АНТИУЛЬЦЕРОГЕННОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2000 года по МПК A61K33/00 

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к гастроэнтерологии, и может быть использовано для лечения язвенной болезни желудка.

Лечение язвенной болезни, как известно, подразделяется на 2 этапа: предупреждение развития заболевания и его рецидивов (первичная и вторичная профилактика) и купирование собственно "язвенного кризиса". Если для решения первой задачи необходимы средства, способные оказывать превентивное фармакотерапевтическое влияние, то во втором случае используются препараты, оказывающие фармакотерапевтическое (язвозаживляющее) действие при полной клинико-морфологической манифестации заболевания.

Известны следующие группы фармакотерапевтических (язвозаживляющих средств (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1993): вяжущие, обволакивющие и антацидные средства - де-нол, таблетки "Викаир", гидроокись алюминия, гастал и др. (Там же. - Т. 1. - С. 389 - 397); антихолинергические средства, например, атропин (Там же. - Т. 1 - С. 258-276); анаболические стероиды (Там же. - Т. 1. - С. 707 - 710), щелочи (Там же. - Т.1. - С. 395) и другие препараты. Известны также положительные результаты лечения больных язвенной болезнью желудка витамином B₁ (Там же. - Т. 2. - С. 8).

Однако применение вышеуказанных препаратов чаще всего противопоказано при нарушениях функции почек, вызывает побочные явления, такие как тошнота и рвота. Как показано в материалах предыдущей заявки Института биохимии СО РАМН на изобретение Панина Л.Е. и др. N 94-016980/14(017190), положительное решение от 21.10.96, предлагаемые в данной заявке в качестве антиульцерогенного средства клиноптилолитовые разновидности цеолитсодержащих туфов (ЦТ) применяются как энтеросорбент для терапии почечной недостаточности, и, следовательно, отрицательное воздействие их на функцию почек в данном случае исключается.

В качестве прототипа (препарата сравнения) выбран кверцетин, относящийся к группе флавоноидов, обладающих P-витаминной активностью (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1984. - Т.2 - С. 33). Кверцетин представляет собой желтый кристаллический порошок без запаха и вкуса. Продолжительность лечения 5 - 6 недель по 0.02 г 3 - 5 раз в день. Однако этот препарат - искусственный и, в отличие от заявляемого изобретения, требует определенных средств для своего создания.

Известны природные цеолитсодержащие туфы (ЦТ) различного районирования, среди которых главенствующее значение имеют клиноптилолитовые породы. В отечественных ЦТ обычно содержится от 30 до 90% клиноптилолита (Челищев Н.Ф. и др. Цеолиты - новый тип минерального сырья. - М.: Недра, 1987), что и определяет сходство геохимических, адсорбционных и ионообменных свойств различных разновидностей ЦТ (см., например, табл. 1, характеристика ЦТ Шивыртуйского месторождения // Кормление животных и цеолиты: Методические указания по изучению природных цеолитов в кормлении сельскохозяйственных животных. - Кемерово, 1990. - С. 5 - 6. Характеристика ЦТ Холинского месторождения представлена по данным авторов изобретения).

Уникальное сочетание в цеолитовом сырье сорбционных, каталитических, ионообменных, ситовых и других свойств обеспечивает широкий спектр его промышленного и сельскохозяйственного применения. Однако в современном уровне техники не обнаружены данные об антиульцерогенном действии ЦТ.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в применении клиноптилолитовых разновидностей природного цеолитсодержащего туфа, в частности - Холинского месторождения, в качестве антиульцерогенного средства.

Предлагаемое изобретение расширяет арсенал средств, которые могут быть использованы при лечении язвенной болезни желудка.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Эксперименты выполнены на беспородных белых крысах с массой в пределах 150 - 270 г обоего пола, содержащихся в идентичных условиях на стандартном рационе вивария.

ЦТ использовался перорально в дозах 1000, 5000 и 10000 мг/кг массы крысы, а препарат сравнения кверцетин (прототип) - в изоэффективной дозе согласно показаниям к его применению (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М. : Медицина, 1986). Контрольная группа животных получала дистиллированную воду в эквиобъемном количестве.

С целью определения фармакотерапевтического влияния ЦТ при патологии органов желудочно-кишечного тракта, использовались общепринятые модели острой язвы желудка: по Shay (1945), атофанового, бутадионового и резерпинового повреждений желудка (Барнаулов О.Д., Маничева О.А., Денисенко П.П. Методы оценки влияния препаратов на ульцерогенное действие резерпина у мышей // Фармакотерапия и токсикология. - 1982. - N 4. - С. 105 - 110). Оценка деструкции слизистой оболочки желудка проводилась под бинокулярной лупой с 8-кратным увеличением. Исследование желудочного сока проводилось общепринятыми методами (Фышзон-Рысс Ю.И. Современные методы исследования желудочной секреции. - М.: Медицина, 1972).

Использование указанного набора повреждений слизистой оболочки желудка, вызванных ульцерогенными агентами и факторами, является обоснованным, поскольку позволяет более объективно оценить фармакотерапевтическую активность и определить диапазон применения препарата с учетом патогенетического варианта язвенной болезни. Степень активности ЦТ сравнивали с действием кверцетина, который используется для лечения и профилактики гастритов и язвенной болезни (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1986). Концентрацию сульфогидрильных групп, отражающую интенсивность процессов образования белковых структур, определяли титрационным методом (Фаломеев В.Ф. Количественное определение в тканях тионовых и дисульфидных групп // Лабораторное дело. - 1980. - N 8. - С. 653 - 656).

Данные обработаны статистически по Стьюденту с использованием коэффициента "k" Мольденгауэра (Монцевичюте-Эрингене Е.В. Упрощенные математико-статистические методы в медицинской исследовательской работе // Патол. физиология и эксперим. терапия. - 1964. - N 4. - С. 71 - 78) и критерия "U" (Wilkokson-Mann-Witny (Гублер И.В., Генкин А.А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. - Л.: Медицина, 1974 г).

Опыты проведены на половозрелых животных, голодавших до начала эксперимента в течение 24 часов при свободном доступе к воде. Умерщвление животных проводили согласно действующим правилам под легким эфирным наркозом путем мгновенной декапитации. Желудки разрезали по большой кривизне и подсчитывали число деструкций, которые подразделяли на точечные кровоизлияния, эрозии и полосовидные язвы. Для каждого вида повреждений слизистой оболочки желудка рассчитывали "язвенный индекс" Паулса (Оболенцева Г.В., Хаджай Я.И. Влияние некоторых флавоноидных соединений на образование экспериментальных язв желудка у крыс // Бюл. эксперим. биологии. - 1964. - N - 9. - С. 86 - 88) по формуле:
M_x% поражения животных / 100%, где
M - среднее число деструкций на одно животное в группе.

Методами вариационной статистики вычисляли достоверность различий между сравниваемыми группами.

Влияние ЦТ на течение атофанового повреждения слизистой оболочки желудка.

Опыты были проведены на белых крысах-самцах с исходной массой 200 ± 20.0 г, которые перед началом эксперимента голодали в течение 24 часов при свободном доступе к воде. В каждой группе использовалось по 6 крыс. В качестве ульцерогенного агента использовался атофан (300 мг/кг крысы, на 5%-ном растворе диметилсульфоксида, внутрибрюшинно, однократно), дающий наиболее воспроизводимые результаты. Исследуемые препараты, используемые в экспериментально-терапевтических дозах - ЦТ (1000, 5000 и 10000 мг/кг) и кверцетин (50 мг/кг) - вводили перорально, однократно, за 2 часа до инъекции атофана. Через 24 часа проводили энатацию и морфологическую обработку возникших деструкций с использованием индекса Паулса. Результаты эксперимента представлены в таблице 2.

Из таблицы видно, что на модели атофеновой язвы ЦТ, в основном, уступает кверцетину, но в отличие от препарата сравнения более эффективно предохраняет слизистую оболочку желудка от развития точечных кровоизлияний. Наиболее позитивное действие было выявлено при введении ЦТ в дозе 1000 мг/кг, при этом дальнейшее увеличение дозы средства не приводит к приросту гастропротективного эффекта, поэтому именно указанная доза была использована в дальнейших экспериментах.

Влияние ЦТ на течение повреждений слизистой оболочки желудка у белых крыс по Shay H.

В основе развития деструкции слизистой оболочки желудка (СОЖ), вызванной наложением лигатуры по Shay на привратник желудка, лежат два механизма - нейродистрофический и гастроптоз.

Опыты проведены на 40 белых крысах-самцах с исходной массой 150.0 ± 5.0 г, которые перед началом эксперимента голодали в течение 24 часов при свободном доступе к воде. ЦТ (1000.0 мг/кг, 10% от ЛД-50) и кверцетин (50,0 мг/кг, 10% от ЛД-50) вводили перорально за 2 часа до операции по лигированию пилорического отдела желудка. Операцию проводили атравматично под барбамиловым наркозом (60,0 мг/кг, внутрибрюшинно). Через 24 часа после операции животных умерщвляли мгновенной декапитацией под легким эфирным наркозом, желудки вскрывались по большой кривизне, в мерные пробирки собирался желудочный сок и проводилась морфометрия слизистой оболочки желудка с использованием индекса Паулса. Клиниколабораторное исследование желудочного сока проводили по общепринятым методикам (Фышзон-Рысс Ю.И. Современные методы исследования желудочной секреции. - М.: Медицина, 1972). Результаты исследования представлены в таблице 3.

Как видно из таблицы 3, ЦТ в дозе 1000 мг/кг массы крысы обладает выраженным противоязвенным действием при данной патологии, обусловленной перевязкой привратника. Он сохраняет темп желудочной секреции и кислото- и пепсинообразующие функции желудка, при этом снижает развитие пылевидынх кровоизлияний (почти в 2 раза), точечных кровоизлияний (в 2 раза), эрозий и полосовидных язв. Препарат сравнения кверцетин при данной модели язвы желудка не только не оказал противоязвенного эффекта, но и сам промотировал развитие эрозий и полосовидных язв.

Данные исследования желудочного секрета свидетельствуют о том, что под влиянием ЦТ по сравнению с данными в контроле возрастает напряжение почасовой продукции желудочного сока и повышается содержание свободной соляной кислоты. В группе животных с введением кверцетина увеличение темпа желудочной секреции происходило преимущественно за счет выработки соляной кислоты, т.к. наблюдалось достоверное снижение выработки пепсина. Таким образом, на данной модели патологии желудка наиболее благоприятное воздействие оказал ЦТ.

Влияние ЦТ на течение бутадионового повреждения слизистой оболочки желудка у белых крыс
Опыты были проведены на белых крысах-самцах с исходной массой 190±10.0 г, которые перед началом эксперимента голодали в течение 24 часов при свободном доступе к воде. В каждой группе использовалось по 6 крыс. В качестве ульцерогенного агента использовался бутадион (300 мг/кг, внутрибрюшинно в виде 15%-ной взвеси на ацетоне, однократно). Исследуемые препараты, используемые в экспериментально-терапевтических дозах - ЦТ (1000.0 мг/кг) и кверцетин (50 мг/кг) вводили перорально, однократно, за 2 часа до инъекции бутадиона. Через 24 часа проводили энатацию и морфометрическую обработку возникших деструкций с использованием индекса Паулса. Результаты эксперимента представлены в таблице 4.

Как видно из таблицы 4, на модели токсико-дистрофического повреждения СОЖ, патогенетически связанного с нарушением обмена простагландинов, исследуемые препараты оказали выраженный (хотя и в разной степени) гастропротективный эффект.

Так, как видно из таблицы, индекс Паулса для точечных кровоизлияний в группах под влиянием кверцетина и ЦТ по сравнению с контрольной группой животных уменьшился, соответственно, в 2.1 и 2.05 раза, для эрозий - при применении кверцетина увеличился более чем в 2 раза, а при применении ЦТ остался на уровне контроля. Индекс Паулса для полосовидных язв при применении кверцетина уменьшился в 1.64 раза, а при применении ЦТ - в 1.35 раза.

Как видно из полученных данных, фармакотерапевтический эффект препарата сравнения реализовался преимущественно в плане ограничения генеза полосовидных язв. На образование точечных кровоизлияний кверцетин не оказал существенного влияния, хотя в случае его введения крысам разница по данному показателю по сравнению с контролем была статистически значима. ЦТ по выраженности гастропротективного эффекта превосходили препарат сравнения кверцетин в ограничении образования эрозий. Согласно критериям оценки гастропротективного действия фармакологических агентов (Барнаулов О.Д., Маничева О.А., Денисенко П. П. Методы оценки влияния препаратов на ульцерогенное действие резерпина у мышей // Фармакотерапия и токсикология. - 1982. N 4. - С. 105 - 110) при интерпретации данной серии экспериментов можно заключить, что ЦТ, как и кверцетин, обладает отчетливым антиульцерогенным действием.

Влияние ЦТ на течение резерпинового повреждения слизистой оболочки желудка
Опыты были проведены на белых крысах-самцах с исходной массой 140±5.0 г, которые перед началом эксперимента голодали в течение 24 часов при свободном доступе к воде. В каждой группе использовалось по 6 крыс. В качестве ульцерогенного агента использовался резерпин (10 мг/кг, на 5%-ном растворе диметилсульфоксида, перорально, однократно). Исследуемые препараты, используемые в экспериментально-терапевтических дозах - ЦТ (1000 мг/кг) и кверцетин (50 мг/кг) - вводили перорально, однократно, за 2 часа до введения резерпина. Через 24 часа проводили энатацию и морфологическую обработку возникших деструкций с использованием индекса Паулса. Результаты эксперимента представлены в таблице 5.

Из данных таблицы 5 видно, что ЦТ и, в меньшей степени, кверцетин на модели резерпинового повреждения желудка, характеризующейся ишемией органов и снижением трофической функции симпатической нервной системы, приводящим к деэнергизации клеток и, как следствие этого, к понижению их устойчивости к повреждающим агентам (Аничков С.В., Заводская И.С. Фармакотерапия язвенной болезни. - Л.: Медицина, 1965; Барнаулов О.Д., Маничева О.А., Денисенко П.П. Методы оценки влияния препарата на ульцерогенное действие резерпина у мышей // Фармакотерапия и токсикология. - 1982. - N 4. - С. 105 - 110), оказали антиульцерогенное действие. Они защищали слизистую оболочку желудка от развития полосовидных язв и препятствовали развитию эрозий и точечных кровоизлияний.

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии. Предложено применять клиноптилолитовые разновидности природного цеолитсодержащего туфа в качестве антиульцерогенного средства. Средство защищает слизистую оболочку желудка от развития полосовидных язв, препятствует развитию эрозий и точечных кровоизлияний. 1 з.п.ф-лы, 5 табл.

1. Применение клиноптилолитовых разновидностей природного цеолитсодержащего туфа в качестве антиульцерогенного средства. 2. Применение по п.1, отличающееся тем, что используют клиноптилолитовые разновидности природного цеолитсодержащего туфа Холинского месторождения.