СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/48 G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, которое позволяет определять количественные величины иммунологических показателей по параметрам периферической крови.

Известны многочисленные способы определения иммунологических показателей, осуществляемые в основном методами лабораторного анализа [2,3,4,6,7]. Для выполнения подобных исследований необходимо проведение обязательных технологических этапов:
1. взятие крови из вены;
2. центрифугирование крови;
3. отмывание лимфоцитов;
4. соединение с соответствующим антикомпонентом для каждого показателя;
5. инкубация созданных иммунных комплексов;
6. определение значения иммунологического показателя инструментальным методом исследования.

Высокая чувствительность и специфичность иммунологических реакций, возможность количественной оценки результатов сделали иммунологические лабораторные методы исследования распространенными и применяемыми в диагностических целях. Тем не менее, все лабораторные методы обладают рядом существенных недостатков, которые затрудняют их широкое использование при первоначальном клиническом обследовании. Все методы являются инвазивными, необходимо использование большого количества крови, применяемые реактивы и используемое оборудование являются дорогостоящими, исследования могут проводить специалисты-иммунологи.

Нами впервые предложен способ определения иммунологических показателей, включающий определение показателей периферической крови: эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, палочкоядерных нейтрофилов, сегментоядерных нейтрофилов, лимфоцитов, эозинофилов, моноцитов, СОЭ. Для каждого иммунологического показателя полученные количественные значения параметров периферической крови умножаются на соответствующие им коэффициенты регрессии и суммируются. Иммунологические показатели рассчитываются по формуле:

где Y - определяемый иммунологический показатель [T-лимфоциты, Т- супрессоры, B-лимфоциты, иммуноглобулины A, M, J, общий комплемент, третья фракция комплемента, циркулирующие иммунные комплексы];
A_o - свободный член;
B_i - коэффициенты регрессии показателей периферической крови;
C_i - коэффициенты регрессии квадратов показателей периферической крови;
X_i, ... X₈- показатели периферической крови.

При этом, для каждого иммунологического показателя в формулу вводится соответствующий рассчитанный коэффициент регрессии (таблица 1).

Получаемые, в результате этого, значения иммунологических показателей имеют количественную характеристику. Этим способом возможно получение результатов содержания Т-лимфоцитов (Т-л), T- супрессоров (Т-с), В-лимфоцитов (В-л), иммуноглобулина A (lgA), иммуноглобулина М (lgM), иммуноглобулина J (lgJ), циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), общего комплемента (CH₅₀), третьей фракции комплемента (C₃H₅₀).

С целью установления точности определения иммунологических параметров проведен сравнительный анализ результатов, полученных предложенным способом, с результатами, полученными общепринятыми лабораторными исследованиями: определение Т-л по методу М. Jondal et al [9], В-л по методу S.Gupta [8], Т-с по методу Д.К. Новикова с соавторами [5], lg A, M и J по методу J. Mancini [10] , CH₅₀ по классическому методу 50% гемолиза, C₃H₅₀ C₃H₅₀ по методу 50% гемолиза с использованием эритроцитов кролика, ЦИК по методу Ю.А. Гриневич и А.Н. Алферова [1]. Исследования проведены в группе из 94 человек. На чертеже представлены отклонения значений иммунологических показателей, полученных предложенным способом от значений иммунологических показателей, полученными общепринятыми лабораторными методами.

Отклонения иммунологических показателей наиболее часто отмечались в границах до 10%. Отклонения Т-лимфоцитов в этих пределах наблюдались в 76.1%, Т-супрессоров - в 48.4%, В-лимфоцитов - 52.6%, иммуноглобулина A - 73%, иммуноглобулина М -59.8%, иммуноглобулина J - 41.2%, циркулирующих иммунных комплексов - 65%, общего комплемента - 43.3%, третьей фракции комплемента - 66%. Отклонения в границах свыше 10% были относительно равномерными, количество отклонений не превышало 20%. Таким образом, определяемые по предложенному способу значения иммунологических показателей отличаются от значений, полученных общепринятыми лабораторными методами в допустимых пределах, что свидетельствует о возможности использования разработанного способа для оценки показателей иммунной системы.

Пример 1. Курсант Л., 22 года. Здоров.

Жалоб не предъявлял. Анамнез без особенностей. При объективном осмотре отклонений со стороны внутренних органов не выявлено. Клинический анализ крови: эритроциты - 4,5•10¹², гемоглобин - 143 г/л, лейкоциты - 7,5•10⁹, СОЭ - 5 мм/ч, палочкоядерные нейтрофилы - 2%, сегментоядерные нейтрофилы - 66%, лимфоциты - 25%, моноциты - 5%. Иммунологические показатели приведены в таблице 2.

Как видно, у 8 показателей относительная погрешность не превышает 20%. У 1 показателя (ЦИК) погрешность выше 20%.

Пример 2. Курсант В., 19 лет. Здоров.

Жалоб не предъявлял. В анамнезе - перенесенное острое респираторное заболевание за 3 месяца до обследования. При объективном осмотре патологии со стороны внутренних органов не выявлено. Клинический анализ крови: эритроциты -4,3•10¹², гемоглобин -135 г/л, лейкоциты - 8,0•10⁹, СОЭ - 7 мм/ч, палочкоядерные нейтрофилы - 2%, сегментоядерные нейтрофилы - 68%, лимфоциты - 22%, моноциты - 6%. Иммунологические показатели приведены в таблице. 3.

Как видно, у 9 показателей относительная погрешность не превышает 20%.

Пример 3. Курсант Г., 24 года. Нейроциркуляторная дистония по гипертоническому типу.

Предъявлял жалобы на неприятные ощущения в области сердца, головные боли, головокружение, возникающие периодически в течение года, без связи с какой-либо причиной. При объективном обследовании - тахикардия до 92 в минуту, повышенное артериальное давление до 155/90 мм рт. Ст. На электрокардиограмме - высокий зубец Т в отведениях VI-2-3. В общем клиническом анализе крови: эритроциты - 4,3•10¹², гемоглобин -137 г/л, лейкоциты - 5,4•10⁹, СОЭ - 2 мм/ч, эозинофилы - 2%, палочкоядерные нейтрофилы - 1%, сегментоядерные нейтрофилы - 62%, лимфоциты - 30%, моноциты - 5%. Иммунологические показатели приведены в таблице 4.

Как видно, у 9 показателей относительная погрешность не превышает 20%.

Приведенные клинические наблюдения свидетельствуют о достоверности получаемых результатов определения иммунологических показателей, что делает возможным применение разработанного способа в диагностических целях. Исследование не занимает много времени. Для получения конечного результата не требуется проведения лабораторных иммунологических исследований. Получаемый результат имеет количественную характеристику, что является важным при диагностическом исследовании. Разработанный способ оценки иммунологических показателей может быть применен на начальных этапах обследования и может быть осуществим непосредственно самим лечащим врачом.

Источники информации
1. Гриневич Ю.А., Алферов А.Н. Определение иммунных комплексов в крови онкологических больных //Лаб. дело. 1981, N 8, с. 493-495.

Способ может быть использован в медицине, а именно в иммунологии. В периферической крови методом общеклинического анализа определяется содержание элементов красной и белой крови - эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, палочкоядерных нейтрофилов, сегментоядерных нейтрофилов, лимфоцитов, эозинофилов, моноцитов, СОЭ. Для определения каждого иммунологического показателя полученные количественные значения параметров периферической крови умножаются на соответствующие им коэффициенты корреляции и суммируются. Иммунологические показатели рассчитываются по формуле:

где Y - определяемый иммунологический показатель (Т-лимфоциты, Т-супрессоры, В-лимфоциты, иммуноглобулины A, M, J, общий комплемент, третья фракция комплемента, циркулирующие иммунные комплексы);
A_o- свободный член;
B_i - коэффициенты регрессии показателей периферической крови;
C_i - коэффициенты регрессии квадратов показателей периферической крови;
Х_i ... .., X₈ - показатели периферической крови.

При этом значения коэффициентов корреляции для каждого иммунологического показателя определяют из таблицы. Способ позволяет повысить точность и ускорить определение иммунологических показателей. 4. табл., 1 ил.

Способ определения иммунологических показателей путем исследования крови, отличающийся тем, что определяют следующие показатели периферической крови: эритроциты, гемоглобин, СОЭ, лейкоциты, палочкоядерные нейтрофилы, сегментоядерные нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, рассчитывают иммунологические показатели по формуле

где Y - определяемый иммунологический показатель (Т-лимфоциты, Т-супрессоры, В-лимфоциты, иммуноглобулины, А, М, J, общий комплемент, третья фракция комплемента, циркулирующие иммунные комплексы);
A_о - свободный член;
В_i - коэффициент регрессии показателей периферической крови;
С_i - коэффициенты регрессии квадратов показателей периферической крови;
X_i .... X₈ - показатели периферической крови,
при этом коэффициенты регрессии для каждого иммунологического показателя определяют из таблицы I.