СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ЛЕЙКОЗА Российский патент 1996 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в гематологии для прогнозирования течения лейкозов.

Течение лейкозного процесса отличается большим разнообразием. При сходной гематологической картине у одних больных возникает инфекционные осложнения, трагически влияющие на исход основного заболевания, в то время как у других пациентов течение основного заболевания приобретает более злокачественный характер. Именно поэтому прогнозирование течения лейкозного процесса является актуальной задачей, так как позволяет своевременно назначить либо антибактериальную, либо усилить цитостатическую терапию.

Известен способ диагностики степени тяжести острого лейкоза (А.с. 648206, МКИ 61 В 10/00, опубл. в Бюл. изобретений 28.02.79) путем исследования крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют активность уроканиназы и по величине активности этого фермента диагностируют степень тяжести острого лейкоза.

Данный метод не может быть использован для прогнозирования течения хронических лейкозов, так как высокий лейкоцитоз (при отсутствии бластных клеток) и выраженный клеточный распад приводят к повышению значений исследуемого фермента, что можно расценить как тяжелую форму лейкозного процесса. В то же время течение хронических лейкозов отличается большей доброкачественностью.

Наиболее близким к предполагаемому способу является "Способ прогнозирования течения хронических лейкозов" (Заявка А.с. N 1750369, N бюл. 9227, Заявка 4661262/30-14, получено положительное решение ВНИИГПЭ от 11.05.90) путем выделения из венозной крови лимфоцитов и определения их показателей, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в стадии развернутых клинических проявлений осуществляют реакцию естественной цитотоксичности лимфоцитов в отношении клеток-мишеней К-562, определяют процент специфического лизиса клеток-мишеней и при его сохранении в пределах показателей естественной цитотоксичности для соответствующих соотношений клеток-эффекторов и клеток-мишеней, характерных для данной стадии заболевания, прогнозируют благоприятное течение заболевания, а при достоверном снижении - неблагоприятное.

Способ обеспечивает высокую точность при прогнозировании течения хронических лейкозов, но не может быть применен для этих же целей при острых лейкозах в развернутой стадии заболевания, так как наличие бластных элементов в периферической крови, имеющих такую же плавучесть в градиенте фиколл-урографина, как и зрелые лимфоциты, приводит к заведомо сниженным показателям цитотоксичности. Кроме того, способ-прототип не может быть применен для прогнозирования инфекционной резистентности как при острых, так и при хронических формах лейкозов, так как в нем учитывается активность естественных киллерных клеток, играющих главную роль в противоопухолевой защите, но не являющихся клетками-эффекторами, обеспечивающих защиту организма от бактериальных антигенов.

Целью предполагаемого изобретения является расширение функциональных возможностей и упрощение способа прогнозирования течения лейкозов для своевременного назначения адекватной терапии.

Поставленная цель достигается тем, что в сыворотке крови больного определяют литическую активность комплемента по отношению к сенсибилизированным эритроцитам барана, оценивают ее и при величине 41 60 литических единиц судят об обычном для данной нозологической формы течения лейкоза, при уменьшении литической активности комплемента ниже 40 единиц прогнозируют снижение инфекционной резистентности, а при повышении активности выше 61 литической единицы прогнозируют злокачественное течение процесса.

Способ осуществляют следующим образом: проводят определение активности комплемента по расчету фактического лизиса сенсибилизированных эритроцитов барана. Приготовление гемосистемы: эритроциты барана трижды отмывают физиологическим раствором. Готовят 5% взвесь (1 капля эритроцитов барана и 19 капель стерильного физиологического раствора). К приготовленной взвеси в равном объеме добавляют разведенную в тройном титре гемолитическую кроличью сыворотку. Гемосистему инкубируют 30 минут при 37^oС.

Ход исследования: после взятия крови в капилляр проводят центрифугирование при 1500 об/мин в течение 5 минут. В опытные пробирки вносят по 0,2 мл физиологического раствора, гемосистемы и исследуемой сыворотки. В контрольную пробирку вносят те же ингредиенты, но вместо сыворотки 0,2 мл физиологического раствора. Смесь инкубируют 30 минут при 37^oС. 0,1 мл реакционной смеси соединяют с 0,9 мл физиологического раствора (разведение в 10 раз). Учет реакции: подсчитывают количество эритроцитов барана из опытных и контрольных образцов в 5 больших квадратах камеры Горяева. Для оценки результатов используют формулу:

где Х комплементарная активность (литические единицы); А количество эритроцитов барана из опытной пробы; В количество сосчитанных эритроцитов барана контрольной пробы. Норма: 47 60 лит. ед. (52,2±2,8 лит.ед.).

Примерами конкретного осуществления способа могут служить выписки из историй болезни:
1. Больная К-ва, N ист. болезни 5315-278 поступила в гематологическое отделение с жалобами на слабость. Анализ крови: эритроциты (эр.) - 3,6х10¹²/л, гемоглобина /Нв/ 114 г/л, цветовой показатель /ц.п./ - 0,95; тромбоциты 4: 1000; лейкоциты 2,4х10⁹/л, бласты 25% сегментоядерные нейтрофилы 5% моноциты 2% лимфоциты 68% СОЭ 48 мм/час. В миелограмме тотальная бластная инфильтрация. На основании клинико-гематологических данных был выставлен диагноз: острый лейкоз.

При исследовании активности комплемента: литическая активность комплемента составила 38 единиц. В дальнейшем у больной в процессе лечения развилась двусторонняя нижнедолевая пневмония, после проведения массивной антибактериальной терапии, а затем и противолейкозного лечения больная выписана в состоянии клинико-гематологического улучшения.

Пример 2. Больной О-кий, N ист. болезни 52648-229 поступил в гематологическое отделение с жалобами на выраженную общую слабость, потерю веса, наличие кровоизлияний на теле. Анализ крови: эр. 2,5х10¹²/л, Нв 98 г/л, ц.п. 0,87; тромбоциты 5:1000, лейкоциты 3,1х10⁹/л, бласты 30% сегментоядерные нейтрофилы 13% моноциты 3% лимфоциты 54% СОЭ - 88 мм/час.

Комплементарная активность сыворотки крови составила 86 литических единиц. Несмотря на проводимую специфическую терапию, состояние больного прогрессивно ухудшалось, через 2 месяца после постановки диагноза больной скончался.

Пример 3. Больной Теплюк М.Д. N истории болезни 56134-543. Поступил в гематологическое отделение с жалобами на общую слабость, головокружение. Впервые при обследовании был диагностирован диагноз хронического лимфолейкоза в стадии выраженных клинических проявлений.

Анализ крови: эр. 3,1х10⁹/л, Нв 90 г/л, ц.п. 0,88, тромбоциты 50:1000; лейкоциты 133,0х10⁹/л, палочкоядерные нейтрофилы 1% сегментоядерные нейтрофилы 10% эозинофилы 1% моноциты 1% лимфоциты - 87% СОЭ 5 мм/час. Больному назначено специфическое лечение. Комплементарная активность сыворотки крови составила 10 литических единиц. Через неделю после начала терапии у больного диагностирована тяжелая левосторонняя нижнедолевая пневмония. После проведения антибактериальной, дезинтоксикационной терапии состояние больного улучшилось, выписан домой, наблюдается амбулаторно в течение 6 месяцев.

Пример 4. Больной К-ин, N истории болезни 55945-526. Поступил в гематологическое отделение с жалобами на слабость, одышку, боли в животе. Болен хроническим лимфолейкозом в течение 5 лет. Ухудшение отмечается в течение последнего месяца, когда появилось резкое увеличение всех групп лимфатических узлов, увеличение размеров паренхиматозных органов.

Анализ крови: Эр. 3,0х10¹²/л, Нв 87 г/л, ц.п. 0,82, тромбоциты 30:1000; лейкоциты 23,0х10⁹/л, палочкоядерные нейтрофилы 1% сегментоядерные нейтрофилы 9% эозинофилы 2% моноциты 2% лимфоциты - 86% СОЭ 56 мм/час.

Комплементарная активность сыворотки крови 80 литических единиц.

Течение хронического лимфолейкоза в данном случае проявлялось злокачественностью: несмотря на проводимое цитостатическое лечение значительно увеличились размеры селезенки, печени, внутрибрюшных лимфатических узлов, в гемограмме наряду с нарастающим лейкоцитозом отмечено появление молодых форм лимфоцитов пролимфоцитов.

Обоснованием достоверности предложенного способа являются данные отечественной и зарубежной литературы, свидетельствующие о том, что компоненты системы комплемента принимают ключевое участие в механизмах защиты организма от вирусных и бактериальных инфекций, а также участвуют в становлении и развитии неопластических процессов (1, 3). Однако до настоящего времени отсутствуют данные о состоянии комплемента при конкретных, в частности, лейкозных процессах и о возможности использования этих показателей для прогностических целей.

Экспериментально-клиническое изучение способа проведено на кафедре терапии и гематологии Киевского института усовершенствования врачей на 138 больных лейкозами: 40 больных с острым лейкозом, 40 больных хроническим миелолейкозом, 30 больных хроническим лимфолейкозом, 28 больных миеломной болезнью.

Данные сравнительного анализа между активностью комплемента сыворотки крови и характером течения лейкозного процесса представлены в таблице.

Целью изобретения является упрощение способа и расширение его функциональных возможностей. Поставленная цель достигается тем, что в сыворотке крови определяют литическую активность комплемента и при величине 41 - 60 литических единиц судят об обычном для данной нозологической формы лейкоза течении процесса, при уменьшении литической активности ниже 40 литических единиц прогнозируют риск возникновения инфекционных осложнений, а при повышении комплементарной активности выше 60 литических единиц прогнозируют злокачественное течение процесса. 1 табл.

Способ прогнозирования течения лейкоза путем иммунологического исследования крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови больного определяют литическую активность комплемента по отношению к сенсибилизированным эритроцитам барана и при значении этого показателя 41 60 литических единиц прогнозируют нормальное для данной нозологической формы лейкоза течение процесса, при значении ниже 40 единиц прогнозируют риск возникновения инфекционных осложнений, а при значении выше 60 единиц - злокачественное течение процесса.