кишечных инфекций (а.с. ЧССР N 264572 по кл. A 61 K 31/66, опубл. 15.11.87 г.), заключающийся в пероральном введении вакцины, содержащей живые клетки непатогенного штамма Escherichia coli 0,83 CNCTC 325/71, которые подвергались лиофилизации.

Однако эффективность профилактических мероприятий данного способа низка, поскольку вакцина содержит клетки непатогенного штамма, вызывающего антогонистическое взаимоотношение бактерий. Кроме того, необходимо проводить систематические ревакцинации. Способ не обеспечивает профилактику заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки.

Известен также способ профилактики кишечных инфекций (см. а.с. СССР N 1494907, кл. A 61 K 35/74, опубл. 23.07.89 г.), заключающийся в введении убитой культуры штамма энтерококка Streptococcus faecalis УДС₈₆ (ВКПМ и В-4054) или S. faecalis M₂₂ (ВКПМ и В-4053). Препарат вводят перорально 1 раз в сутки в течение 5 - 7 дней в дозе 2•10¹¹-5•10¹¹ микр. тел/кг массы.

Однако процесс профилактики кишечных инфекций длителен и технически сложно выполним, так как предусматривает 5-7 введений препарата. При этом расчет дозы введения препарата сложен. Кроме того, способ не обеспечивает профилактику заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки.

Наиболее близким к заявляемому является способ профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка, (см. пат. Великобритании N 1560934, кл. A 61 K 35/74, опубл. 13.02.80 г.), заключающийся в парентеральном введении беременным животным за 15-30 дней до родов токсина, выделенного из энтеротоксигенных штаммов E. coli. Кроме этого, способ предусматривает оральное введение токсина беременным животным в течение 3-х недель перед парентеральным введением. В качестве токсина выступает взвесь клеток, разрушенных температурой и обработанных формалином в течение 30 минут. Способ позволил молодняку приобретать усиленный иммунитет через молозиво.

Однако использование токсина в виде взвеси клеток приводит к выработке в организме матери антител, которые в дальнейшем при передаче новорожденному молодняку через молозиво могут привести к подавлению нормальной кишечной микрофлоры. Таким образом, эффективность профилактики способа незначительна ввиду использования в препарате карпускулярного антигена. Кроме этого, способ длителен, так как предусматривает введение препарата в течение 3-х недель орально, а затем парентерально.

Изобретение направлено на решение задачи повышения эффективности профилактики заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки.

Задача решается с помощью способа профилактики диареи молодняка сельскохозяйственных животных, заключающегося в парентеральном введении беременным животным препарата на основе токсина, выделенного из энтеротоксигенных штаммов E. coli, при этом в качестве токсина используют надосадочную жидкость, полученную из бульонной культуры штамма. Надосадочную жидкость дополнительно обрабатывают 0,4%-ным раствором формалина в течение не менее 2-х недель. Препарат вводят за 1-12 дней до родов в дозе 6-8 мл.

В известных авторам источниках патентной и научно-технической информации не описано способа профилактики диареи молодняка сельскохозяйственных животных, позволяющего повысить эффективность профилактических мероприятий за счет использования токсина в виде надосадочной жидкости, выделенного из энтеротоксигенных штаммов E. coli и обработанного затем 0,4%-ным раствором формалина в течение 2-х недель. Введение такого препарата приводит к активизации клеточного и системного иммунитетов.

Благодаря использованию надосадочной жидкости действие антител непосредственно направлено на подавление токсинов кишечной палочки.

Таким образом, неизвестность использования токсина в виде надосадочной жидкости, полученной из бульонной культуры энтеротоксигенных штаммов E. coli, для профилактики молодняка путем парентерального введения препарата беременным животным позволяет сделать вывод о наличии "изобретательского уровня".

Идентификацию штаммов E. coli проводили по стандартным тестам. Токсигенные свойства проверяли путем посева культур на бульоне Мартена и термостатирования при 37^oC в течение двух недель. Бактериальную взвесь центрифугировали и надосадочную жидкость использовали в качестве заражающего материала. Материал вводили белым мышам по 0,5 мл внутрибрюшинно, наблюдали за животными в течение первых двух суток. Контрольным животным аналогичным образом вводили стерильный бульон Мартена. При гибели животных полученный материал считали токсином. Его активность определяли на белых мышах.

Для приготовления препарата использовалась надосадочная жидкость, содержащая в 1 мл 2 летальные дозы.

Были изучены свойства токсина. Изучали динамику накопления летальной дозы токсина путем заражения белых мышей центрифугатом из бульонных культур разного возраста. Гибель животных наступала от токсина, полученного на 2-5-й день выращивания бульонной культуры, что свидетельствовало о преобладании белковой фракции, то есть экзотоксинов.

Полученный из бульонной культуры двухнедельного возраста токсин изучали на термоустойчивость: нагревали до 100^oC и выдерживали при этой температуре в течение 30 минут. Процент летальности лабораторных животных снижался на 50%, что свидетельствовало о преобладании липополисахаридных компонентов в полученном токсине, то есть о преобладании эндотоксинов.

Таким образом, полученный токсин представляет собой смесь белков и липополисахаридов.

Процесс получения препарата, выделенного из энтеротоксигенного штамма, следующий. Выращивают штаммы E. coli на бульоне Мартена в течение 7-ми дней в термостате при 37^oC. Затем к бульонной культуре добавляют формалин в объеме 0,4% к объему бульонной культуры и выдерживают суспензию в течение двух недель в термостате при 37^oC. Через две недели смесь вынимают из термостата, проверяют на стерильность и оставляют до осаждения осадка. Бактериальные клетки отделяют путем центрифугирования в течение 30 минут со скоростью 3 тыс. оборотов в минуту. Надосадочную жидкость используют в качестве анатоксина.

Полученный препарат представляет собой прозрачную жидкость соломенного цвета.

Способ осуществляется следующим образом.

В качестве препарата используют выделенный из энтеротоксигенных штаммов E. coli токсин в виде надосадочной жидкости, обработанной 0,4%-ным раствором формалина. Препарат вводят парентерально беременному животному за 1-12 дней до родов в дозе 6-8 мл.

Пример 1. Обоснование доз введения препарата супоросным свиноматкам с целью профилактики диареи новорожденных поросят.

Супоросных свиноматок распределили по 4-м группам, в каждой из которых выделили опытных и контрольных животных.

Препарат вводили однократно за 2-3 дня до опороса в дозах 4 - 8 мл опытным животным.

Результаты исследований представлены в таблице 1, из которой следует, что наиболее эффективной дозой является введение 7,0 мл на свиноматку. Увеличение дозы свыше 8,0 мл нецелесообразно, поскольку не оказывает влияния на эффективность профилактики диареи.

Пример 2. Обоснование эффективности сроков введения препарата супоросным свиноматкам при профилактике диареи молодняка
Свиноматок распределили по 5 группам в зависимости от сроков опороса: с 1 по 12-й день. Вели учет народившихся поросят и количество поросят, оставшихся к 7-10-дневному возрасту. Результат исследований представлен в таблице 2, из которой следует, что наибольший процент сохранности молодняка достигается при обработке свиноматок за 3-4 дня до опороса. Обработка свиноматок более чем за 12 дней до опороса оказывает меньше влияния на эффективность профилактики
Таким образом, полученные результаты испытаний свидетельствуют о высоком профилактическом эффекте заявляемого способа.

Изобретение касается профилактики желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных, а именно диареи. Для этого получают препарат на основе выделенного из энтеротоксигенного штамма Е. coli токсина в виде надосадочной жидкости. Токсин обрабатывают 0,4%-ным раствором формалина в течение не менее двух недель. Препарат вводят парентерально беременным животным в дозе 6-8 мл за 1-12 дней до родов. Изобретение повышает эффективность профилактики заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки. 2 табл.

Способ профилактики диареи молодняка сельскохозяйственных животных путем парентерального введения беременным животным препарата на основе токсина, выделенного из энтеротоксигенных штаммов E.coli, отличающийся тем, что в качестве препарата используют анатоксин, полученный путем обработки бульонной культуры E. coli 0,4%-ным раствором формалина в течение двух недель с последующим центрифугированием и отбором надосадочной жидкости, при этом препарат вводят за 1 - 12 дней до родов в дозе 6 - 8 мл.