Изобретение относится к медицине и может применяться в биохимии, гематологии, медицине и медицинской промышленности.
Известен способ получения дестабилазы из пиявки, взятый нами в качестве прототипа (1), включающий подготовку водных экстрактов медицинских пиявок, экстрагирование этилацетатом. В качестве сырья используют секрет слюнных желез пиявок, порошок лиофильно высушенных пиявок и экстракт из культуры бактерии-симбионта медицинских пиявок.
Однако данный способ имеет следующие недостатки: конечный продукт не является гомогенным препаратом, т. к. содержит в своем составе гирудин и ингибитор калликреина.
Целью предлагаемого изобретения является увеличение выхода конечного продукта и повышение его чистоты.
Поставленная цель достигается тем, что аффинную хроматографию проводят на антитела к 6-кето-прострагландин F1α, иммобилизированные на водонерастворимом носителе.
Приводим примеры осуществления способа.
Пример 1. Лиофилизированную антисыворотку к 6-кето-ПГ иммобилизовывали на бромцианактивированную агарозу. На колонку наносили 5 мл водного экстракта лиофильно высушенных пиявок (система рециклина в течение 2 часов). Промывали колонку дистиллированной водой. Элюировали целевой продукт буфером, содержащим 0,2 М глицина, 0,15 M HCl pH 3,0. Собранные фракции подщелачивали 0,1 H NaOH до pH 8,0. Объем элюата 8,5 мл (белок 0,03 мг/мл). Элюат диализовали против дистиллированной воды в течение 48 часов при 4oC через мембрану с порами размером 2000 Да, после чего лиофилизовали. Полученный препарат соответствует целевому продукту, обладает фибринолитической активностью, содержит простангландины и не обладает активностью гирудина и ингибитора калликреина плазмы крови. При электрофорезе проявляется в виде доминантной полосы, соответствующей белку с ММ 12,3 кДа (табл. 1).
Пример 2. Все продукты, как в п. 1, только в качестве сырья использовали секрет слюнных желез пиявок в количестве 5 мл, а элюирующего буфера - раствор уксусной кислоты с pH 4,0. Полученный препарат соответствует целевому продукту (табл. 2).
Пример 3. Все, как в примере 1, только в качестве сырья использовали водный экстракт культуры бактерии-симбиона медицинских пиявок, а элюирующего раствора - раствор уксусной кислоты с pH 3,5, содержащий 02 М глицина. Полученный препарат соответствует целевому продукту.
Пример 4. Все, как в примере 1, только в качестве элюирующего буфера использовали раствор уксусной кислоты с pH 5,0. Активность снижена на 80%. Полученный препарат не соответствует целевому продукту, т.к. полной элюции не произошло.
Методы определения.
1. Спектрофотометрический метод определения белка (2).
2. Активность гирудина определяли по удлинению тромбинового времени и выражали в международных ATNIH единицах. Активность ингибитора калликреина плазмы крови анализировали по удлинению времени рекальцификации плазмы и выражали в условных антипрокоагулянтных единицах (3).
3. Содержание простагландинов анализировали по прописи фирмы Amersham (США) с использованием радиоммунологического метода определения 6-кето- P6F1α,
4. Электрофорез проводили в системе Лемли в ПААГ в декотурирующих условиях.
5. Фибринолитическую активность определяли по размеру зон лицина на пластинах стабилизированного фибрина (3).
Предлагаемый способ позволяет получить конечный продукт с более высокой частотой и в большем объеме.
Источники информации
1. ДАН СССР, 1987, т. 292, N 6.
2. Кочетов Г. А. Практическое руководство по экзимологии. - М.: Высшая школа, 1971.
3. Кудряшов Б.А. Большой практикум по физиологии человека и животных. - М.: Высшая школа, 1984.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДЕСТАБИЛАЗНОГО КОМПЛЕКСА - ПРИРОДНОЙ ЛИПОСОМЫ, СИНТЕЗИРУЕМОЙ МЕДИЦИНСКОЙ ПИЯВКОЙ | 1998 |
|
RU2131736C1 |
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ КОМПЛЕКСА ДЕСТАБИЛАЗА - ПРОСТАГЛАНДИН ИЗ МЕДИЦИНСКОЙ ПИЯВКИ | 1995 |
|
RU2121846C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИРУДИНА ИЗ МЕДИЦИНСКИХ ПИЯВОК | 1995 |
|
RU2132195C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНГИБИТОРА КАЛЛИКРЕИНА ПЛАЗМЫ КРОВИ | 1992 |
|
RU2033174C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИПРОКОАГУЛЯНТНОГО ПРЕПАРАТА ИЗ МЕДИЦИНСКИХ ПИЯВОК | 1994 |
|
RU2101019C1 |
КРЕМ "БРАВО" ДЛЯ КОЖИ ЛИЦА | 1995 |
|
RU2122400C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОСТАГЛАНДИНОВ ИЗ МЕДИЦИНСКОЙ ПИЯВКИ | 1995 |
|
RU2113226C1 |
ИНГИБИТОРЫ ТРОМБИНА, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ | 1994 |
|
RU2138275C1 |
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТА ДЕСТАБИЛАЗЫ, ОБЛАДАЮЩЕГО ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОЙ, ТРОМБОЛИТИЧЕСКОЙ, ЭНДО- И ЭКЗО- ε(γ GLY)-LYS-ИЗОПЕПТИДАЗНОЙ И АМИДОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ | 1994 |
|
RU2112528C1 |
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНАЯ ДОБАВКА ДЛЯ КОСМЕТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ | 1994 |
|
RU2113843C1 |
Изобретение относится к медицине и может применяться в гематологии, биохимии и медицинской промышленности. Для осуществления способа проводят очистку обработанного сырья путем аффинной хроматографии на возвратных колонках на антитела 6-кето-простагландин Fα, иммобилизированные на водонерастворимом носителе. Технический результат - повышение объема выхода конечного продукта и его чистоты. 2 табл.
Способ выделения комплекса дестабилиза-простагландин из медицинской пиявки, включающий приготовление водного экстракта с последующей очисткой обработанного сырья, отличающийся тем, что очистку осуществляют аффинной хроматографией на антитела к 6-кето-простагландин Flα, иммобилизованные на водонерастворимом носителе.
Огнетушитель | 0 |
|
SU91A1 |
Баскова И.П | |||
и др | |||
Обнаружение простагландинов в препаратах из медицинских пиявок Hirudo medicinalis | |||
В: ДАН СССР, 1087, т.292, N 6, с.1492 и 1493. |
Авторы
Даты
1999-04-27—Публикация
1995-09-05—Подача