АНАЛОГИ ВИТАМИНА D, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ Российский патент 1999 года по МПК C07C401/00 A61K31/59 

Изобретение относится к соединениям формулы

где R представляет собой водород, гидроксигруппу или фтор, X обозначает H₂ или =CH₂ и 23,24-двойная связь имеет E- или Z-конфигурацию.

Соединения применимы в качестве средств для лечения гиперпролиферирующих кожных болезней, например псориаза; для лечения и профилактики опухолевых заболеваний, например лейкоза; для лечения и профилактики новообразований и для лечения заболеваний жировых желез, например угрей и себорейного дерматита.

Соединения формулы I проявляют высокую активность в стимуляции дифференцирования и снижении пролиферации кератиноцитов человека. Соответственно соединения применимы в качестве средств для лечения гиперпролиферирующих кожных болезней и нарушений, например псориаза, базально-клеточного рака, нарушенной кератинизации и кератоза. Соединения применимы также для профилактики и лечения опухолевых заболеваний, например лейкоза. Кроме того, соединения являются противоопухолевыми средствами, применимыми для лечения и профилактики новообразований, например рака молочной железы. Соединения формулы I применимы также для лечения заболевания жировых желез, например угрей и себорейного дерматита.

Изобретение относится также к фармацевтическим препаратам, содержащим эффективное количество соединения формулы I или эффективное количество смеси двух или более соединений формулы I, и, кроме того, к применению соединений формулы I для приготовления лекарственных средств, предназначенных для лечения и профилактики вышеназванных заболеваний.

Примеры соединений формулы I включают:
26,26,26,27,27,27-гексафтор-1 α, 25-дигидрокси-16,23E- диенхолекальциферол;
26,26,26,27,27,27-гексафтор-25-гидрокси-16,23E-диенхолекальциферол;
26,26,26,27,27,27-гексафтор-1 α- фтор-25-гидрокси-16,23E- диенхолекальциферол;
26,26,26,27,27,27-гексафтор-1 α, 25-дигидрокси-16,23E-диен-19- норхолекальциферол;
26,26,26,27,27,27-гeкcaфтop-1 α, 25-дигидpoкcи-16,23Z- диeнxoлeкaльциферол;
26,26,26,27,27,27-гeкcaфтop-25-гидpoкcи-16,23Z-диeнxoлeкaльцифepoл;
26,26,26,27,27,27-гексафтор-1 α- фтор-25-гидрокси-16,23Z- диенхолекальциферол;
26,26,26,27,27,27-гeкcaфтоp-1 α, 25-дигидpoкcи-16,23Z-диeн-19- норхолекальциферол.

В соединении формулы I рекомендуемое значение R-гидроксигруппа или фтор.

Рекомендуемые соединения формулы I включают:
26,26,26,27,27,27-гексафтор-1 α, 25-дигидрокси-16,23- диенхолекальциферол;
26,26,26,27,27,27-гексафтор-1 α- фтор-25-гидрокси-16,23E- диенхолекальциферол и
26,26,26,27,27,27-гексафтор-1 α, 25-дигидрокси-16,23E-диен-19- норхолекальциферол.

Соединения формулы I получают нижеприведенным способом согласно нижеследующей схеме реакции удалением силильных защитных групп в соответствующих соединениях с защищенными силилами гидроксигруппами.

Согласно схеме I реакции соединение формулы II (известное соединение) в реакции с восстановителем, например литийалюминийгидридом в присутствии основания, например метоксида натрия, превращают в транс-аналог соединения формулы III. Реакцию проводят в простом эфире в качестве растворителя, например тетрагидрофуране, при от примерно 0^oC до примерно 100^oC. Соединение формулы II превращают в цис-аналог соединения формулы III гидрированием в присутствии катализатора Линдлара (Lindlar) с применением в качестве растворителя смеси этилацетата, гексана и этанола.

Цис- или транс-аналог соединения формулы III вводят в реакцию с хлорхроматом пиридиния с применением в качестве растворителя хлорированного углеводорода, например хлористого метилена, при комнатной температуре с получением соответственно цис- или транс-аналога соединения формулы IV.

Проводят реакцию транс-аналога соединения формулы IV с н-бутиллитием и соединением формулы V или VI при температуре -75^oC в смеси гексана и тетрагидрофурана с получением транс-производного соединения формулы Iа после удаления силильной защитной группы обработкой тетрабутиламмонийфторидом в тетрагидрофуране в качестве растворителя.

Согласно схеме II реакции соединение формулы IV, в котором 23,24-двойная связь имеет либо E-, либо Z-конфигурацию, вводят в реакцию с триметилсилилимидазолом в хлористом метилене при комнатной температуре с образованием соединения формулы VII, в котором 23,24- двойная связь имеет соответственно E- или Z-конфигурацию.

Реакцией цис- или транс-производного соединения формулы VII с н-бутиллитием и соединением формулы VIII (известное соединение) при температуре -75^oC в смеси гексана с тетрагидрофураном в качестве растворителя получают цис- или транс-соединение формулы Ic или Id соответственно после удаления силильной защитной группы обработкой тетрабутиламмонийфторидом в тетрагидрофуране в качестве растворителя.

Согласно схеме III реакции при температуре -75^oC в смеси гексана с тетрагидрофураном в качестве растворителя проводят реакцию соединения формулы VII с н-бутиллитием и соединением формулы V и после удаления силильных защитных групп получают соединение формулы Ie или If (цис-аналог соответственно соединения формулы Ia или Ib). Защитные группы удаляют обработкой тетрабутиламмонийфторидом в тетрагидрофуране в качестве растворителя.

Соединения формулы I, охарактеризованные выше, могут быть введены перорально для лечения опухолевых заболеваний, например лейкоза, и для лечения новообразований, например рака молочной железы, цервикального рака и меланомы у нуждающегося в таком лечении хозяина. Более конкретно вышеохарактеризованные соединения формулы I могут быть введены человеку перорально в дозировочном интервале 0,1-100 мкг в день при лечении опухолевых заболеваний, например лейкоза, и при лечении новообразований, например рака молочной железы, цервикального рака и меланомы.

Вышеохарактеризованные соединения формулы I могут быть введены перорально в эффективном количестве для лечения гиперпролиферирующих кожных болезней, например псориаза, базально-клеточного рака, нарушенной кератинизации и кератиноза, у нуждающегося в таком лечении хозяина. Вышеохарактеризованные соединения формулы I рекомендуется вводить человеку перорально в дозировочном интервале 0,001-100 мкг в день при лечении гиперпролиферирующих кожных болезней, например псориаза, базально-клеточного рака, нарушенной кератинизации и кератоза.

Вышеохарактеризованные соединения формулы I могут быть введены в эффективном количестве местно для лечения гиперпролиферирующих кожных болезней, например псориаза, базально-клеточного рака, нарушенной кератинизации и кератоза у нуждающегося в таком лечении хозяина. Вышеохарактеризованные соединения формулы I рекомендуется вводить человеку местно в интервале дозировок 0,01-100 мкг на грамм препарата для нанесения местно в день при лечении гиперпролиферирующих кожных болезней, например псориаза, базально- клеточного рака, нарушенной кератинизации и кератоза.

Вышеохарактеризованные соединения формулы I могут быть введены в эффективном количестве местно при лечении заболеваний жировых желез, например угрей и себорейного дерматита, у нуждающегося в таком лечении хозяина. Вышеохарактеризованные соединения формулы I рекомендуется наносить человеку местно в интервале дозировок 0,1-1000 мкг на грамм препарата для нанесения местно в день при лечении заболеваний жировых желез, например угрей и себорейного дерматита.

Вышеохарактеризованные соединения формулы I могут быть введены в эффективном количестве перорально для лечения заболеваний жировых желез, например угрей и себорейного дерматита, у нуждающегося в таком лечении хозяина. Вышеохарактеризованные соединения формулы I рекомендуется вводить человеку перорально в интервале дозировок 0,07- 770 мкг в день, более предпочтительно в интервале 0,7-70 мкг в день при лечении заболеваний жировых желез, например угрей.

Полезная активность соединений формулы I в качестве средств лечения новообразований, в частности рака молочной железы, может быть показана использованием следующей известной специалистам методики испытаний.

МТТ Анализ на основе тетразолия: Клетки T47-O (карциномы протоков молочной железы) выращивают в среде RPM1-1640 с добавкой 10 мкг/мл бычьего инсулина и 10% сыворотки плода коровы (СПК).

Клетки MCF-7 (аденокарциномы молочной железы) выращивают в MEM среде (Игл) с добавкой неэссенциальных аминокислот, 1 мМ пирувата натрия, 10 мкг/мл бычьего инсулина 10% СПК.

Клетки выращивают в соответствующей среде до поздней лог-фазы (около 80% конфлуэнтности). Затем клетки T47-O или MCF-7 трипсинизируют и высевают в концентрации соответственно 4000 или 2000 клеток/лунку.

Через 24 часа после высева готовят последовательные разбавления в тех же средах этанольных растворов лекарственного средства, которые добавляют тремя повторами в лунки в конечной концентрации 1000-0,1 нМ и 0,1% этанола. В дни 3-7 после добавления лекарственного средства в каждую лунку вносят 50 мкл МТТ раствора [3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолийбромид в фосфатном буферном солевом растворе] в концентрации 5 мг/мл и инкубируют 2,5 часа при 37^oC. Затем планшеты вращают 5 минут в центрифуге при 800 хо, среду отсасывают из лунки и для растворения формазана, образовавшегося в ходе инкубирования, добавляют 50 мкл ЕТОН. После встряхивания в течение 15 минут в автоматическом планшет-ридере при 570 и 660 нм для каждой лунки определяют оптическую плотность. Процент ингибирования роста клеток подсчитывают сравнением оптической плотности клеток, обработанных испытуемыми соединениями, с оптической плотностью клеток, обработанных только 0,1% этанола. Значения ИК₅₀ рассчитывают по формуле Reed, Muench (Am. J.-Hyg. 27, 493-497, 1938), и полученные результаты двух независимых опытов представлены в таблице I.

Приведенные данные показывают антипролиферативную активность испытуемых соединений на клеточных линиях рака молочной железы человека.

Полезная активность соединений формулы I в качестве средств лечения гиперпролиферативных кожных заболеваний может быть показана следующей известной специалистам испытаний, изложенной также в работе: Holick et al., The Society for Investigative Dermatology, стр. 708-714 (1986).

Анализ антипролиферативной активности против человеческих кератиноцитов.

Клетки: Первичные или после I пересева субконфлюентные культуры человеческих неонатальных кератиноцитов выращивают в среде выращивания керотиноцитов^® (KCM^® , модифицированная MCDB 153, Clonetics, Inc., каталожный N CC3001) с добавкой при необходимости хлорида кальция или антибиотиков. Культуры получены применением стандартных методик из неонатальных эпителиальных кератиноцитов крайней плоти.

Условия культивирования: Человеческую неонатальную крайнюю плоть получают иссечением и помещают в пробирки, содержащие минимальную эссенциальную среду Дульбеко (DMEM) с 10% сыворотки. По прибытии в лабораторию из образцов механически удаляют избыток дермы и обрабатывают раствором трипсина-этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТК) (0,05%:0,02%) выдерживанием примерно сутки при 4^oC. Эпидермий отделяют от дермы, перемешивают в буферном солевом растворе с удалением базальных кератиноцитов и последующим удалением роговидного слоя. Отдельные клетки центрифугируют, вновь суспендируют в среде, подсчитывают и клетки наносят на пластиковые подносы для культивирования или планшеты в количестве 2500 клеток/см² в KCM среде по методике, разработанной Boyce и Ham, In Vitro Models for Cancer Research III, 246-274, (1986) для среды MCDB 153. Культуры инкубируют в увлажненных камерах с 5% CO₂ при 37^oC с подачей свежей среды 2-3 раза в неделю. Перед достижением конфлюэнтности клетки переносят (так называемый пересев I) в количестве 25000 клеток/лунку на многолуночный планшет с 6 лунками в KCM.

Методика антипролиферационного анализа: Примерно через двадцать четыре часа после пересева к клеткам добавляют KCM среду в 1,5 мМ растворе CaCl₂, содержащем испытуемое соединение или носитель. Растворы испытуемых соединений готовят следующим образом. Соединения в количестве 1 миллиграмм хранят в непрозрачных сосудиках при -20^oC. Непосредственно в сосудики добавляют 100%-ный этанол в количестве, достаточном для получения милимолярного раствора, который затем аликвотами переносят в небольшие непрозрачные сосудики и хранят при -20^oC под слоем аргона. Каждый общий раствор оттаивают один раз, используют и отбрасывают. Общие растворы используют в пределах 4-6 недель. Аликвоты из общего разбавляют непосредственно средой и затем последовательно разбавляют от микромолярной до пикомолярной концентрации. Соединения, как правило, испытывают при четырех концентрациях в трех повторяющихся лунках. В контрольные лунки вносят только носитель в самой высокой концентрации, например в 0,1% этанола. К концу опыта перед достижением клетками конфлюэнтности клетки подсчитывают по следующей методике. Планшеты промывают фосфатным буферным солевым раствором и затем инкубируют 30 минут с раствором трипсина-ЭДТК. Клетки суспендируют, аликвоты переносят в изотонический буферный солевой раствор и подсчитывают с помощью электротонического счетчика частиц. Счетчик периодически калибруют с поправкой на точный размер кератиноцитов. Подсчет для каждой лунки повторяют трижды. Число клеток на планшет подсчитывают с учетом используемых факторов разбавления и результаты выражают в виде процента ингибирования от числа клеток, полученных в контрольных культурах. Полученные результаты представлены в таблице II.

Полезная активность соединений формулы I в качестве средств лечения опухолевых заболеваний, например лейкоза, показана в следующем испытании.

Анализ дифференциации HL-60: Клеточная линия HL-60 опухоли, первоначальным источником которой послужил больной промилеоцитарным лейкозом, получена из Американской коллекции типовых культур (ATCC CCL240). Клетки содержат в виде суспензии с применением среды RPMI 1640 (Gibco, каталожный N 320-1875) с добавками глютамина, антибиотиков и 20% дезактивированной нагреванием сыворотки плода коровы (СПК). В опытах клетки высевают в количестве 0,9•10⁶ клеток на колбу объемом 25 см³ в среде с добавкой 0,25 мМ аскорбата натрия. Соединения добавляют на целых четыре дня и обычно испытывают при пяти концентрациях в двух дублированных колбах. Все соединения подготавливают следующим образом. Общие растворы получают в виде 10^-3 М растворов в этаноле, которые хранят при -20^oC в непрозрачных сосудиках под слоем аргона. Общие растворы разбавляют средой до указанной концентрации. Во все колбы добавляют носитель в концентрации 0,1% этанола. В контрольные колбы загружают только один носитель в концентрации 0,1% этанола. Колбы инкубируют в вертикальном положении 4 дня при 37^oC в 5% CO₂. На 4-ый день из колб отбирают аликвоты в 1 мл клеток, центрифугируют 10 минут, среду удаляют и клетки вновь суспендируют в растворе нитроголубого тетразолия/форбол-12-миристат-13-ацетата (NBT/TPA) в среде, приготовленной в день подсчета клеток следующим образом. Нитроголубой тетразолий растворяют в среде в концентрации 1 мг/мл. К полученному раствору добавляют ТРА до конечной концентрации 100 нг/мл. Раствор хранят на льду в закрытом сосуде. Клетки суспедируют и инкубируют 30 мин при 37^oC перенесением на лед. Отбирают аликвоты и клетки подсчитывают с помощью гемоцитометра. Клетки без окрашенных гранул считают недифференцированными, а клетки, содержащие голубые с переходом к черному гранулы формазана (указывают на превращение NBT), считают дифференцированными. Результаты выражают в виде процента дифференцированных клеток подсчетом отношения числа темных клеток к общему числу подсчитанных клеток. Полученные результаты представлены в таблице III.

Полезная активность соединений формулы I в качестве средств лечения заболеваний жировых желез, например угрей и себорейного дерматита, может быть показана в испытании, проведенном по следующей методике.

Жировые клетки выделяют из жировых желез взрослого человека, полученных из кожи лица, удаленной в ходе косметической операции. Методика описана в статье Doran и др., J. Invest. Dermatol., 96,341-348 (1991). Клетки культивируют в среде, содержащей 10% плодной сыворотки теленка и 4 мкг/мл дексаметазона, на слое ЗТЗ мышиных фибробластов с прекращенным ростом.

Клетки наносят на пластины без испытуемого соединения, которое добавляют в свежей среде через 24-48 часов после нанесения. К культурам каждые 48 часов добавляют свежую среду, содержащую испытуемое соединение. В день сбора культуры ополаскивают 0,03% раствором этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТК) в фосфатном солевом растворе (ФБС) с удалением только ЗТЗ фибробластов. Оставшиеся колонии жировых клеток инкубируют в 0,05% трипсина/0,03% ЭТДК с получением моноклеточной суспензии жировых клеток. Клетки разбавляют, интенсивно перемешивают для сохранения моноклеточной суспензии и подсчитывают в гемоцитометре.

Все соединения подготавливают следующим образом. Исходные растворы приготовляют в виде 10^-2 М растворов в дегазированном 100%-ном этаноле, который хранят в темноте при -20^oC. Растворы ни в коем случае не используют после хранения более месяца. В ходе экспериментов растворы, разделенные на аликвоты, оттаивают только однажды и применяют разбавлением непосредственно в полной среде до соответствующей концентрации.

Соединения испытывают на ингибирование пролиферации жировых клеток in vitro в следующих концентрациях: 10^-9, 10^-8, 10^-7 и 10^-6 М. Результаты суммированы в нижеследующей таблице IV в виде количества соединения, необходимого для ингибирования пролиферации жировых клеток на 50% (ЭД₅₀) в мкМ в сравнении с контрольной культурой, обработанной только носителем.

Таблица IV
Соединение - ЭД₅₀ (мкМ)
1,25-дигидроксихолекальциферол - 0,05
1 α,25-дигидрокси-16,23E-диен-26,27-гексафторхолекальциферол - <0,001
Пероральные дозированные формы, содержащие соединения формулы I изобретения, могут иметь вид капсул, таблеток и т.п., содержащих также фармацевтически приемлемый носитель. Примеры фармацевтически приемлемых носителей, которые могут быть использованы в капсулах и т.п., включают связующие вещества, например трагакантовую камедь, камедь акации, зерновой крахмал или желатин; наполнители, например дикальцийфосфат; размельчители, например зерновой крахмал, картофельный крахмал, альгеновую кислоту и т.п.; смазки, например стеарат магния; подслащивающие вещества, например сахарозу, лактозу или сахарин; ароматизаторы, например перечную мяту, вентергреновое масло или масло из вишневых косточек. В качестве покрытий или для изменения каким-то образом физической формы дозированной единицы могут быть использованы и разнообразные другие вещества. К примеру, на таблетки может быть нанесено покрытие из шеллака, сахара или того и другого. Сироп или эликсир может содержать активное соединение, сахарозу в качестве подслащивающего средства, метил- и пропилпарабены в качестве консервантов, краситель и ароматизатор, например апельсиновый или вишневый корригент.

Дозированные формы для нанесения местно, содержащие соединения формулы I, включают препараты в виде мазей и кремов, имеющих масляную, адсорбирующую, водорастворимую и эмульсионного типа основу, например вазелин, ланолин, полиэтиленгликоли и т.п. Лосьоны представляют собой жидкие препараты, варьирующиеся от простых растворов до водных или водно-спиртовых препаратов, содержащих мелко измельченные вещества. Лосьоны могут содержать суспендирующие или диспергирующие средства, например производные целлюлозы, такие как этилцеллюлоза, метилцеллюлоза и т. п.; желатин или камеди, с помощью которых активный компонент вводится в носитель, приготовленный из воды, спирта, глицерина и т.п. Гели представляют собой полутвердые препараты, приготовленные желатинизацией раствора или суспензии активного компонента в носителе-наполнителе. Наполнители, которые могут быть водными или безводными, превращают в гель применением желатинизирующего средства, например карбоксиполиметилена, и нейтрализуют до соответствующей консистенции геля с помощью щелочей, например гидроксида натрия и аминов, как полиэтилен (радикал кислоты кокосового масла) амин. В применяемом здесь значении термин "местно" относится к применению активного компонента, введенного в приемлемый фармацевтический носитель и нанесенный на воспаленный участок для оказания местного действия. Соответственно, препараты для применения местно включают те фармацевтические формы, в которых соединение наносится снаружи с непосредственным контактом с кожей. Дозированные формы для нанесения местно включают гели, кремы, лосьоны, мази, порошки, аэрозоли и другие обычные формы для осуществления медикации кожи, полученные смешиванием соединений формулы I с известными фармацевтическими местными носителями. Помимо нанесения на кожу местные препараты настоящего изобретения могут также применяться для лечения воспалений слизистых оболочек в тех случаях, когда такие оболочки доступны для проведения медикации местно. Например, местные препараты могут быть нанесены на слизистую выстилку рта или нижней ободочной кишки.

Пример 1. [3aR-[1(R^*,3а α, 4 β, 7a β ]]-3,3а,5,6,7,7а- Гексагидро-7а-метил-1-[6,6,6-трифтор-5-гидрокси-1-метил-5-(трифторметил)-3E-гексенил] -4H-инден-4-ол.

В колбу загружают 148 мг литийалюминийгидрида и 6 мл безводного тетрагидрофурана. К перемешиваемой суспензии под аргоном добавляют 211 мг метоксида натрия. Полученную смесь охлаждают в бане со льдом до 0^oC, после чего по каплям прибавляют раствор 300 мг
[3aR-[1(R^*), 3а α, 4 β, 7а β ]]-3,3а,5,6,7,7а-гексагидро- 7а-метил-1-[6,6,6-трифтор-5-гидрокси-1-метил-5-(трифторметил)-3E-гексинил] -4H-инден-4-ола в 10 мл тетрагидрофурана. По окончании прибавления реакционную смесь перемешивают 2 и 3/4 часа с последующим перемешиванием в течение ночи при комнатной температуре. После добавления 5 мл эфира реакционную смесь охлаждают в бане со льдом и гидролизуют добавлением 0,5 мл воды и 0,5 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия. После окончания до комнатной температуры добавляют кристаллические сульфат натрия и сульфат магния, реакционную смесь фильтруют и осадок на фильтре промывают этилацетатом. Объединенные фильтраты испаряют досуха. Сырой продукт очищают быстрой хроматографией на колонке силикагеля с применением смеси гексан-этилацетат (3:1). Очисткой получают 275 мг заглавного соединения. ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 0,98 (д, J=6 Гц, 3H), 0,99 (с, 3H), 4,17 (с, 1H), 5,33 (ш.с, 1H), 5,57 (д, J=16 Гц, 1H), 6,22 (дт, J=7 и 16 Гц, 1H).

Пример 2. [3аR-[1(R^*), 3а α, 7а β ]]-3,3а,5,6,7,7а- Гексагидро-7а-метил-1-[6,6,6-трифтор-5-гидрокси-1-метил-5-(трифторметил)- 3E-гексенил]-4H-инден-4-он.

К раствору из 267 мг [3aR-[1(R^*),3a α, 4 β, 7a β ]]-3,3a,5,6,7,7a- гексагидро-7а-метил-1-[6,6,6-трифтор-5-гидрокси-1-метил-5-(трифторметил)-3E-гексенил] -4H-инден-4-ола в 8 мл хлористого метилена добавляют 830 мг дихромата пиридиния и 42 мг п-толуолсульфоната пиридиния. Смесь перемешивают 2 часа, затем дополнительно добавляют 260 мг дихромата пиридиния и 13 мг п-толуолсульфоната пиридиния и реакционную смесь перемешивают еще 1 и 1/2 часа. По окончании указанного периода добавляют 20 мл эфира, смесь перемешивают 20 минут, фильтруют и осадок на фильтре промывают эфиром. Объединенные фильтраты промывают 40 мл охлажденной на льду 1н. HCl, водой, 50 мл 2н. KHCO₃ и водным рассолом. Водные слои вновь промывают смесью эфир-этилацетат (1: 1). Органические слои сушат и испаряют. Очисткой сырого продукта быстрой хроматографией на силикагеле с элюированием смесью гексан-этилацетат (3:1) получают 233 мг заглавного соединения. ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 0,8 (с, 3H), 1,08 (д, J= 6 Гц, 3H), 2,84 (дд, J=6 и 11 Гц, 1H), 5,32 (ш.с, 1H), 5,58 (д, J=16 Гц, 1H), 6,22 (дт, J=7 и 16 Гц, 1H).

Пример 3. [3аR-[1(R^*),3а α, 7а β]]- 3,3а,5,6,7,7а-Гексагидро-7а-метил-1-[6,6,6-трифтор-5- триметилсилилокси-1-метил-5- (трифторметил)-3E-гексенил] -4H-инден- 4-он.

К раствору 426 мг [3aR-[1(R^*), 3а α, 7а β ]] -3,3а,5,6,7,7а-Гексагидро- 7а-метил-1-[6,6,6-трифтор-5-гидрокси-1-метил-5-(трифторметил)-3E- гексенил] -4H-инден-4-она в 8 мл безводного хлористого метилена добавляют 1,2 мл триметилсилилимидазола. Раствор перемешивают 17 часов под аргоном, затем добавляют 5 мл воды, перемешивают 20 минут и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водным рассолом, сушат и испаряют досуха. Очисткой сырого продукта быстрой хроматографией на силикагеле с элюированием смесью гексан-этилацетат (12:1) получают 462 мг заглавного соединения.

Пример 4. 1,25-Дигидрокси-16,23E-диен-26,27-гексафторхолекальциферол.

Раствор 2,04 г оксида [3S-(3 α, 5 β Z)]-2-[2-[2-метилен-3,5- бис[[(1,1-диметилэтил)диметилсилил]окси]циклогексилиден]этил]- дифенилфосфина в 20 мл безводного тетрагидрофурана охлаждают в бане с сухим льдом до -78^oC, после чего по каплям под аргоном прибавляют 2,19 мл н-бутиллития в виде 1,6 М раствора в гексане. После перемешивания 5 минут по каплям прибавляют 540 мг [3aR-[1(R^*), 3а α, 7а β ]]-3,3а,5,6,7,7а-гексагидро-7а-метил-1-[6,6,6-трифтор-5- гидрокси-1-метил-5-(трифторметил)-3E-гексенил]-4H-инден-4-она в 7 мл тетрагидрофурана и реакционную смесь перемешивают два часа. После добавления 15 мл смеси 2н. соли Рачелла и 2н. KHCO₃ (1:1) реакционную смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры. После добавления еще 30 мл смеси соль Рачелла/KHCO₃ реакционную смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают рассолом, сушат и испарением досуха получают 2,4 г сырого продукта, очисткой которого быстрой хроматографией на силикагеле с элюированием смесью гексан-этилацетат (8:1) получают 410 мг промежуточного 1,3-дисилилоксипроизводного. К раствору промежуточного соединения в 5 мл безводного тетрагидрофурана под аргоном добавляют 4,5 мл 1 н. тетрабутиламмонийфторида в тетрагидрофуране и перемешивают 18 часов при комнатной температуре. После добавления еще 2,5 мл тетрабутиламмонийфторида перемешивание продолжают 22 часа. Добавляют 5 мл воды, перемешивают 20 минут, добавляют 25 мл рассола и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой-рассолом, сушат и испаряют досуха. Очисткой сырого продукта быстрой хроматографией на силикагеле с элюированием смесью гексан-этилацетат (1:3) получают в виде белой пены 270 мг заглавного соединения. [α]25D

+24^o (с = 0,2%, ЕТОН); УФ λ_max (ЕТОН): 204 нм (Σ 18200), 262-263 нм (Σ 15900); ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 0,68 (с, 3H), 1,04 (д, J = 6,5 Гц, 3H), 2,61 (дд, J = 3 и 13 Гц, 1H), 2,83 (дд, J = 4,5 и 12 Гц, 1H), 4,24 (ш.с, 1H), 4,45 (ш.с, 1H), 5,02 (с, 1H), 5,34 (ш.с, 2H), 5,58 (д, J = 15,5 Гц, 1H), 6,11 (д, J = 11,5 Гц, 1H), 6,23 (дт, J = 7 и 15,5 Гц, 1H), 6,37 (д, J = 11,5 Гц, 1H).

Анализ: выч. для C₂₇H₃₄F₆O₃: C 62,3, H 6,58; найдено: C 62,55, H 6,7.

Пример 5. 25-Гидрокси-16,23E-диен-26,27-гексафторхолекальциферол.

Заглавное соединение может быть синтезировано по методике, приведенной в примере 4, при использовании в качестве предшественника A-цикла оксида [3S-(3 α, 5 β, Z)]-2-[2-[2-метилен-5-[[(1,1- диметилэтил)диметилсилил]окси] циклогексилиден] этил] -дифенилфосфина вместо оксида [3S-(3 α, 5 β, Z)]-2-[2-[2-метилен-3,5-бис[[(1,1- диметилэтил)диметилсилил]окси]циклогексилиден] этил]- дифенилфосфина.

Пример 6. 1 α- Фтор-25-гидрокси-16,23E-диен-26,27- гексафторхолекальциферол.

Раствор 490 мг оксида [3S-(3 α, 5 β, Z)]-2-[2-[2-метилен-3-фтор-5- [[(1,1-диметилэтил)диметилсилил] окси]циклогексилиден]этил]-дифенилфосфина в 6 мл безводного тетрагидрофурана охлаждают в бане с сухим льдом до -78^oC, после чего по каплям добавляют под аргоном 0,65 мл н-бутиллития в виде 1,6 М раствора в гексане под током аргона. После перемешивания в течение 5 минут по каплям прибавляют раствор 290 мг [3aR-[1(R^*), 3а α, 7а β ]]-3,3а, 5,6,7,7а-гексагидро-7а-метил-1- [6,6,6-трифтор-5-триметилсилилокси-1-метил-5-(трифторметил)-3E-гексенил] - 4H-инден-4-она в 4,5 мл безводного тетрагидрофурана. Реакционную смесь перемешивают 1 час и 50 минут при -78^oC и затем нейтрализуют добавлением 10 мл смеси (1:1) 2 н. раствора соли Рачелла и 2 н. раствора KHCO₃. После постепенного подъема температуры до комнатной добавляют еще 3 мл смеси соль Рачелла/KHCO₃ и смесь экстрагируют этилацетатом. Органические слои промывают рассолом, сушат и испаряют досуха. Очисткой сырого продукта быстрой хроматографией на силикагеле с элюированием смесью гексан/этилацетат (20:1) получают 260 мг аморфного промежуточного дисилилпроизводного. К раствору 260 мг промежуточного дисилилпроизводного в 4 мл безводного тетрагидрофурана добавляют под аргоном 3,5 мл 1 М раствора тетрабутиламмонийфторида в тетрагидрофуране. Полученный раствор перемешивают 23 часа. После добавления 5 мл воды и перемешивания 20 минут добавляют 25 мл рассола и экстрагируют этилацетатом. Органические слои промывают водой/рассолом, сушат и испаряют досуха. Очисткой сырого продукта быстрой хроматографией на силикагеле с элюированием смесью гексан/этилацетат (2:1) и ЖХВД на колонке с силикагелем с элюированием смесью гексан/этилацетат (3:2) получают 140 мг аморфного соединения, указанного в заголовке. [α]25D

+22^o (с = 0,2, ЕТОН); УФ (ЕТОН) λ_max 241 нм (Σ 13600), 267-268 нм (Σ 13350); ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 0,69 (с, 3H), 1,04 (д, J = 6,5 Гц, 3H), 2,63 (дд, J = 3 и 13,5 Гц, 1H), 4,23 (ш.с, 1H), 5,12 (с, 1H), 5,16 (ддд, J = 50,5 и 7 Гц, 1H), 5,34 (с, 1H), 5,41 (с, 1H), 5,58 (д, J = 15,5 Гц, 1H), 6,12 (д, J = 11,5 Гц, 1H), 6,23 (дт, J = 15,5 и 7 Гц, 1H), 6,4 (д, J = 11,5 Гц, 1H).

Анализ: выч. для C₂₇H₃₃F₇O₂: C 62,06, H 6,37; найдено: C 61,59, H 5,89.

Пример 7. 1,25-Дигидрокси-16,23E-диен-26,27-гексафтор-19- норхолекальциферол.

Раствор 854 мг оксида [3R-(3 α, 5 β, Z)]-3,5- бис[[(1,1-диметилэтил)диметилсилил] окси] циклогексилиден] этил] дифенилфосфина в 9 мл безводного тетрагидрофурана охлаждают в бане с сухим льдом до -78^oC, после чего по каплям прибавляют под аргоном 0,937 мл н-бутиллития в виде 1,6 М раствора в гексане. После перемешивания 5 минут к реакционной смеси по каплям в течение 10 минут прибавляют раствор 414 мг [3аR-[1(R^*),3а α, 7а β ]]-3,3а,5,6,7,7а- гексагидро-7а-метил-1-[6,6,6-трифтор-5-триметилсилилокси-1-метил-5- (трифторметил)-3E-гексенил]-4H-инден-4-она в 5 мл безводного тетрагидрофурана. Реакционную смесь перемешивают один час и 45 минут при -78^oC, нейтрализуют добавлением 15 мл смеси (1:1) 2 н. раствора соли Рачелла и 2 н. раствора KHCO₃, после чего оставляют нагреваться до комнатной температуры. Добавляют еще 30 мл смеси соль Рачелла/KHCO₃ и экстрагируют этилацетатом. Органические слои промывают рассолом, сушат и испаряют досуха. Очисткой сырого продукта быстрой хроматографией на силикагеле с элюированием смесью гексан- этилацетат (1:3) получают 430 мг промежуточного трисилилпроизводного. К раствору полученного промежуточного соединения в 4,5 мл безводного тетрагидрофурана добавляют под аргоном 4,5 мл 1 М раствора тетрабутиламмонийфторида в безводном тетрагидрофуране. После перемешивания 24 часа добавляют еще 2,5 мл раствора тетрабутиламмонийфторида, реакционную смесь перемешивают 23 часа, добавляют 5 мл воды, перемешивают 20 минут, добавляют 25 мл рассола и экстрагируют этилацетатом. Органические слои промывают водным рассолом, сушат и испаряют досуха. Очисткой сырого продукта быстрой хроматографией на силикагеле с элюированием смесью гексан-этилацетат (1:4) и ЖХВД на колонке с силикагелем кремния с элюированием смесью гексан-этилацетат (1:8) получают 260 мг аморфного заглавного соединения. [α]25D

+ 23,5^o (с = 2, E10H); УФ (E10H) λ_max: плечо 234/235 нм (Σ 20600), 242 нм (Σ 29100), 250-251 нм (Σ 34100), 260 нм (Σ 22750); ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 0,68 (с, 3H), 1,05 (д, J = 6,5 Гц, 3H), 2,49 (дд, J = 2 и 12 Гц, 1H), 2,77 (J = 3 и 12 Гц, 1H), 2,8 (дд, J = 4 и 12 Гц, 1H), 4,06 (м, 1H), 4,13 (м, 1H), 5,35 (с, 1H), 5,58 (д, J = 16 Гц, 1H), 5,95 (д, J = 11 Гц, 1H), 6,23 (дт, J = 7 и 16 Гц, 1H), 6,31 (д, J = 11 Гц, 1H).

Пример 8. [3аR-[1(R^*),3а α, 4 β, 7а β ]]-3,3а,5,6,7,7а- Гексагидро-7а-метил-1-[6,6,6-трифтор-5-гидрокси-1-метил-5-(трифторметил)- 3Z-гексенил] -4H-инден-4-ол.

Смесь 1,6 г [3аR-[1(R^*),3а α, 4 β, 7а β ]]-3,3а,5,6,7,7а- гексагидро-7а-метил-1-[6,6,6-трифтор-5-гидрокси-1-метил-5-(трифторметил)-3- гексенил] -4H-инден-4-ола, 16 мл этилацетата, 40 мл гексана, 1,6 мл абсолютного этанола, 80 мкл хинолина и 320 мг катализатора Линдлара перемешивают 70 минут в атмосфере водорода. Реакционную смесь фильтруют и промывают этилацетатом. Фильтрат промывают 1 н. HCl и смесью воды и рассола. Водные слои экстрагируют этилацетатом, объединенные органические слои сушат и испаряют досуха. Очисткой сырого продукта быстрой хроматографией на силикагеле и ЖХВД с силикагелем с элюированием смесью гексан-этилацетат (3:1) получают 1,58 г аморфного заглавного соединения.

Пример 9. [3аR-[1(R^*),3а α, 7а β]]-3,3а,5,6,7,7а-Гексагидро-7а-метил-1-[6,6,6-тpифтop-5- гидpoкcи-1-мeтил-5-(тpифтopмeтил)-3Z-гeкceнил]-4H-индeн-4-oн.

По методике, приведенной в примере 2, но использованием в качестве исходного соединения [3aR-[1(R^*),3a α, 4 β, 7a β ]]-3,3a,5,6, 7,7a-гексагидро-7а-метил-1-[6,6,6-трифтор-5-гидрокси-1-метил-5- (трифторметил)-3Z-гексенил] -4H-инден-4-ола вместо соответствующего транс- аналога окислением получают заглавное соединение в виде аморфного вещества.

Пример 10. [3aR-[1(R^*),3a α, 7a β ]]-3,3а,5,6,7,7а-Гексагидро- 7а-метил-1-[6,6,6-трифтор-5-триметилсилилокси-1-метил-5-(трифторметил)-3Z- гексенил] -4H-инден-4-он.

По методике, приведенной в примере 3, но с использованием в качестве исходного соединения [3aR-[1(R^*), 3а α, 7а β ]]-3,3а,5,6,7,7а-гексагидро-7а-метил-1-[6,6,6-трифтор-5- гидрокси-1-метил-5-(трифторметил)-3Z-гексенил] -4H-инден-4-она вместо соответствующего транс-аналога в реакции получают в виде аморфного вещества заглавное соединение.

Пример 11. 1,25-Дигидрокси-16,23Z-диен-26,27-гексафтор-19- норхолекальциферол.

По методике, приведенной в примере 7, но с использованием в качестве исходного соединения [3aR-[1(R^*),3а α, 7а β ]]-3,3а,5,6,7,7а- гексагидро-7а-метил-1-[6,6,6-трифтор-5-триметилсилилокси-1-метил-5- (трифторметил)-3Z-гексенил] -4H-инден-4-она вместо соответствующего транс-аналога в последовательности реакции синтезируют заглавное соединение.

Пример 12. 1,25-Дигидpoкcи-16,23Z-диeн-26,27-гeкcaфтopxoлeкaльцифepoл.

Раствор 552 мг оксида [3S-(3 α, 5 β, Z)] -2- [2- [2- метилен-3,5-бис[[(1,1-диметилэтил)диметилсилил]окси]циклогексилиден] этил]-дифенилфосфина в 6 мл безводного тетрагидрофурана охлаждают до -78^oC и к раствору под аргоном прибавляют по каплям 0,578 мл 1,6 мл М раствора н-бутиллития в гексане. После перемешивания несколько минут к образовавшемуся красному раствору по каплям в течение 10 минут прибавляют раствор 256 мг [3аR-[1(R^*),3а α, 7а β ] ]-3,3а,5,6,7,7а-гексагидро-7а-метил-1-[6,6,6- трифтор-5-триметилсилилокси-1-метил-5-(трифторметил)-3Z-гексенил] -4H-инден-4-она в 4,5 мл безводного тетрагидрофурана. Реакционную смесь перемешивают 90 минут при -78^oC, затем нейтрализуют добавлением 10 мл смеси (1:1) 2 н. раствора соли Рачелла и 2 н. раствора KHCO₃ и оставляют нагреваться до комнатной температуры. После добавления еще 25 мл смеси растворов соли Рачелла/KHCO₃ смесь экстрагируют этилацетатом. Органические слои промывают смесью воды с рассолом, сушат и испаряют досуха. Очисткой сырого продукта быстрой хроматографией на силикагеле с элюированием смесью гексан-этилацетат (20:1) получают 335 мг силилированного заглавного соединения. Раствор 335 мг силилированного промежуточного соединения в 6 мл безводного тетрагидрофурана обрабатывают 3,7 мл 1 М раствора тетрабутиламмонийфторида в тетрагидрофуране. Реакционную смесь перемешивают 22,5 часа под аргоном. Реакцию прекращают добавлением 5 мл воды, перемешивают 30 минут и после испарения тетрагидрофурана и добавления 10 мл воды экстрагируют этилацетатом. Органические слои промывают смесью воды с рассолом, сушат и испаряют. Очисткой сырого продукта быстрой хроматографией на силикагеле с элюированием смесью гексан-этилацетат (1:2,5) получают 206 мг заглавного соединения. [α]25D

+ 23,5^o (с = 0,2%, ЕТОН); УФ (ЕТОН) λ_max: 206 нм (Σ 16720), 263 нм (Σ 14690); ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 0,68 (с, 3H), 1,06 (д, J = 6,9 Гц, 3H), 4,24 (ш.м, 1H), 4,45 (ш.м, 1H), 5,01 (с, 1H), 5,34 (с, 1H), 5,42 (д, J = 12,5 Гц, 1H), 5,97 (дт, J = 12,5 и 7 Гц, 1H), 6,11 (д, J = 11,4 Гц, 1H), 6,38 (д, J = 11,4 Гц, 1H).

Пример 13. 25-Гидpoкcи-16,23Z-диeн-26,27-гeкcaфтopxoлeкaльцифepoл.

Раствор 452 мг оксида [3S-(3 α, 5 β Z)]-2-[2-[2-метилен-5-[[(1,1- диметилэтил)диметилсилил] окси]циклогексилиден]этил]-дифенилфосфина в 6 мл безводного тетрагидрофурана охлаждают до -78^oC, после чего под аргоном прибавляют по каплям 0,625 мл 1,6 М раствора н-бутиллития в гексане. После перемешивания 5 минут к раствору по каплям в течение 10 минут прибавляют раствор 276 мг [3aR-[1(R^*),3а α, 7а β ]]- 3,3а,5,6,7,7а-гексагидро-7а-мeтил-1-[6,6,6-тpифтop-5- тpимeтилcилилoкcи-1-мeтил-5-(тpифтopмeтил)-3Z-гексенил] -4H-инден-4-она в 4 мл безводного тетрагидрофурана. Реакционную смесь перемешивают 1,75 часа при -78^oC, нейтрализуют добавлением 10 мл смеси (1:1) 2 н. раствора соли Рачелла и 2 н. раствора KHCO₃ и оставляют нагреваться до комнатной температуры. После добавления еще 30 мл смеси растворов соли Рачелла и KHCO₃ полученную смесь экстрагируют этилацетатом. Органические слои промывают рассолом, сушат и испаряют досуха. Очисткой сырого продукта быстрой хроматографией на силикагеле с элюированием смесью гексан-этилацетат (10: 1) получают 364 мг силилированного заглавного соединения. К раствору 364 мг силилированного промежуточного соединения в 4,5 мл безводного тетрагидрофурана добавляют под аргоном 3,9 мл 1 М раствора тетрабутиламмонийфторида в тетрагидрофуране. Полученный раствор перемешивают 18 часов и реакцию прекращают добавлением 5 мл воды и перемешиванием 15 минут. После добавления 35 мл рассола смесь экстрагируют этилацетатом. Органические соли промывают смесью воды и рассола, сушат и испаряют досуха. Очисткой сырого продукта быстрой хроматографией на силикагеле с элюированием смесью гексан-этилацетат (5:2) и ЖХВД с элюированием смесью гексан-этилацетат (2:1) получают 228 мг аморфного заглавного соединения. УФ (ЕТОН) λ_max: 204/205 нм (Σ 19800), 263 нм (Σ 17600); ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 0,68 (с, 3H), 1,06 (д, J = 6,9 Гц, 3H), 3,97 (ш.м, 1H), 4,83 (ш.м, 1H), 5,06 (с, JH), 5,37 (с, 1H), 5,42 (д, J = 12,1 Гц, 1H), 5,97 (дт, J = 12,1 и 7Гц, 1H), 6,13 (д, J = 11 Гц, 1H), 6,23 (д, J= 11 Гц, 1H).

Пример 14. Пероральная дозированная форма, мягкие желатиновые капсулы, мг/капсулу:
25-Гидрокси-16,23E-диен-26,27-гексафторхолекальциферол - 0,0001-0,01
Бутилированный гидрокситолуол (БГТ) - 0,016
Бутилированный гидроксианизол (БГА) - 0,016
Фракционированное кокосовое масло (Необи М-5) - 160
Пример 15. Крем для нанесения местно, мг:
25-Гидрокси-16,23E-диен-26,27-гексафторхолекальциферол - 0,001-1
Цетиловый спирт - 1,5
Стеариловый спирт - 2,5
Спан 60 (моностеарат сорбита) - 2
Арлацель 165 (смесь моностеарата глицерина и стеарата полиоксиэтиленгликоля) - 4
Твин 60 (полисорбит 60) - 1
Минеральное масло - 4
Пропиленгликоль - 5
Пропилпарабен - 0,05
БГА - 0,05
Раствор сорбита - 2
Динатрийэдетат - 0,01
Метилпарабен - 0,18
Дистиллированная вода - Необх. кол-во до 100 го

Аналоги витамина D₃ формулы I, где R-H, ОН или F; Х - Н₂ или =CH₂, двойная связь имеет Е-или Z-конфигурацию. Фармацевтический препарат, содержащий эффективное количество соединения I, обладает стимулирующим дифференцированием, снижающим пролиферацию кератиноцитов человека, и противоопухолевым действием. 3 с. и 3 з.п. ф-лы, 4 табл.

1. Аналоги витамина D₃ формулы I

где R - водород, гидроксигруппа или фтор;
X - H₂ или =CH₂;
двойная 23, 24-связь имеет E- или Z- конфигурацию. 2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что R - гидроксигруппа или фтор, и двойная 23, 24-связь имеет E-конфигурацию. 3. Соединения по п. 1, а именно 26, 26, 26, 27, 27, 27-гексафтор-1α, 25-дигидрокси-16, 23E-диенхолекальциферол, 26, 26, 26, 27, 27, 27 - гексафтор-25-гидрокси-16, 23 E-диенхолекальциферол, 26, 26, 26, 27, 27, 27-гексафтор-(1α-фтор-25-гидрокси-16,23-диенхолекальциферол и 26, 26, 26, 27, 27, 27-гексафтор-1α, 25-дигидрокси-16, 23E-диен-19-норхолекальциферол. 4. Соединения по п.1, 2 или 3, обладающие терапевтической активностью, в частности антипролиферативной, противоопухолевой и активностью против заболеваний жировых желез, особенно угрей. 5. Способ получения соединений формулы I по п.1, отличающийся тем, что в соединении формулы I, где имеющиеся гидроксигруппы защищены силильными группамим, удаляют силильные защитные группы. 6. Фармацевтический препарат, обладающий стимулирующим дифференцирование, снижающим пролиферацию кератиноцитов человека и противоопухолевым действием, отличающийся тем, что он содержит эффективное количество соединения по п.1, 2 или 3 и инертный носитель.