СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕЧЕНИЯ ТОКСИЧЕСКОЙ ДИФТЕРИИ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/52 G01N33/50 

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням.

Как известно, дифтерия относится к наиболее распространенным и опасным для жизни человека инфекционным болезням. Особенно тяжело, нередко с летальным исходом, протекает ее токсическая форма. В связи с этим, прогнозирование неблагоприятного течения токсической дифтерии на ранних этапах заболевания представляется чрезвычайно важным с точки зрения своевременного назначения больным адекватной и рациональной терапии.

В научной литературе удалось найти скудные сведения, касающиеся прогноза развития у больных дифтерией лишь такого осложнения заболевания как миокардит (И.К. Мусабаев "Руководство по воздушно-капельным инфекциям", с. 40-41, 1982; Л. А. Фаворова и др. "Дифтерия", с. 160-166, 1988; Н.Д. Ющук и др. "Дифтерия у взрослых", с. 12-13, 1995). По данным указанных авторов, прогнозирование последнего чаще всего осуществляется на практике с помощью ЭКГ-исследования. К сожалению, прогностическая информативность этого способа чрезвычайно низкая.

По мнению Н.Д. Ющука с соавт. ("Дифтерия у взрослых", с. 12-13, 1995), наиболее ранними прогностическими признаками миокардита являются: 1) резкое повышение активности кардиоспецифических ферментов (креатинфосфокиназы, аспарагиновой трансаминазы, лактатдегидрогеназы и др.) и 2) данные ультразвукового исследования сердца, позволяющие выявить отек сердечной мышцы, расширение полостей сердца, снижение сократительной способности миокарда.

В то же время И.К. Мусабаев ("Руководство по воздушно-капельным инфекциям, с. 42, 1982) призывает не переоценивать значение в прогнозе миокардитов исследования указанных ферментов, повышение уровня которых в крови можно наблюдать только при тяжелом течении этого осложнения дифтерии. Да и сами Н.Д. Ющук с соавт. ("Дифтерия у взрослых, с. 12-13, 1995) признают, что биохимические и УЗИ-признаки предшествуют клиническим проявлениям дифтерийного миокардита и появлению изменений на ЭКГ далеко не во всех случаях, что в значительной мере снижает прогностическую значимость этого способа.

Главным же недостатком указанных способов является неспособность прогнозировать в целом неблагоприятное развитие дифтерии. Оно определяется, как известно, не только и не столько признаками миокардита, сколько развитием и ряда других состояний и осложнений этого заболевания, а именно: токсико-инфекционного шока, геморрагического синдрома, нефроза, полиневритов и др. Для практического врача крайне важно на начальных этапах ведения больных дифтерией прогнозировать в целом неблагоприятное развитие заболевания, и лишь потом - конкретное осложнение.

В качестве прототипа взят способ прогнозирования тяжести течения дифтерии путем клинико-биохимического обследования больного и определения в нем уровня органоспецифических ферментов, защищенный патентом РФ N 2079139, МПК G 01 N N 33/08 от 10.05.97.

Целью изобретения является прогнозирование неблагоприятного развития токсической дифтерии.

Поставленная цель достигается следующим образом.

В первые пять дней от начала заболевания у больных токсической дифтерией забирается кровь и проводится до введения противодифтерийной сыворотки определение содержания в ее плазме гидроперекисей липидов (ГПЛ) (В.Б. Гаврилов, М. И. Мишкорудная "Лаб. дело" 1983 N 3, с. 33-36), а в сыворотке - каталазы (М.А. Королюк с соавт. "Лаб. дело" 1988 N 1, с. 16-18).

Для определения концентрации ГПЛ в крови измеряют ультрафиолетовое поглощение липидных экстрактов крови. Принцип метода основан на интенсивном поглощении конъюгированных диеновых структур ГПЛ в области 232-234 нм. Результаты измерений выражают в относительных единицах величины оптической плотности на 1 мл крови (ΔD₂₃₃ на 1 мл крови). К 0,2 мл плазмы добавляют 4 мл смеси гептан-изопропанол (1:1) и встряхивают 10-15 минут. Далее в пробирку добавляют 1 мл раствора HCl с pH 2,0 и 2,0 мл гептана, интенсивно встряхивают и после отстаивания и расслоения смеси через 20-30 минут отбирают гептановый слой, в котором измеряют D₂₃₃. Расчет содержания ГПЛ производят в относительных единицах по формуле ΔD₂₃₃ на 1 мл плазмы = (D₂₃₃•V_э)/V_п = 20 • D₂₃₃, где D₂₃₃ - измеренное значение оптической плотности, V_э = 4 мл - конечный объем гептанового экстракта и V_п = 0,2 мл - объем взятой плазмы крови.

Содержание каталазы сыворотки крови определяется методом спектрофотометрического измерения активности. Принцип метода основан на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс. К 1 мл трис-HCl-буфера, 0,05 М, pH 7,8 и 2 мл 0,03% раствора перекиси водорода добавляют 0,1 мл сыворотки крови. В холостую пробу вместо сыворотки вносят 0,1 мл дистиллированной воды. Через 10 мин к полученной смеси добавляют 1 мл 4% молибдата аммония. Интенсивность развившейся окраски измеряют на спектрофотометре при длине волны 410 нм против контрольной пробы, в которую вместо перекиси водорода вносят 2 мл воды. Активность каталазы сыворотки рассчитывают по формуле:
E = (A_хол - A_оп) • V • t • K (мкат/л),
где E - активность каталазы (в мкат/л), A_хол и A_оп - экстинкция холостой и опытной проб, V - объем вносимой пробы 0,1 мл, t - время инкубации 600 с, K - коэффициент миллимолярной экстинкции перекиси водорода, равный 22,2•10³ мМ^-1•см^-1.

При одновременном выявлении в плазме крови уровня ГПЛ от 3,8 ед. и более и активности сывороточной каталазы от 146,0 мкат/л и более - прогнозируют неблагоприятное (вплоть до летального исхода) развитие заболевания.

Указанный вывод был сделан на основе результатов проведенных нами исследований (табл. 1).

Ретроспективный анализ позволил определить количество больных токсической дифтерией, у которых на основе предложенного способа были осуществлены правильный, либо ошибочный прогнозы (табл. 2), а затем по итогам проведенного исследования рассчитаны показатели чувствительности, специфичности, точности и ожидаемой ценности этого способа. Полученные результаты представлены в таблице 3.

Расчеты проводили по формулам:
Чувствительность:

где ИП (истинные положительные результаты) - число больных 1-й группы (табл. 2, 3), у которых прогноз оказался правильным; ЛО (ложно отрицательные результаты) - число больных 1-й группы, у которых прогноз оказался ошибочным.

Специфичность:

где ИО (истинные отрицательные результаты) - число больных 2-й группы, у которых прогноз оказался правильным; ЛП (ложные положительные результаты) - число больных 2-й группы, у которых прогноз оказался ошибочным.

Точность (эффективность):

Ожидаемая ценность (положительных результатов):

Приводим конкретные расчеты показателей, характеризующих предложенный способ прогноза:

Примеры использования способа прогноза неблагоприятного течения токсической дифтерии.

Пример 1. Больная Л. (и.б. N 1802-95), 31 года, поступила на 3-й день болезни с жалобами на резкую общую слабость, боли в горле, затруднение глотания, головную боль. При объективном исследовании выявлено: кожа бледная, отек шейной клетчатки ниже ключиц, миндалины гиперемированы, резко увеличены, отек паратонзиллярных тканей, на миндалинах, мягком небе, язычке грубые серые налеты с участками геморрагий, при попытке отделения налетов подлежащие ткани кровоточат. Заболевание было квалифицировано как токсическая дифтерия ротоглотки III степени. До введения противодифтерийной антитоксической сыворотки было проведено исследование показателей ОАС крови. Получены следующие результаты: ГПЛ плазмы: 4,0 ед.

Малоновый диальдегид (МДА) сыворотки: 3,53 нмоль/мл.

Каталаза сыворотки: 153,0 мкат/л.

Каталаза эритроцитов: 119,1 кат/л.

Супероксиддисмутаза (СОД) плазмы: 18,35 ед.

СОД эритроцитов: 241,3 ед.

Учитывая одновременное повышение уровня ГПЛ плазмы крови до 4,0 ед. и сывороточной каталазы до 153,0 мкат/л, прогнозировалось неблагоприятное течение заболевания. Больная получила 200 тыс. ед. противодифтерийной сыворотки в/м. Кроме того ей были назначены ампициллин по 1 г х 4 раза в сутки в/м, дезинтоксикационная терапия, глюкокортикостероиды из расчета 60 мг/сутки per os, рибоксин по 10,0 мл в/в). Однако на 8-й день с момента поступления несмотря на предпринятые меры наступил летальный исход вследствие развития тяжелого миокардита.

Пример 2. Больная Г. (и.б. 1543-95), 15 лет, поступила на 2-й день болезни с жалобами на головную боль, боли в горле, затруднение глотания, общую слабость. При объективном обследовании выявлены отек шейной клетчатки до середины шеи, гиперемия миндалин, плотные серые трудноснимающиеся налеты на миндалинах и язычке, отек паратонзиллярных тканей. Заболевание было квалифицировано как токсическая дифтерия 1 степени. До введения противодифтерийной антитоксической сыворотки было проведено исследование показателей ОАС крови. Получены следующие результаты:
ГПЛ плазмы: 3,0 ед.

МДА сыворотки: 2,82 нмоль/мл.

Каталаза сыворотки: 123,7 мкат/л.

Каталаза эритроцитов: 107,4 кат/л.

СОД плазмы: 94,36 ед.

СОД эритроцитов: 229,9 ед.

Учитывая повышение уровня ГПЛ менее 3,8 ед. (3,0 ед.) и активность сывороточной каталазы, не превышающее 146,0 мкат/л (123,7 мкат/л), можно было ожидать сравнительно благоприятное течение заболевания, что и имело место в дальнейшем. Больная получала общепринятое этиотропное и патогенетическое лечение и была выписана на 23 день пребывания в стационаре в удовлетворительном состоянии.

Предлагаемый способ апробирован кафедрой инфекционных болезней и обеспечивает своевременное прогнозирование неблагоприятного течения токсической дифтерии.

Способ может быть использован в медицине, а именно в лечении и диагностике токсической дифтерии. У пациента проводят биохимическое исследование крови. Не позже пятого дня от начала заболевания определяют содержание в плазме крови гидроперекисей липидов (ГПЛ), а в сыворотке - каталазы. В случае одновременного повышения уровня ГПЛ от 3,8 ед. и выше и активности каталазы от 146,0 мкат/л и выше прогнозируют неблагоприятное развитие дифтерии. Предлагаемый способ обеспечивает своевременное прогнозирование неблагоприятного течения токсической дифтерии, обладает более высокой прогностической информативностью. 3 табл.

Способ прогнозирования неблагоприятного развития токсической дифтерии, включающий биохимическое исследование крови, отличающийся тем, что у больного токсической дифтерией не позже пятого дня от начала заболевания определяют содержание в плазме крови гидроперекисей липидов (ГПЛ), а в сыворотке - каталазы и в случае одновременного повышения уровня ГПЛ от 3,8 ед. и выше и активности каталазы от 146,0 мкат/л и выше прогнозируют неблагоприятное развитие дифтерии.