СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕНИЙ ИММУНИТЕТА ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ БРОНХИТЕ Российский патент 1995 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической иммунологии, и может быть использовано для лабораторной диагностики нарушений иммунитета при хроническом бронхите.

В последние годы появилось много работ, свидетельствующих о частом развитии вторичной иммунологической недостаточности при хроническом бронхите, которая резко ухудшает течение и прогноз заболевания и значительно снижает эффективность лечения. Выявленные нарушения иммунитета касаются как числа и функциональной активности Т-лимфоцитов, так и количества и функциональной активности В-лимфоцитов.

Авторы находят многочисленные изменения в Т- и В-системах иммунитета. При этом в основном приводятся средние величины иммунологических показателей у тех и или иных категорий больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких. Имеется лишь незначительное число работ, в которых указывается частота выявления у этих больных нарушений иммунного статуса по отдельным иммунологическим показателям. Она колеблется от 20 до 40%
Используя иммунологические показатели 1 уровня, т.е. наиболее простые, которые могут быть применены практически в любом крупном стационаре, обследовано больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких (221 чел), в том числе больных хроническим бронхитом (150 чел), и выявлено снижение в крови количества Т- и В-лимфоцитов и дисбаланс иммуноглобулинов (см. табл. 1), что, по мнению автора, свидетельствует о наличии иммунодефицита при ХНЗЛ.

Автор, как видно из приведенных данных, выявила снижение средних величин изученных показателей иммунитета у больных ХНЗЛ, в том числе хроническим бронхитом по сравнению со здоровыми лицами. Однако в работе не приведены границы колебаний изученных показателей, что не дает возможности диагностировать индивидуальные нарушения иммунитета. В этих целях можно было бы использовать общепринятый метод вычисления доверительного интервала с использованием среднеквадратического отклонения (Х+1,65 или 2S). Такой подход правомерен в случаях, если показатели подчиняются закону нормального распределения. Однако многие иммунологические показатели не подчиняются этому закону, что может привести к значительным погрешностям при выявлении границ нормы. Между тем разработка количественных критериев, позволяющих диагностировать нарушения иммунитета у каждого конкретного больного, необходима, так как дает возможность осуществлять индивидуализированную иммунокоригирующую терапию. Помимо этого, в прототипе для выявления иммунологической недостаточности использовали лишь сдвиги отдельных иммунологических показателей и не определялись их соотношения, отражающие внутренние взаимосвязи между ними. Вычисление такого рода соотношений значительно повышает качество индивидуальной оценки состояния иммунного статуса.

Целью изобретения является упрощение способа диагностики нарушений иммунитета у больных хроническим бронхитом и повышение его точности для более широкого использования в клинической практике.

Поставленная цель достигается тем, что исследование состояния иммунитета ограничивают определением 2 двух иммунологических показателей: процента активных Т-лимфоцитов и процента В-лимфоцитов в периферической крови и при величине их соотношения более 5 диагностируют нарушения иммунитета. Провели иммунологические исследования 194 больных хроническим бронхитом и 44 здоровых людей того же пола и возраста в качестве контроля.

Исследование включало определение в периферической крови общего числа лимфоцитов; числа Т-лимфоцитов в тесте спонтанного розеткообразования с эритроцитами барабана по методу и соавторов в модификации Р.В.Петрова и А.Н. Чередеева числа В-лимфоцитов в тесте розеткообразования с зимозаном, нагруженным комплементом, по методу Мendes и соавт. в модификации Т.И.Гришиной и С. Мюллер; числа О-лимфоцитов, не имеющих маркеров Т-и В-лимфоцитов; иммуноглобулинов А, М, G по методу Мancini, что соответствовало перечню изученных показателей прототипа. Кроме того, в отличие от прототипа, определяли процент активных Т-лимфоцитов по методу Нonland и Нeron.

Средние значения изученных показателей представлены в табл.2.

Как видно из табл.2, результаты наших исследований в основном совпадают с данными прототипа (см.табл.1). Однако мы не ограничились вычислением средних показателей.

Учитывая, что многие биологические, в том числе и иммунологические показатели, не подчиняются закону нормального распределения, обоснованным является определение границ нормы не с помощью среднего квадратического отклонения от средних величин, а путем применения непараметрического метода характеристических интервалов.

Метод заключается в сравнении ранжированных рядов величин каждого показателя у здоровых и больных и выделении интервалов, характерных для больных, в которых встречаются только больные (специфичный интервал), или больные встречаются достоверно чаще, чем здоровые (относительно специфичный интервал). Одновременно могут быть выделены интервалы, характерные для здоровых, и неопределенные в диагностическом отношении интервалы, в которых доля больных и здоровых примерно одинакова. Достоверность различий в частотах (процентах) определяется по критерию t Стьюдента. Этот метод дает возможность более точно выявить границы нормы и патологии для каждого показателя и у каждого больного оценить наличие или отсутствие отклонений от нормы (см.табл.3).

Как видно из данных табл.3, мы выделили интервалы иммунологических показателей, характерные для больных.

Оказалось, что в характерный (специфический) для больных интервал числа В-лимфоцитов (меньше 5,5%) выделилось только 27,8±3,0% больных хроническим бронхитом (т. е. несколько более 1/4). В характерный для больных интервал процентного содержания Т-лимфоцитов (меньше 55%) попало лишь 20±3,0% больных (т. е. всего 1/5). По другим показателям (иммуноглобулины А, G, М, процент О-лимфоцитов) нарушения иммунитета можно было диагностировать еще реже всего у 13-15% больных хроническим бронхитом. Эти данные свидетельствуют об относительно низкой диагностической значимости каждого из изучаемых показателей, взятого в отдельности.

С целью повышения диагностической значимости иммунологических показателей, мы, в отличие от прототипа, дополнительно определяли процент активных Т-лимфоцитов. Отклонение от нормы этого показателя (больше 36,5% активных Т-лимфоцитов) наблюдалось у 49,0±3,5% больных хроническим бронхитом (т.е. у 1/2 больных) и только у 12±6,0% здоровых лиц (р<0,001). Далее, учитывая разнонаправленные изменения избранных нами показателей Т- и В-систем иммунитета у больных хроническим бронхитом (повышение процента активных Т-лимфоцитов и снижение процента В-лимфоцитов), мы пришли к выводу, что вычисление отношения этих показателей позволит еще более повысить их диагностическую значимость. Средняя величина отношения этих показателей у больных хроническим бронхитом существенно отличалась от данных конструкций группы (соответственно 6,45±0,21 и 3,22±0,19, р<0,001). Эти соображения могут быть подкреплены концепцией Р. В. Петрова и соавт. заключающийся в том, что все компоненты иммунной системы связаны между собой прямыми или опосредованными связями и в условиях патологии нарушается сбалансированность различных звеньев иммунитета. Исходя из этой концепции отношения иммунологических параметров должны более адекватно отражать нарушения иммунитета, чем отдельные его показатели (см. табл.4).

Из данных табл.4 видно, что величина отношения
превышающая 5, оказалась весьма характерной для больных хроническим бронхитом и встречается у 65,5% этих больных и только у 3% здоровых лиц (р<0,001).

Следовательно, диагностическая значимость этого отношения значительно выше, чем величины отдельных показателей, в частности даже такого информативного показателя, предложенного нами, как увеличение числа активных Т-лимфоцитов (более 36,5%), наблюдаемое у 49% больных. К тому же при вычислении отношения снижается средняя ошибка процента с 12% до 3% т.е. в 4 раза.

Как показал анализ прототипа и аналогов, способ диагностики нарушений иммунитета, включающий определение только 2 иммунологических показателей, отражающих состояние двух основных систем иммунитета Т- и В-иммунитета, с учетом их отношения до настоящего времени никем не применялся, т.е. является новым.

Существенным отличием предлагаемого способа от известного является повышение точности диагностики нарушений иммунитета при хроническом бронхите. Если известным способом (методом прототипа) нарушения иммунитета в наших исследованиях были диагностированы у 15-28% больных хроническим бронхитом, то заявляемым способом у 65,5%
Следовательно, распознавание нарушений иммунитета повысилось на 38-52% (см.табл.5).

Значительно большая точность диагностики нарушений иммунитета при хроническом бронхите позволяет своевременно назначать адекватную иммунокорригирующую терапию и, тем самым, ускорить и повысить клиническую эффективность лечения при самом распространенном хроническом неспецифическом заболевании легких хроническом бронхите. Преимущества предлагаемого способа заключаются еще и в том, что при его выполнении достаточно определять только 2 иммунологических показателя (вместо 7 отдельных показателей прототипа) и их соотношение, что значительно упрощает диагностику нарушений иммунитета у больных хроническим бронхитом, делает ее вполне доступной для большинства лабораторий пульмонологических и терапевтических стационаров. Приводим примеры применения заявляемого способа у больных хроническим бронхитом (по одному примеру на оптимальное и граничные значения соотношения избранных иммунологических показателей).

Наблюдение 1. Больной З. 53 лет, электросварщик, пылевой стаж 33 года. Поступил в клинику 26.V.83 г.

Жалобы на кашель со скудной мокротой, одышку при умеренной физической нагрузке, периодически чувство затрудненного выдоха, особенно при проведении электросварочных работ в закрытых помещениях. Кашель беспокоит несколько лет, затрудненный выдох появился год назад. При осмотре: нормостеник, избыточного питания. Легкий акроцианоз. Грудная клетка не расширена. Перкуторно легочный звук. Дыхание везикулярное с жестковатым оттенком, выдох слегка удлинен, хрипы не определяются, границы сердца в пределах нормы. Тоны несколько приглушены, чистые, ритмичные. Пульс 76 ударов в 1 мин. Артериальное давление 120/80 мм рт.ст. Органы брюшной полости без изменений.

Рентгеноскопия органов грудной клетки. Легочные поля удовлетворительной прозрачности. Корни расширены. Экскурсии диафрагмы средней амплитуды. Сердце расширено влево. Аорта уплотнена, пульсации ритмичные.

Рентгенография легких. Рисунок легких умеренно усилен. Сосуды деформированы. Очагов не выявлено. Корни широкие, плотные. Функциональные дыхательные пробы: ЖЕЛ 3600 (ДЖЕЛ 404 мл). ЖЕЛ/ДЖЕЛ 89% ОФВ₁ 88,2% Проба Тиффно 73,6%
Анализ мокроты не выделяет.

Анализ крови. Эритроциты 4,3˙10¹²/л. Гемоглобин 138 г/л. Лейкоциты 4,5˙10⁹/л. Лейкоцитарная формула: эозинофилы 4% палочкоядерные нейтрофилы 2% сегментоядерные нейтрофилы 60% моноциты 2% лимфоциты 32% СОЭ 5 мм/ч.

Анализ мочи без изменений. Иммунологические показатели: Т-активные лимфоциты 39% В-лимфоциты 7,5% Отношение 5,2.

Клинический диагноз. Хронический необструктивный бронхит вне обострения, без легочной недостаточности.

Таким образом, у больного с легкой формой пылевого бронхита без четких клинико-лабораторных признаков обострения заболевания определение отношения двух информативных показателей, характеризующих состояние Т- и В-систем иммунитета, выявило нарушения иммунного статуса, что диктует необходимость активного диспансерного наблюдения за пациентом с проведением лечебно-профилактических и оздоровительных мероприятий, включая иммуномодуляторы.

Наблюдение 2.

Больной К. 56 лет, электросварщик, пылевой стаж 32 года. Поступил в клинику 05.12.1984 г. Жалобы на кашель с мокротой, временами затрудненное дыхание, одышку при подъеме на 2-3 этаж, боли в грудной клетке. Кашель беспокоит много лет, последние 4 года самочувствие ухудшилось, появилась одышка и периодически чувство нехватки воздуха, особенно по утрам. При осмотре. Нормостеник, достаточного питания. Легкий акроцианоз. Перкуторно легочный звук с небольшим коробочным оттенком в нижних отделах. Дыхание жесткое, удлинен выдох, рассеянные сухие хрипы с обеих сторон. Границы сердца слегка расширены влево. Тоны приглушены, чистые, ритмичные. Пульс 72 удара в 1 мин. Артериальное давление 170/70 мм рт.ст. Живот мягкий. Печень не увеличена.

Рентгеноскопия органов дыхания. Легочные поля повышенной прозрачности. Корни расширены. Экскурсии диафрагмы небольшой амплитуды. Сердце расширено влево, аорта уплотнена, пульсации ритмичные. Рентгенография легких. Рисунок легких диффузно усилен. На фоне сетчатой петлистости сосуды плохо видны. Очагов не выявлено. Корни широкие, плотные.

Функциональные дыхательные пробы. ЖЕЛ 3500 мл (ДЖЕЛ 3524 мл) ЖЕЛ/ДЖЕЛ 99,3% ОФВ 83,1% Проба Тиффно 62,8%
Анализ мокроты. Характер слизистый. Спирали Куршмана имеются. Лейкоциты небольшое количество. Эозинофилы местами. Альвеолярные клетки небольшое количество. Туберкулезные микобактерии не найдены.

Анализ крови. Эритроциты 4,5˙10¹²/л. Гемоглобин 150 г/л. Лейкоциты 4,1˙10⁹/л. Лейкоцитарная формула: эозинофилы 3% палочкоядерные нейтрофилы 2% сегментоядерные нейтрофилы 56% моноциты 2% лимфоциты 37% СОЭ 6 мм/ч.

Сиаловая кислота 110 опт. ед. С-реактивный белок (-). Общий белок 7,8 г/л. Белковые фракции: альбумины 49% глобулины: α₁- 8,8% α₂- 10,5% β- 12,0% γ- 19,7% А/Г 0,9.

Анализ мочи без изменений.

Иммунологические показатели: Т активные лимфоциты 38% В-лимфоциты 3,5% Отношение 10,86.

Клинический диагноз: Хронический бронхит I-II стадии с легким астматическим синдромом. Легочная недостаточность по обструктивному типу I степени.

Таким образом, у больного с длительным пылевым стажем и с умеренно выраженными клиническими проявлениями хронического бронхита вычисление предлагаемого отношения иммунологических показателей позволило диагностировать четкие нарушения иммунитета, что послужило основанием к проведению комплексной иммунокорригирующей терапии.

Наблюдение 3.

Больной Ч. 50 лет, формовщик и плавильщик сталелитейного цеха, пылевой стаж 24 года. Поступил в клинику 15.IV. 87.

Жалобы на кашель с мокротой, одышку при умеренной физической нагрузке, ощущение затрудненного выдоха, непостоянного характера боль в грудной клетке, общую слабость, повышение температуры тела.

Больным себя считает более 10 лет, когда стал отмечать периодический сухой кашель. В последующем кашель приобрел постоянный характер и выделялась мокрота. Неоднократно обследовался и лечился в стационаре по поводу хронического необструктивного бронхита. Последний год самочувствие ухудшилось, появилась одышка, чувство затрудненного выдоха, периодически подъем температуры тела 37,2-37,4^оС).

При осмотре. Конституция приближается к гиперстенической, несколько избыточного питания. Расширены размеры грудной клетки. Акроцианоз. Перкуторно легочный звук с коробочным оттенком. Дыхание жесткое, удлинен выдох, диффузные в умеренном количестве сухие басовые и дискантовые хрипы, нарастающие в положении лежа. Границы сердца расширены на 1 см влево. Тоны умеренно приглушены, чистые, ритмичные, акцент II тона над аортой. Пульс 76 ударов в 1 мин. Артериальное давление 160/90 мм рт.ст.

Органы брюшной полости без изменений.

Рентгеноскопия органов грудной клетки. Легкие повышенной прозрачности. Экскурсии диафрагмы небольшой амплитуды. Сердце несколько увеличен левый желудочек. Аорта плотная, широкая.

Рентгенография легких. Рисунок легких усилен. Сосуды деформированы, контурируются. Очагов не выявлено. Корни широкие плотные.

Бронхоскопия. Слизистая трахеи и всех видимых отделов бронхов гиперемирована (инъекция сосудов), атрофирована. Рисунок хрящевых колец четко контурируется. В просвете бронхов слизистая вязкая мокрота. Заключение: Атрофический бронхит, фаза обострения.

Функциональные дыхательные пробы. ЖЕЛ 3800 мл (ДЖЕЛ 4969 мл), ЖЕЛ/ДЖЕЛ 76,4% Пневмотахометрия МС Вдоха 4,6 л/с, МС Выдоха 4,2 л/с.

Анализ мокроты. Характер слизистый, консистенция вязкая. Лейкоциты небольшое количество. Эпителий бронхов изредка. Эозинофилы местами. Альвеолярные клетки умеренное количество. Туберкулезные микобактерии не обнаружены.

Анализ крови. Эритроциты 4,9˙10¹²/л. Гемоглобин 160 г/л. Лейкоциты 8,10⁹/л. Лейкоцитарная формула: эозинофилы 3%0 палочкоядерные нейтрофилы 6% сегментоядерные нейтрофилы 63% моноциты 2% лимфоциты 26% СОЭ 13 мм/ч. Общий белок 7,0 г% Белковые фракции: альбумины 52,0% глобулины α₁- 6,3% α₂- 10,7% β- 12,3% γ- 18,7% А/Г=1,1.

Анализ мочи слабые следы белка, других изменений нет.

Иммунологические показатели: Т-активные лимфоциты 44,5% В-лимфоциты 2% отношение 22,29.

Клинический диагноз. Пылевой бронхит II стадии, легкий астматический синдром. Эмфизема легких I ст. Легочная недостаточность по смешанному типу I-II степени.

Итак, у больного пылевым бронхитом II стадии с тенденцией к прогрессированию заболевания в последние годы динамического наблюдения на фоне обострения обнаружено максимальное (в пределах изучаемого контингента больных хроническим бронхитом) увеличение отношения , что подтверждает нарушение иммунологической реактивности и диктует важность включения в лечебный комплекс мероприятий по нормализации иммунитета.

Использование: в медицине и может быть использовано для диагностики нарушений иммунитета при хроническом бронхите. Сущность изобретения: определяют процент активных Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов в периферической крови, вычисляют их отношение и при величине их соотношения более 5 диагностируют нарушения иммунитета. Способ позволяет повысить точность и ускорить диагностику заболевания. 5 табл.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕНИЙ ИММУНИТЕТА ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ БРОНХИТЕ, включающий определение количества В-лимфоцитов, отличающийся тем, что определяют количество активных Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов, выраженное в процентах, в периферической крови и при величине их соотношения более 5 диагностируют нарушения иммунитета.