СРЕДСТВО С РЕГЕНЕРАТОРНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 1999 года по МПК A61K33/00 

Изобретение относится к медицине и предназначено для стимуляции регенераторно-восстановительных процессов в различных органах и тканях организма.

Регенерация - обновление структур в процессе жизнедеятельности организма - физиологическая регенерация), и восстановление структур, которые утрачены в результате патологических процессов (репаративная регенерация). Восстановление структур происходит на всех уровнях жизнедеятельности организма: восстановление органелл, редупликация ДНК, размножение клеток, восстановление строения органа или ткани, восстановление функций, связанных с данными орагеллами, клетками, органом или тканью.

Существует много веществ, которые используются для стимуляции регенераторно-восстановительных процессов - это витамины, гормоны и другие вещества.

Витамин B₁ является составной частью кокарбоксилазы - кофермента, участвующего в регулировании углеводного обмена. Витамин B₁ обычно хорошо переносится. Однако, подкожные инъекции, иногда и внутримышечные, болезненны в связи с низким pH растворов. В отдельных случаях после инъекции витамина, реже после приема внутрь, возможны аллергические реакции (отек Квинке, крапивница, кожный зуд). При введении в вену аллергические осложнения могут быть более сильными, возможно возникновение анафилактического шока. Аллергические реакции и анафилаксия развиваются у лиц, склонных к аллергии и лиц, страдающих алкоголизмом. Тиамин противопоказан лицам с аллергическими заболеваниями и лекарственной непереносимостью в анамнезе (Машсковский М.Д., 1993, т. 2, с. 8).

Предлагаемое в настоящей заявке на изобретение средство (клиноптилолитовые разновидности цеолитсодержащего туфа) не только не вызывает аллергических реакций, но само обладает противоаллергическим действием (см. заявку на изобретение института биохимии N 94-000695/14, положительное решение от 28.02.96). Кроме того, показана возможность и положительные результаты использования данного средства у больных хроническим алкоголизмом (см. материалы заявки на изобретение института биохимии N 96-112591).

Витамин B₆ в организме фосфорилируется и входит в состав ферментов, осуществляющих декарбоксилирование и переаминирование аминокислот, участвует также в жировом обмене. Витамин B₆ (пиридоксин) обычно хорошо переносится. Но в отдельных случаях возможны аллергические реакции (кожные высыпания и др. ). С осторожностью следует применять пиридоксин у больных язвенной болезнью желудка и 12-перстной кишки в связи с возможным повышением кислотности желудочного сока (Машковский М.Д., 1993, т. 2, с. 15).

Предлагаемое в настоящей заявке средство, как было указано выше, само обладает противоаллергическим действием. Кроме того, исследования на животных на нескольких моделях язвенной болезни показало, что предлагаемое средство может быть использовано при язвенной болезни с положительными результатами (данные из отчета о НИР).

Аскорбиновая кислота (Машковский М.Д., 1993, т. 2, с. 26) участвует в регулировании окислительно-восстановительных процессов, углеводного обмена, регенерации тканей и проч.

Известен также "Способ индукции биосинтеза белка при регенерации тканей", а.с. СССР N 1689980, авторы - Панин Л.Е., Усынин И.Ф., Соколова М.В., где предложено применение продигиозана, зимозана и декстрана сульфата для ускорения биосинтеза белка при регенерации тканей.

Продигиозан вводят внутримышечно (Машковский М.Д., 1993, т. 2, с. 201). Предлагаемое же в настоящей заявке средство используется перорально, что представляет большие удобства при использовании лекарственного средства.

Предлагаемое изобретение, обладая рядом преимуществ перед другими средствами, обладающими регенераторно-восстановительным действием, расширяет их арсенал и возможности.

Сущность изобретения состоит в том, что для целей стимуляции регенераторно-восстановительных процессов (физиологической регенерации, репаративной регенерации) в различных органах и тканях организма используются клиноптилолитовые разновидности природного цеолитсодержащего туфа (ЦТ).

Эксперименты проведены на клиноптилолитовых разновидностях природного ЦТ Шивыртуйского и Холинского месторождений.

Минералого-химические характеристики данных ЦТ приведены в табл. 1.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.

Пример 1. Стимуляция процессов физиологической регенерации (шивыртуин).

Опыты были проведены на половозрелых самках крыс Вистар, которые в течение 3-х месяцев получали в виде кормовой добавки природный ЦТ Шивыртуйского месторождения (шивыртуин). Шивыртуин вводился в корм в сухом измельченном виде, в количестве 10% от сухой массы корма.

В табл. 2 приведены кариометрические показатели гепатоцитов. Как следует из таблицы, средний объем ядра гепатоцитов находится у животных опытной группы на уровне лабораторного контроля. Обращает на себя внимание тенденция к увеличению тетраплоидных форм гепатоцитов у животных, получавших с кормом природный ЦТ, что свидетельствует о повышенном синтезе нуклеиновых кислот и соответственно о повышении резервных возможностей органа. За пределы границ нормы эта тенденция не выходит.

В печени крыс, получавших клиноптилолит, отмечается накопление синусоидальных клеток, имеющих сферические ядра. Учитывая, что эти клетки, вероятнее всего принадлежат к клеткам лимфоцитарно-моноцитарного ряда, можно утверждать, что в печени животных этой группы активируется лимфоцитарно-макрофагальная система.

В табл. 3 приведены морфометрические показатели селезенки крыс Вистар. Как следует из таблицы, у животных опытной группы имеется существенно и статически достоверное возрастание удельного объема "белой пульпы". В этой же группе отмечается прирост удельного объема тимус-зависимой зоны селезенки за счет гиперплазии лимфоидных и нелимфоидных (макрофаги) клеточных элементов периартериальной лимфоцитарной муфты. Существенно увеличен удельный объем маргинальных участков белой пульпы. При этом, в маргинальной зоне накапливаются средние лимфоциты и карофаги с активированными ядрами.

Полученные результаты морфологических исследований (активация процесса полиплоидизации гепатоцитов, структурные изменения в селезенке) свидетельствуют о стимулирующем эффекте природного ЦТ Шивыртуйского месторождения (клиноптилолита) на физиологическую регенерацию.

Пример 2. Стимуляция репаративной регенерации при раневом повреждении кожи (ЦТ Холинского месторождения - цеохол)
Линимент из цеолита на ланолиновой основе наносили равномерным слоем на рану. В качестве препарата сравнения использовали масляно-бальзамическую эмульсию А.А. Вишневского. Контролем служили раны крыс, не подвергнутые лечению каким-либо препаратом. Исследования проводили на модели плоскостной раны - на 3, 7, 14-е и 21-е сутки с начала лечения. Регистрировали клиническое состояние ран, определяли площадь плоскостных ран, проводили гистологическое исследование кожи.

Спустя 7 суток после начала лечения линиментом с ЦТ, отчетливо виден эпителиальный клин (регенерат), растущий под струп по краю раны. Рост грануляционной ткани идет со дна раны от подкожной клетчатки и от края дермы. В глубоких слоях новообразованной соединительной ткани видны капилляры и макрофагальные элементы, образующие скопления вокруг кровеносных сосудов.

На 14-е сутки опытов эпителий нарастает на сформированную грануляционную ткань, состоящую из фибробластов и коллагеновых фибрилл. От эпителиального пласта отходят в толщу грануляиционной ткани многочисленные сосочки.

Через 21 сутки после нанесения раны кожи и с начала лечения линиментом с цеолитом эпителий нарастает с краев раны и покрывает большую часть раневой поверхности. В грануляционной ткани коллагеновые волокна, обхватывая фибробласты и анастомозируя между собой, образуют рубец.

Как видно из табл. 4, в случае нанесения на расы изучаемого препарата, отмечены достоверные по сравнению с контролем различия размеров ран на 14-е сутки и 21-е сутки с начала лечения.

Полученные данные свидетельствуют о том, что линимент на основе ЦТ ускоряет динамику сокращения раневых дефектов по срокам, что обусловлено стимуляцией эпителизации и развития грануляционной ткани с более ранним переходом ее в рубцовую ткань.

Пример 3. Стимуляция репаративной регенерации при радиационном повреждении органов кроветворения (цеохол).

Эксперименты проводили на белых крысах с исходной массой 150-200 г. Животных облучали одномоментно дозой 6 Гр на аппарате "Агат-Р", источник облучение Co⁶⁰, мощность источника 0,01010 Гр/с. Наблюдение вели 30 дней. В течение всего эксперимента животных содержали на стандартном рационе с добавкой 10% природного цеолитсодержащего туфа Холинского месторождения (цеохолита). Животных контрольной группы содержали на аналогичном рационе без добавки цеохола. Через 30 дней животных декапитировали. Для оценки регенераторно-восстановительного действия цеохола исследовали гематологические изменения, а также весовые коэффициенты органов, участвующих в восстановлении гемопоэза (печень, селезенка).

Результаты исследования оказались следующими. Через 30 дней после облучения у выживших животных опытной группы (80%) наблюдалось умеренное восстановление численности эритроцитов и концентрации гемоглобина, а количество тромбоцитов восстанавливалось до пределов физиологических колебаний.

Морфологическое изучение мазков костного мозга свидетельствовало об увеличении пула клеток грануляцитарного ряда различной степени зрелости. Пул эритроидных клеток представлен в большей степени дифференцирующимися нормобластами. Лейкоэритробластическое отношение (Л:Э) равно 5:1, что указывает на активацию лейкопоэза в костном мозге.

Значимой потери массы животных не наблюдалось. Весовые коэффициенты тимуса, селезенки и печени превышают по величине таковые интактных животных, что указывает на резервные возможности данных органов в восстановлении кроветворения, стимулируемые исследуемым препаратом.

Пример 4. Стимуляция репаративной регенерации при токсическом повреждении печени - токсическом гепатите (цеохол).

Опыты были проведены на 50 кроликах с токсическим гепатитом. Исследовалось морфофункциональное состояние печени.

Токсический гепатит у животных получали однократным подкожным введением 50%-го масляного раствора четыреххлористого углерода CCl₄ в дозе 0,6 г/кг массы тела. Цеохол животные получили из расчета 1 г/кг массы, что составляло 2% суточного количества корма животных.

Фиксацию кусочков печени для морфологических исследований осуществляли в 10%-ом растворе формалина. Гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином и пикрофуксином по Ван Гизон (Меркулов Г.А., 1969).

В свежезамороженных криостатных срезах печени выявляли содержание гликогена ШИК-реакцией, нейтральных жиров - суданом черным "Б", активность СДГ-азы и ЛДГ-азы по Нахласу (Пирс Э., 1962).

Морфологические изменения в печени кроликов были следующими. Спустя 3-е суток с начала опытов в печени животных, получавших CCl₄, выявлены обширные очаги некроза паренхимы. Гепатоциты подвергнуты "баллонной" дистрофии, балочное строение долек нарушено. Отмечены холестаз, перихолангит и межклеточная инфильтрация по портальным трактам. Кровеносные сосуды и синусы в органе расширены и полнокровны. Обнаружены крупно- и среднекапельная жировая дистрофия гепатоцитов, снижение уровня содержания гликогена, активности СДГ-азы и ЛДГ-азы.

На 7-е сутки исследований в печени кроликов, получавших только раствор CCl₄, отмечен выраженный перихолангит, в отдельных случаях печеночные клетки находятся в состоянии "баллонной" дистрофии. Иногда гепатоциты сдавлены и атрофированы. Сохраняется полнокровие сосудов, встречаются случаи кровоизлияний в паренхиму органа. Выявлена значительная клеточная инфильтрация в дольках, вокруг долек и по ходу сосудов. Отмечена отчетность органа вокруг триад.

Во всех случаях в печени контрольных кроликов обнаруживается крупно- и среднекапельная жировая инфильтрация.

В эти же сроки исследований в случаях фармакотерапии кроликов с токсическим гепатитом цеохолом патоморфологические изменения в печени были выражены в значительно меньшей степени, чем в контроле. Гепатоциты, подверженные "баллонной" дистрофии встречались только в единичных случаях; в меньшей степени, чем в печени контрольных кроликов, была выражена инфильтрация органа клеточными элементами.

В печени кроликов с токсическим гепатитом, получавших исследуемый препарат, в меньшей степени, чем в контроле, выражена жировая инфильтрация, содержание гликогена несколько выше, чем таковое в печени контрольных животных, но ниже чем в печени интактных кроликов.

Гликоген в печени леченных животных находится частично в пылевидном состоянии, в виде зерен или конгломератов из слипшихся зерен. Гранулы диформазана при выявлении активности СДГ-азы и ЛДГ-азы в печени этих же животных были мелкие, правильной округлой формы и окрашивались несколько бледнее, чем в контроле. Скармливание подопытным кроликам ЦТ и в последующие сроки исследований (14-21-е сутки) способствовало более ускоренной по сравнению с контролем нормализации структуры и функции печени.

В целом, полученные нами в эксперименте данные свидетельствуют о том, что введение подопытным кроликам ЦТ обусловливает в исследованные сроки ускорение восстановительных процессов в поврежденной печени, улучшение ее морфофункционального состояния, что проявлялось в уменьшении очагов некроза, некробиоза и дистрофических изменений гепатоцитов, восстановлении балочного строения долек.

Выявленную значительную активацию окислительно-восстановительных процессов в печени кроликов на фоне фармакотерапии изучаемым препаратом следует рассматривать как пусковой механизм, который через ряд этапов приводит к уменьшению гистотоксической гипоксии в печени, а в дальнейшем - к нормализации нарушенного обмена веществ.

Жировая инфильтрация печени является характерной патохимической чертой токсического гепатита. В нормальных печеночных клетках синтез нейтральных жиров идет слабо. В случаях введений в организм четыреххлористого углерода и других ядов имеет место накопление нейтральных жиров в гепатоцитах и торможение синтеза фосфолипидов, обусловленное снижением концентрации аденозинтрифосфорной кислоты в клетках печени.

Уменьшение жировой инфильтрации в печени кроликов с токсическим гепатитом при получении цеохола, по-видимому, объясняется снижением гипоксии в органе.

Нормализующее влияние изучаемого препарата на содержание гликогена в печени подопытных кроликов следует рассматривать как проявление стимуляции восстановительных процессов в органе, так как гликоген играет важную роль в жизнедеятельности организма, является основным источником энергии, участвует в процессе регенерации органов и тканей.

Таким образом, приведенные выше результаты, полученные на разных моделях повреждения органов и тканей и при физиологическом их состоянии, свидетельствуют о том, что клиноптилолитовые разновидности цеолитсодержащих туфов являются средством, которое стимулирует регенераторно-восстановительные процессы в организме.

Изобретение относится к медицине. Предложено использовать клиноптилолитовые разновидности природного цеолитсодержащего туора в качестве средства с регенераторно-восстановительным действием. Средство стимулирует процессы физиологической и репаративной регенерации. 2 з.п. ф-лы, 5 табл.

1. Применение клиноптилолитовых разновидностей природного цеолитсодержащего туфа в качестве средства с регенераторно-восстановительным действием. 2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что клиноптилолитовой разновидностью природного цеолитсодержащего туфа является шивыртуин - цеолитсодержащий туф Шивыртуйского месторождения. 3. Применение по п. 1, отличающееся тем, что клиноптилолитовой разновидностью природного цеолитсодержащего туфа является цеохол - цеолитсодержащий туф Холинского месторождения.