ГИПОХОЛЕСТЕРИНЕМИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2000 года по МПК A61K33/00 A61K33/08 A61K33/26 

Изобретение относится к медицине, в частности к средствам, снижающим содержание холестерина в сыворотке крови, и может быть использовано для лечения и профилактики гиперхолестеринемии, атеросклероза и ишемической болезни.

К настоящему времени предложено большое количество химиопрепаратов, обладающих гипохолестеринемическим действием. По механизму воздействия их можно разделить на группы:
- препараты, адсорбирующие желчные кислоты в кишечнике (холестирамин, холестипол, б-ситостерол, позитол),
- препараты, блокирующие синтез холестерина (CPIB, атромид, клофибрат и др.),
- препараты, воздействующие на липопротеиды плазмы (никотиновая кислота, декстран-40 и др.),
- стимулирующие кинетику синтеза желчных кислот (холевая кислота),
- действующие на б-адренергические рецепторы (пропранол и др.),
- некоторые гормональные препараты (гормон роста, андростерон, препараты щитовидной железы, эстрогены),
- усиливающие транспорт холестерина, перенос его из крови и тканей в печень (препараты, созданные на основе фосфатидилхолина растительного происхождения).

Наиболее близкими к предлагаемому средству являются препараты, адсорбирующие желчные кислоты в кишечнике, например, холестирамин. Холестирамин (ХА) - анионообменная смола в форме хлорида. Он связывает в кишечнике желчные кислоты, блокируя тем самым их реабсорбцию и увеличивая их экскрецию с калом, что приводит к усилению 7а-гидроксилирования холестерина в печени, уменьшению концентрации липопротеинов низкой плотности и соответственно холестерина плазмы. Усиливается фракционный катаболизм апо-В. Поскольку желчные кислоты необходимы для абсорбции холестерина, происходит дополнительная потеря холестерина с калом.

Ежедневная терапевтическая доза холестирамина 12-24 г. При приеме холестирамина больные чаще всего жалуются на неприятные вкусовые ощущения, иногда - на тошноту, запоры, при высоких дозах препарата (до 32 г/сут.) возможна стеаторея (Лопухин Ю.М. и др. Холестериноз. М.: Медицина, 1983, с. 279).

Холестирамин - довольно дорогой искусственно получаемый лекарственный препарат.

Задачей заявляемого изобретения является снижение содержания холестерина в плазме крови. Данная задача решается путем применения внутрь цеолитсодержащей породы Шивыртуйского месторождения (шивыртуина). Кроме вышеуказанного гипохолестеринемического действия, шивыртуин оказывает и другие положительные эффекты:
- иммуностимулирующее действие,
- вызывает усиление регенераторно-восстановительных процессов в кишечнике и печени.

Шивыртуин - природное средство, значительно более дешевое по сравнению с холестирамином и другими искусственно получаемыми лекарственными препаратами гипохолестеринемического действия.

Минералого-физико-химическая характеристика цеолитсодержащего туфа (ЦТ) Шивыртуйского месторождения
Среднее содержание цеолита (клиноптилолита),% - 68
Химический состав,%:
SiO₂ - 63,51
TiO₂ - 0,23
Al₂O₃ - 13,89
Fe₂O₃ - 1,78
CaO - 3,29
Na₂O - 1,28
K₂O - 2,69
H₂O - 13,40
Плотность, г/см³ - 2,39
Запах - Отсутствует
Цвет - Бежевый
Как было показано в разделе, описывающем уровень техники, гипохолестеринемическое действие различных препаратов реализуется различными путями. Гипохолестеринемическое действие шивыртуина осуществляется через несколько механизмов.

Известно, что для всасывания из желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) содержащегося в пище холестерина необходимо наличие в ЖКТ желчных кислот, поступающих туда из желчного пузыря. Если какой-либо препарат будет сорбировать желчные кислоты в ЖКТ, он тем самым будет препятствовать всасыванию пищевого холестерина в кровь и таким образом снижать в ней его содержание. Таков механизм действия, например, холестирамина - одного из распространенных гипохолестеринемических средств.

В наших экспериментах было показано, что ЦТ Шивыртуйского месторождения также обладает способностью адсорбировать желчные кислоты.

Пример 1. Применение ЦТ Шивыртуйского месторождения в природной и модифицированных формах в качестве гипохолестеринемического средства: сорбция желчных кислот.

Исследование сорбционных свойств природной и модифицированных форм цеолита Шивыртуйского месторождения проводилось на желчи человека, полученной при дуоденальном зондировании.

Исследование сорбции цеолитами холатов желчи (желчных кислот) проводилось "ин витро". Желчь разбавлялась 0,1 м трис-буфером рH=9,0 и инкубировалась с природными и модифицированными формами шивыртуина в соотношении 1: 20-25 при 37^oC и постоянном перемешивании в течении 1 ч. Модифицированные формы цеолита были представлены H⁺-формой, NH₄ ⁺-формой и Ca²⁺-формой. Размер гранул - до 10 мк.

Сорбционная емкость цеолитов определялась по остатку холатов в супернатанте после сорбции по сравнению с содержанием холатов в контрольных пробах, инкубировавшихся в тех же условиях без сорбента. Определение общих холатов проводилось по методу Мирошниченко В.П. с соавт., 1978.

В табл. 1 приведены данные по сорбционной емкости исследованных энтеросорбентов. Из приведенных данных видно, что протонированная форма цеолита обладает большей сорбционной емкостью по сравнению с другими модификациями цеолита, хотя все они, а также природная форма шивыртуина сорбируют желчные кислоты.

Таким образом, цеолит Шивыртуйского месторождения в природной и модифицированных формах, сорбируя желчные кислоты, может оказывать гипохолестеринемическое действие.

Пример 2. Применение ЦТ Шивыртуйского месторождения в качестве гипохолестеринемического средства - выведение холестерина из ЖКТ.

Работа проводилась на 20 крысах-самцах Вистар весом 250-300 г. Животные были разделены на 2 группы, по 10 крыс в каждой. Через час после утреннего кормления крысам с помощью желудочного зонда вводили меченый C¹⁴-холестерин в дозе 0,8 мкКи/100 г массы в составе интралипида-20 по 0,5 мл эмульсии на 100 г массы животного. Через 30 мин после введения меченого холестерина 10 животным через зонд вводили суспензию цеолитов в дозе 1500 мг/100 г массы на стерильном растворе Дульбекко. 10 контрольным животным вводили эквивалентное количество раствора Дульбекко. Через 24 часа после последнего введения препаратов у крыс собирали суточный кал и сыворотку крови после декапитации животных. Радиоактивность подсчитывали в сцинтилляционном счетчике Марк-III. Результаты выражали в имп/мин на г суточного кала и на мл сыворотки крови.

Результаты исследования влияния цеолита на содержание радиоактивного холестерина в крови и суточном кале крыс представлены в табл. 2.

Введение шивыртуина вызывало повышение уровня радиоактивности в суточном кале и снижение этого показателя в сыворотке крови крыс в 2,2 и 2,18 раз соответственно по сравнению с контрольными величинами. Полученные различия с контролем имели высокую степень достоверности (P<0,01).

Вывод: введение цеолита приводит к повышению выведения меченого холестерина из кишечника в составе суточного кала и снижению всасывания холестерина в кровь, в результате чего содержание холестерина в крови снижается.

Пример 3. Применение ЦТ Шивыртуйского месторождения в качестве гипохолестеринемического средства: эксперименты на животных с экспериментальной гиперхолестеринемией.

В опытах на животных с экспериментальной гиперхолестеринемией была использована протонированная форма цеолита Шивыртуйского месторождения. Опыты проводились на самцах крыс линии Вистар весом 100-200 г. В работе использовалась известная модель развития гиперхолестеринемии у крыс. Гиперхолестеринемия вызывалась введением в диету холестерина (5% от веса корма).

Цеолит давался животным в виде 5%-ной добавки в корм (опытные группы). Контрольные группы животных (с экспериментальной гиперхолестеринемией и интактная) не получали 5%-ной добавки цеолита в корм. Перечисленные группы животных, кроме интактной, находились на диете с добавлением в коры холестерина и/или цеолита 4 суток. В течение этого времени должен развиваться эффект максимально выраженной экспериментально вызванной гиперхолестеринемии.

На 5-е сутки крысы забивались, у животных бралась кровь для определения общего холестерина в сыворотке крови. Холестерин определялся энзиматическим методом.

Из приведенных в табл. 3 данных видно, что применение цеолита оказывало холестеринпонижающий эффект при экспериментально вызванной гиперхолестеринемии. Содержание холестерина в сыворотке крови у животных с экспериментально вызванной гиперхолестеринемией ниже на 27% (норма) в группе, получавшей добавку цеолита в корм (различия достоверны), по сравнению с группой, не получавшей цеолита. Содержание холестерина у интактных животных с добавкой и без добавки цеолита в корм не имеют достоверных различий.

Таким образом, применение протонированной формы ЦТ Шивыртуйского месторождения оказывало холестеринпонижающий эффект при экспериментально вызванной гиперхолестеринемии.

Таким образом, ЦТ Шивыртуйского месторождения оказывает гипохолестеринемическое действие различными путями:
- сорбируя желчные кислоты из ЖКТ и препятствуя всасыванию в кровь содержащегося в пище холестерина,
- сорбируя непосредственно холестерин, содержащийся в пище, и выводя его из ЖКТ,
- вызывая перемещение холестерина из крови в печень для синтеза из холестерина желчных кислот в печени (взамен сорбированных в ЖКТ).

Гистологическое исследование тканей желудочно-кишечного тракта контрольной и опытной групп крыс
Было проведено гистологическое исследование тканей ЖКТ (тонкого кишечника и печени) крыс, получавших в корм добавку цеолита Шивыртуйского месторождения размолом гранул до 10 мкм.

Материал забирался от контрольных животных, находившихся на стандартном рационе, и от опытной группы, получавшей вместе с рационом 5%-ю добавку цеолита в корм. В контрольной и опытной группах - крысы линии Вистар весом 200-250 г.

При вскрытии забиралась для исследования печень и двенадцатиперстная кишка. Материал заливался в парафин. Срезы окрашивались гематоксилином-эозином.

Клетки печени имели многоугольную форму, диаметр -20-25 мкм. Количество двухъядерных клеток - такое же как и в контроле. Ядра круглой формы, содержат хорошо заметные ядрышки. В цитоплазме имеются базофильные гранулы (РНК), что является признаком отсутствия белкового голодания.

На срезах тонкого кишечника проводилась также окраска. ШИК-реакция для исследования функционального состояния секреторных клеток кишечника. Эпителиальные клетки кишечника -с исчерченной каемкой, высота клеток - 20 мкм. Нарушений каемчатых клеток - нет. Бокаловидные клетки имеют слизь, следовательно, секреторная функция не нарушена.

Таким образом, патологических изменений тканей желудочно-кишечного тракта животных, получавших вместе с кормом добавку цеолитов, не обнаружено.

Изобретение относится к медицине. Предложено применять в качестве гипохолестеринемического средства цеолитсодержащий туф в природной и модифицированных формах. Туф сорбирует холестерин пищи и выводит его из ЖКТ. Средство также сорбирует желчные кислоты и препятствует всасыванию в кровь холестерина пищи. Использование туфа вызывает перемещение холестерина крови в печень для синтеза желчных кислот взамен сорбированных в ЖКТ. 3 табл.

Применение в качестве гипохолестеринемического средства цеолитсодержащей породы Шивыртуйского месторождения в природной или одной из модифицированных форм, а именно H⁺-форме, NH₄ ⁺-форме или Ca²⁺-форме.