СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕЧЕБНОГО СРЕДСТВА, РЕГУЛИРУЮЩЕГО ДИФФЕРЕНЦИАЦИЮ КЛЕТКИ Российский патент 1999 года по МПК A61K35/48 

Описание патента на изобретение RU2128513C1

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в фармакологии и медицине.

Дифференциация клетки происходит при различных физиологических процессах в организме и в первую очередь при нарушениях функции иммунной системы и соответствующих последствий этого нарушения, в частности - образовании злокачественных опухолей, нарушении кровотворения и т.п.

Наиболее близким к заявляемому решению является способ получения лечебного средства, регулирующего дифференциацию клетки и предназначенного для лечения и профилактики рака (Патент Франции N 2451193, 1979 г.).

Известный способ состоит в измельчении эмбрионов животных, их гомогенизации в физиологическом растворе, получении экстракта эмбрионального комплекса веществ и отделении образовавшегося осадка посредством фильтрования, после чего к фильтрату добавляют антибиотик. В результате осуществления указанной последовательности действий получают лечебный препарат полного эмбрионального комплекса. Лечение полученным препаратом состоит в необходимом курсе инъекций.

Способ-прототип достаточно прост в выполнении, однако он не может обеспечить получение высокоэффективного препарата, поскольку не предусматривает расщепления высокомолекулярных предшественников и активизацию регуляторных пептидов. Полученный препарат содержит форменные элементы и высокомолекулярные белки, что в значительной мере определяет его побочное действие, проявляющееся в аллергии и в ее грозном осложнении - анафилактическом шоке.

Задачей настоящего изобретения является создание способа получения лечебного средства, регулирующего дифференциацию клетки, который посредством совокупности предусматриваемых в нем действий и режимов, направленных на активизацию одних белково-пептидных компонентов и нейтрализацию других, обеспечивает высокую эффективность получаемого препарата и исключает его побочное действие.

Поставленная задача решается тем, что в способе получения лечебного средства, регулирующего дифференциацию клетки, заключающемся в измельчении эмбриональных тканей животного, их гомогенизации и экстракции в физиологическом растворе, отделении осадка от раствора, согласно изобретению в качестве эмбриональных тканей берут мышечные ткани животного, гомогенат выдерживают в течение 10 - 20 часов, а после экстракции выдерживание раствора осуществляют в течение 24 ± 0,5 часа, затем после отделения образовавшегося осадка полученный раствор дополнительно разбавляют физиологическим раствором до достижения концентрации белка в нем 15 - 25 мг/мл и добавляют к нему консервант в количестве не менее 0,05%, после отделения образовавшейся взвеси раствор выдерживают в течение 48 часов, стерилизуют и термостатируют его в течение не менее 3-х суток при температуре 36oC, после чего раствор выдерживают 30 - 40 суток при температуре, не превышающей 15oC, и удаляют образовавшуюся взвесь, а раствор подвергают взаимодействию с иммобилизованным протеолитическим ферментом, причем режим указанного взаимодействия устанавливают исходя из контрольной пробы получаемого средства.

Авторами предложенного способа предусмотрены особенности получения белково-пептидного комплекса (БПК), представляющего собой средство, обладающее определенной специфичностью и необходимым качеством.

Использование в качестве сырья эмбриональных мышечных мягких тканей животного отвечает специфичности получаемого средства. Выдерживание гомогената указанных тканей в течение 10 - 20 часов обусловлено биосинтезом экстремальных белков, от природы которых зависит качество получаемого лечебного средства. При времени больше указанного происходит ухудшение качества препарата, т.к. образуются некротические белки, вызывающие токсикоз. При меньшем времени выдержки также получают препарат низкого качества.

После экстракции БПК в физрастворе предложено выдерживать раствор в течение 24 часов - при таких условиях достигается максимальная полнота экстракции, при выдержке раствора за пределами указанного времени резко изменяется качество получаемого препарата. В процессе выдержки формируются предшественники активных белков, которые и определяют специфичность препарата.

На этой стадии биосинтеза образуется осадок нерастворимых белков (тканевых, плазматических и др.), их отделяют, а полученный раствор дополнительно разбавляют физраствором до достижения концентрации белков 15 - 20 мг/мл, таким образом задают оптимальные условия для последующего проведения протеолиза.

Добавление к полученному раствору консерванта в количестве не менее 0,05% предназначено для противомикробного, противогрибкового и т.п. обеззараживания получаемого препарата.

Образовавшуюся взвесь, представляющую собой белки, мембраны, структурные белки, липидные частицы и др., отделяют, поскольку последующий процесс аутолиза будет распространяться и на них, что неблагоприятно отражается на качестве лечебного средства.

Оставшийся раствор выдерживают в течение 48 часов. Экспериментально доказано, что этого времени достаточно для завершения процессов агрегации частиц. Полученный раствор стерилизуют для удаления вирусов, бактерий, хламид, грибков и т.п. Стерилизацию можно выполнить любым из принятых в данной области методом в соответствии с требованиями ВОЗ.

Следующие действия над полученным раствором БПК относятся к аутолизу. Термостатирование раствора осуществляют в течение не менее 3-х суток при температуре 36 ± 2oC.

Выбор времени термостатирования при данной температуре обусловлен достижением максимальной специфичности получаемого лечебного средства.

Процессы, происходящие на этой стадии, могут быть определены как инактивация ростового фактора и, кроме того, при этом большие белки расщепляются на куски, что делает получаемый препарат неиммуногенным.

Дальнейшее выдерживание раствора в течение 30 - 40 суток при температуре не выше 15oC определено следующими факторами - при этих условиях мягко заканчивается процесс аутолиза с одновременной агрегацией образовавшихся частиц, которые отделяют.

Оставшийся раствор БПК подвергают протеолизу на иммобилизованном протеолитическом ферменте, например, на заполненной им колонке.

Изобретение поясняется примером конкретного выполнения.

Для получения лечебного средства, регулирующего дифференциацию клетки, берут эмбриональные мышечные ткани крупного рогатого скота. Отобранное сырье измельчают, гомогенизируют при температуре, не превышающей 8oC, гомогенат выдерживают в течение 16 часов, разбавляют охлажденным физиологическим раствором, затем после экстракции раствор дополнительно выдерживают при температуре 4 - 8oC в течение 24 часов.

В процессе выдерживания образуется осадок, который отделяют центрифугированием при скорости 3000 об. в течение 1 часа при температуре 2 - 4oC.

Полученный раствор разбавляют физиологическим раствором до достижения концентрации белка в нем 21 мг/мл, добавляют по каплям консервант, например хиназол, до достижения его концентрации в растворе БПК 0,05%. Затем отделяют образовавшуюся взвесь посредством пропускания раствора через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и выдерживают фильтрат в течение 48 часов.

После этого производят стерилизацию раствора, например, посредством пропускания его в асептических условиях через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм. Полученный таким образом стерильный раствор герметически закрывают и термостатируют в течение 3 - 4 суток при температуре 36oC. После термостатирования раствор выдерживают 35 суток при температуре, не превышающей 15oC, образовавшуюся взвесь отделяют центрифугированием, а фильтрат дополнительно пропускают через фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Полученный раствор БПК пропускают через колонку (при температуре 25 - 30oC), заполненную агарозой 4B, иммобилизованной ферментом, например трипсином.

Скорость элюции раствора БПК устанавливают исходя из соответствия электрофореграммы элюата с контрольной электрофореграммой БПК.

Полученную жидкость в асептических условиях стерилизуют путем пропускания ее через мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, после чего заливают в ампулы и запаивают.

Полученное средство представляет собой прозрачную жидкость с легким желтым оттенком без запаха, которая может смешиваться с водой или физиологическим раствором в любых соотношениях. При температуре 20 ± 0,2oC жидкость имеет плотность 1,0106 г/см, показатель преломления при температуре 20 ± 0,3oC - 1,3410 ± 0,0004, водородный показатель pH 6,5 - 7,0.

На чертеже представлена контрольная электрофореграмма полученного препарата.

Таким образом, в результате заявленного способа получено лечебное средство, регулирующее дифференциацию клетки ("Пропес"), на которое имеется фармстатья и которое широко испытано на больных. Средство признано как высокоэффективное при лечении заболеваний, сопровождающихся нарушением дифференциации клетки.

Похожие патенты RU2128513C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА "БИПЕКС" ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НОВООБРАЗОВАНИЙ МОЗГА 1997
  • Иванов Александр Павлович
  • Кузьменко Иван Иванович
  • Паничев Александр Георгиевич
  • Губченко Станислав Владимирович
  • Найштетик Владимир Яковлевич
RU2128510C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА 1997
  • Иванов Александр Павлович
  • Кузьменко Иван Иванович
  • Паничев Александр Георгиевич
  • Губченко Станислав Владимирович
  • Найштетик Владимир Яковлевич
RU2128514C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕЧЕБНОГО СРЕДСТВА ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ, СОПРОВОЖДАЮЩИХСЯ НАРУШЕНИЕМ ФУНКЦИЙ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ 1997
  • Иванов Александр Павлович
  • Кузьменко Иван Иванович
  • Паничев Александр Георгиевич
  • Губченко Станислав Владимирович
  • Найштетик Владимир Яковлевич
RU2128511C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВОЙ ПИЩЕВОЙ ДОБАВКИ 1996
  • Морозов В.Г.
  • Хавинсон В.Х.
RU2075944C1
БЕЛКОВО-ПОЛИПЕПТИДНЫЙ КОМПЛЕКС, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИГИПОКСИЧЕСКИМ, ТКАНЕСПЕЦИФИЧЕСКИМ РЕПАРАТИВНЫМ ДЕЙСТВИЕМ НА ЦЕНТРАЛЬНУЮ И ПЕРИФЕРИЧЕСКУЮ НЕРВНУЮ СИСТЕМУ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ЕГО ОСНОВЕ 2011
  • Назаренко Анна Борисовна
  • Соколов Михаил Анатольевич
RU2485132C2
Способ получения биологически активного белково-полипептидного гидролизата из тканей мозга 2022
  • Федота Наталья Викторовн
  • Шулунова Ангелина Николаевна
  • Квочко Андрей Николаевич
RU2801151C1
БИЦИКЛИЧЕСКИЕ ПИРИМИДИНЫ ИЛИ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫЕ СОЛИ-АКТИВАТОРЫ АНТИОКСИДАНТНОЙ ПРОГРАММЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ ЦИТОПРОТЕКТОРОВ 2014
  • Шульженко Александр Александрович
RU2545758C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИЗ ЖИВОТНОГО СЫРЬЯ КОМПЛЕКСА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ПОЛИПЕПТИДОВ, НОРМАЛИЗУЮЩИХ ФУНКЦИИ ГОЛОВНОГО МОЗГА, ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ 1996
  • Морозов В.Г.
  • Хавинсон В.Х.
  • Чайка О.В.
  • Семенова В.И.
RU2104702C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ПОЛИПЕПТИДОВ ДЛЯ НОРМАЛИЗАЦИИ ФУНКЦИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ 2004
  • Родионов Петр Петрович
  • Пономарькова Надежда Александровна
RU2275924C2
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНАЯ ДОБАВКА ДЛЯ КОСМЕТИЧЕСКИХ И ЛЕЧЕБНЫХ СРЕДСТВ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ 2003
RU2225196C1

Реферат патента 1999 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕЧЕБНОГО СРЕДСТВА, РЕГУЛИРУЮЩЕГО ДИФФЕРЕНЦИАЦИЮ КЛЕТКИ

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в фармакологии и медицине. Способ состоит в гомогенизации мышечных тканей эмбриона животного, после чего гомогенат выдерживают в течение 10-20 ч, проводят экстракцию, а затем отделяют образовавшийся осадок, а полученный раствор дополнительно разбавляют физиологическим раствором до достижения концентрации белка в нем 15-25 мг/мл, добавляют консервант, отделяют образовавшуюся взвесь, раствор выдерживают в течение 48 ч, стерилизуют, термостатируют его, выдерживают 30-40 суток при температуре не выше 15oC, удаляют образовавшуюся взвесь и раствор подвергают взаимодействию с иммобилизованным протеолитическим ферментом. Технический результат - полученное средство высокоэффективно при лечении заболеваний, сопровождающихся нарушением дифференциации клетки. 1 ил.

Формула изобретения RU 2 128 513 C1

Способ получения лечебного средства, регулирующего дифференциацию клетки, заключающийся в измельчении эмбриональных тканей животного, их гомогенизации и экстракции в физиологическом растворе, отделении осадка от раствора, отличающийся тем, что в качестве эмбриональных тканей берут мышечные ткани животного, гомогенат выдерживают в течение 10 - 20 ч, а после экстракции выдерживание раствора осуществляют в течение 24 ± 0,5 ч, затем после отделения образовавшегося осадка полученный раствор дополнительно разбавляют физиологическим раствором до достижения концентрации белка в нем 15 - 25 мг/мл и добавляют к нему консервант в количестве не менее 0,05%, после отделения образовавшейся взвеси раствор выдерживают в течение 48 ч, стерилизуют и термостатируют его в течение не менее 3 суток при 36oC, после чего раствор выдерживают 30 - 40 суток при температуре, не превышающей 15oC, и удаляют образовавшуюся взвесь, а раствор подвергают взаимодействию с иммобилизованным протеолитическим ферментом, причем режим указанного взаимодействия устанавливают, исходя из контрольной пробы получаемого средства.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1999 года RU2128513C1

БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЕ СРЕДСТВО, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ, ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ УКАЗАННОЕ СРЕДСТВО, И СПОСОБ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРЕПАРАТА 1992
  • Николаенко А.Н.
  • Шорох Д.Б.
  • Шевченко А.А.
RU2041715C1
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЕ СРЕДСТВО, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ УКАЗАННОЕ СРЕДСТВО, И СПОСОБ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРЕПАРАТА 1992
  • Николаенко Александр Николаевич
RU2041717C1
СТАЛЬ 2006
  • Щепочкина Юлия Алексеевна
RU2327793C2
ВЕРТОЛЕТНЫЙ ГАЗОТУРБИННЫЙ ДВИГАТЕЛЬ С УРОВНЕМ ШУМА, ПОНИЖАЕМЫМ С ПОМОЩЬЮ ШУМОГЛУШИТЕЛЬНОГО ОБОРУДОВАНИЯ ДЛЯ ЭЖЕКТОРА 2007
  • Бод Пьер
  • Жуаншико Дидье
RU2451193C2

RU 2 128 513 C1

Авторы

Иванов Александр Павлович

Кузьменко Иван Иванович

Паничев Александр Георгиевич

Губченко Станислав Владимирович

Найштетик Владимир Яковлевич

Даты

1999-04-10Публикация

1997-12-02Подача