СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ДИАРЕИ МОЛОДНЯКА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 1997 года по МПК A61K35/74 A61K39/108 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных, а именно диареи.

Известен способ профилактики и лечения желудочно-кишечных инфекций (а. с. ЧССР N 264572, кл. A 61 K 31/66, опубл. 15.11.87), заключающийся в пероральном введении вакцины, содержащей живые клетки непатогенного штамма Escherichia coli 0,83 CNCTC 325/71, которые подвергались лиофилизации.

Однако эффективность лечения данного способа низка, поскольку вакцина содержит клетки непатогенного штамма, вызывающего антагонистическое взаимоотношение бактерий. Способ предусматривает проведение профилактических мероприятий, однако их эффективность низка из-за необходимости проведения систематической ревакцинации. Кроме этого, способ вообще не предусматривает профилактику заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки.

Известен также способ профилактики кишечных инфекций (см. а. с. СССР N 1494907, кл. A 61 K 35/74, опубл. 23.07.89), заключающийся во введении убитой культуры штамма энтерококка Streptococcus faecium УДС₈₆ (ВКПМ и В-4054) или S. faecalis H₂₂ (ВКПМ и В-4053). Препарат вводят перорально 1 раз в сутки в течение 5 7 дней в дозе 2•10¹¹ 5•10¹¹ микр.тел/кг массы.

Однако процесс профилактики кишечных инфекций длителен и технически чрезвычайно сложно выполним, т.к. предусматривает 5 7 введений препарата. При этом расчет дозы введения препарата сложен. Кроме того, способ не предусматривает проведение лечебных мероприятий и не обеспечивает профилактику заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки.

Наиболее близким техническим решением к заявляемому является способ профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний (см. а.с. СССР N 1563699, кл. A 61 K 35/74, опубл. 15.05.90), заключающийся во введении интраперитонеально живой культуры Bacillus subtilis штамм N 44 телятам в дозе 2•10⁹ 3•-10⁹ клеток два раза в сутки, а поросятам в дозе 2•10⁸ 5•10⁸ клеток один раз в сутки.

Однако реализация данного способа сложна, поскольку технология предусматривает интраперитонеальное введение препарата, что вызывает риск возникновения перитонита, повреждений кишечника и, как следствие, требует высокой квалификации ветеринарных врачей, что не всегда реализуемо на практике. Способ длителен, поскольку предполагает многократное введение культуры (4 6 раз). При этом эффективность способа низка из-за использования живой сапрофитной культуры микроорганизмов, которая стареет со временем и не дает ожидаемого положительного результата. Таким образом, использование данного способа требует дополнительных затрат по обеспечению жестких условий хранения культуры. Способ трудно реализуем на практике особенно для профилактики заболеваний, поскольку предполагает введение культуры в первые 1 3 ч после рождения, что происходит, как правило, в ночное время. Кроме этого, способ вообще не предусматривает проведение профилактических мероприятий в случаях заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки.

Технический результат повышение эффективности профилактики и лечения заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки при удобстве реализации способа.

Технический результат достигается тем, что в способе профилактики и лечения диареи молодняка сельскохозяйственных животных на основе биологического лекарственного препарата в качестве последнего используют анатоксин, выделенный из энтеротоксигенных штаммов E.coli, продуцирующих экзотоксины и эндотоксины, который вводят молодняку до отъемного возраста парентерально один раз на 1 3 сут. после начала заболевания в дозе 0,5 2,0 мл с лечебной целью и взрослому животному за 1 12 дней до родов в дозе 6 8 мл с профилактической целью.

В известных авторам источниках патентной и научно-технической информации не описано способа лечения и профилактики диареи молодняка сельскохозяйственных животных, позволяющего повысить эффективность лечения и профилактики заболеваний, вызванных энтеротоксином кишечной палочки за счет использования анатоксина, выделенного из энтеротоксигенного штамма E. coli.

Неизвестно введение анатоксинов кишечной палочки с лечебной целью на ранних стадиях заболевания. При этом введение анатоксина приводит к активизации клеточного и системного иммунитетов.

Известен способ лечения диареи у детей путем введения в малых дозах эндотоксина E.coli в период реконвалесценции для повышения устойчивости организма к действию эндотоксинов. Процесс лечения предусматривает введение антибиотиков и лишь на стадии восстановления введение эндотоксина.

Заявляемая технология лечения предусматривает введение на ранних стадиях заболевания только одного препарата, не используемого ранее в лечебных целях
анатоксина, выделенного из энтеротоксигенного штамма E.coli, что, практически, исключает возможность повторного заражения инфекцией, вызываемой энтеротоксином кишечной палочки, и, как следствие, приводит к повышению эффективности лечения.

Сказанное позволяет сделать вывод о наличии в заявляемом техническом решении "изобретательского уровня".

Идентификацию штаммов E.coli проводили по стандартным тестам. Токсигенные свойства проверяли путем посева культур на бульоне Мартена и термостатирования при 37^oC в течение двух недель. Бактериальную взвесь центрифугировали и надосадочную жидкость использовали в качестве заражающего материала. Материал вводили белым мышам по 0,5 мл внутрибрюшинно, наблюдали за животными в течение первых двух суток (контрольным животным аналогичным образом вводили стерильный бульон Мартена). При гибели животных считали полученный зараженный материал токсином.

Были изучены свойства токсина. Изучали динамику накопления летальной дозы токсина путем заражения белых мышей центрифугатом из бульонных культур разного возраста. Гибель животных наступала от токсина, полученного на 2 5 день выращивания бульонной культуры, что свидетельствовало о преобладании белковой фракции, т.е. экзотоксинов.

Полученный из бульонной культуры двухнедельного возраста токсин изучали на термоустойчивость: нагревали до 100^oC и выдерживали при этой температуре в течение 30 мин. Процент летальности лабораторных животных снижался на 50% что свидетельствовало о преобладании липополисахаридных компонентов в полученном токсине, т.е. о преобладании эндотоксинов. Таким образом, полученный токсин представляет собой смесь белков и липополисахаридов.

Процесс получения анатоксина, выделенного из энтеротоксигенного штамма, следующий. Выращивают штаммы E.coli на бульоне Мартена в течение 7 дней в термостате при 37^oC. Затем к бульонной культуре добавляют формалин в объеме 0,4% к объему бульонной культуры и выдерживают суспензию в течение двух недель в термостате при 37^oC. Через две недели смесь вынимают из термостата, проверяют на стерильность и оставляют до осаждения осадка. Бактериальные клетки могут быть отделены путем центрифугирования в течение 30 мин со скоростью 3 тыс. оборотов в минуту. Недостаточную жидкость используют в качестве анатоксина.

Анатоксин, выделенный из энтеротоксигенного штамма, представляет собой прозрачную жидкость соломенного цвета.

Способ осуществляется следующим образом.

В качестве лекарственного препарата используют анатоксин, выделенный из энтеротоксигенного штамма E.coli. Препарат вводят парентерально на 1 3 сут. с начала заболевания в дозе 0,5 2 мл молодняку с лечебной целью и взрослому животному за 1 12 дней до родов в дозе 6 8 мл с профилактической целью.

Пример 1. Обоснование доз введения препарата молодняку с лечебной целью. Анатоксин в дозах 0,1 2,0 мл вводили группам поросят 3 9-дневного возраста однократно на 1 3 сутки со дня заболевания. Количество поросят в группах - от 12 до 30. Результаты исследования представлены в табл. 1, из которой следует, что наиболее эффективной дозой является введение 1,0 мл на поросенка. Увеличение дозы свыше 2,0 мл нецелесообразно, поскольку не оказывает резкого влияния на эффективность лечения.

Пример 2. Обоснование доз введения препарата супоросным свиноматкам с целью профилактики диареи новорожденных телят.

Супоросных свиноматок распределили по 4-м группам, в которых выделили опытных и контрольных животных.

Препарат вводили однократно за 2 3 дня до опороса в дозах 4 8 мл опытным животным. Результаты исследований представлены в табл. 2, из которой следует, что наиболее эффективной дозой является введение 7,0 мл на свиноматку. Увеличение дозы свыше 8,0 мл нецелесообразно, поскольку не оказывает влияния на эффективность профилактики диареи.

Пример 3. Обоснование эффективности сроков введения препарата супоросным свиноматкам при профилактике диареи молодняка.

Свиноматок распределили по 5 группам в зависимости от сроков опороса: с 1 по 1 день. Вели учет народившихся поросят и количество поросят, оставшихся к 7 10-дневному возрасту. Результат исследований представлен в табл. 3, из которой следует, что наибольший процент сохранности молодняка достигается при обработке свиноматок за 3 4 дня до опороса. Обработка свиноматок более чем за 12 дней до опроса оказывает меньшее влияние на эффективность профилактики.

Таким образом, полученные результаты испытаний свидетельствуют о высоком терапевтическом и профилактическом эффектах заявляемого способа.

Использование: биотехнология, ветеринария, лечение желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных, диарея. Сущность изобретения: в качестве лекарственного препарата используют анатоксин, выделенный из энтеротоксигенных штаммов E.coli. Препарат с лечебной целью вводят молодняку парентерально на 1 - 3 сут. с начала заболевания в дозе 0,5 - 2 мл. 3 табл.

Способ лечения диареи молодняка сельскохозяйственных животных на основе биологического лекарственного препарата, отличающийся тем, что в качестве биологического лекарственного препарата используют надосадочную жидкость, полученную из бульонной культуры энтеротоксигенных штаммов E.coli и обработанную формалином, при этом препарат вводят молодняку до отъемного возраста парентерально один раз на 1 3 сутки после начала заболевания в дозе 0,5 2,0 мл.