Настоящее изобретение относится к области медицины, в частности к клеточной терапии, и может найти применение для лечения синдрома приобретенного иммунодефицита (ВИЧ-инфекции), а также других заболеваний, обусловленных возникновением иммунодефицитов.
За последние годы в области исследований применения трупных человеческих эмбриональных тканей произошел разительный прогресс. Разрабатывается целый новый раздел терапии - клеточная терапия, которая позволяет с помощью клеточных суспензий, приготовленных из тканей эмбриона, восполнить недостаточную функциональную активность поврежденных, больных тканей. Клеточная трансплантация является привлекательной альтернативой для пересадки органов и тканей, так как преимущества эмбриональных клеток состоят в том, что они не сформировали жесткие индивидуальные признаки антигенной гистосовместимости, они легко приживляются и не вызывают реакции - трансплантат против хозяина. Кроме того, клетки обладают мощным жизненным потенциалом. Они пролиферируют, дифференцируются, являются источником огромного количества биологически активных веществ.
В настоящее время используют клеточные суспензии, приготовленные из эмбрионального мозга, костного мозга, печени, селезенки, тимуса, поджелудочной железы, кожно-мышечного лоскута.
Они применяются для лечения заболеваний крови: первичных и вторичных миелодепрессивных состояний, нарушений иммунитета, нервных заболеваний, сахарного диабета и других.
Первые наиболее успешные попытки использования клеточных суспензий в качестве лекарственных препаратов связаны с эмбриональной печенью человека.
В 1973 году впервые был создан лекарственный препарат на основе клеточной суспензии нативных клеток печени эмбриона человека 7-недельной гестации и за счет его введения был восстановлен гемопоэз больной апластической анемией (Kelemen Е. Second J. Gematol, 1973, v.10, N4, p.305-308).
За последние годы, варьируя различными методами приготовления клеточных суспензий, а также различными методиками их применения, исследователям удалось достичь положительных результатов при лечении первичных и вторичных миелодепрессивных состояний (Lucarelli G., Izzi Т., Porcelini A. Fetal liver transplantation. Alan R. Liss, 1985, p.237-249).
Перспективным направлением клинического применения означенных клеточных суспензий являются нарушения иммунитета, в частности, при тяжелом комбинированном иммунологическом дефиците. Здесь наиболее значительный клинический опыт принадлежит Touraine J.L. (202 трансплантации) - Transplantation Proceedings, 1993, v.25, N 1, p.1067-1078.
В настоящее время в работе Bacchetta R., Roncarolo M.J.Touraine J.L. J. Clin. Invest, 1993, v.91, March, p.l067-1078 показаны отдаленные результаты лечения двух больных с тяжелым комбинированным иммунодефицитом, когда не только восстановились показатели иммунитета у этих больных, но и показано наличие расщепленного химеризма и появление толерантности к антигенам как хозяина, так и донора.
У авторов также имеется свой опыт лечения иммунных нарушений при заболеваниях крови с использованием клеточных суспензий.
Однако применение этих препаратов для лечения больных ВИЧ-инфекцией (СПИД) авторам неизвестно.
Одним из основных механизмов ВИЧ-инфекции является специфическое взаимодействие белка оболочки ВИЧ (др 120) с белком CD4, экспрессированным на поверхности иммунных клеток, относящихся к классу Т4-лимфоцитов (хелперы/индукторы). Значительно снижается количество клеток, несущих CD4, CD8, CD12, изменяется показатель CD4/CD8, наблюдается поликлональная стимуляция В-лимфоцитов и плазматических клеток, снижается активность мононуклеарно-макрофагальной системы, уменьшается количество NK и DN-клеток.
У больных СПИД наблюдаются гематологические нарушения, которые являются следствием непосредственного угнетения гемопоэза ВИЧ-инфекцией, а также результатом медикаментозных воздействий, инфильтративных процессов воспалительного, инфекционного или неопластического характера. Эти нарушения приводят к лимфопении, лейкопении, анемии, тромбоцитопении.
Но особенно важным является поражение иммунной системы, от степени выраженности которой зависят клинические формы СПИД, сроки их развития, характер течения.
Известно лечение больных с развернутой клинической картиной СПИД с помощью трансплантации клеточной суспензии, полученной из костного мозга (Hassett J.M. Zaroulis Ch.G. Greenberg M.L. at all N.Engl. J. Med; 1983, v. 309, N1, p.665).
Однако данному способу лечения присущи определенные недостатки.
Во-первых, трансплантация клеточных суспензий на основе костного мозга требует тщательного исследования тканевой совместимости. Кроме того, необходимо проводить медикаментозную подготовку донора, реципиента, обеспечить бактериальное обеззараживание кишечника. Во-вторых, несмотря па идентичность HLA и проводимую подготовку острые формы функционирования клеток донорского костного мозга встречаются более чем у половины больных в виде эпидермальных некрозов, некрозов печени, гепатитов, микозного отторжения слизистой кишечника и др. В-третьих, восстановление иммунитета носит избирательный и кратковременный характер (до 4-6 недель) и объясняется поражением клеток костного мозга ВИЧ-инфекцией. Клиническое улучшение имеет нестойкий характер и оценивается как сомнительное.
В основу изобретения поставлена задача создать такой лекарственный препарат иммунозамещающего действия на основе клеточной суспензии, в котором, благодаря оптимальному подбору показателей клеточного состава, удалось бы усилить механизм иммунозамещения и достичь положительного результата при лечении больных СПИД (ВИЧ-инфекцией).
Поставленная задача решается тем, что в лекарственном препарате иммунозамещающего действия на основе клеточной суспензии, приготовленной из нативных или криоконсервированных гемопоэтических клеток печени и/или селезенки эмбриона человека от 5 до 12 недель гестации, согласно изобретению количество ядросодержащих клеток составляет от 5 до 200•106/мл, количество колониеобразующих единиц грануломоноцитарного ряда от 20 до 200•103/мл, количество колониеобразующих единиц бластов от 0,5 до 50•103/мл и количество ранних предшественников гемопоэза от 1 до 20•106/мл.
Эмпирически было установлено, что выбор именно таких показателей клеточного состава и их количественные соотношения позволяют достичь положительных результатов лечения СПИД.
Авторы полагают, что именно такой состав заявленного лекарственного препарата позволяет наиболее эффективно восполнять недостающие клеточные и гуморальные факторы иммунитета путем пролиферации и дифференцировки эмбриональных стволовых клеток у ВИЧ-инфицированных и больных СПИД. Кроме того, лекарственный препарат заявляемого состава, являясь источником биологически активных веществ, вызывает стимулирующий эффект, активизируя клеточные и гуморальные механизмы иммунитета реципиента.
Согласно изобретению целесообразно, чтобы при криоконсервировании лекарственный препарат дополнительно содержал диметилсульфоксид в количестве от 3 до 10%. Выбор нижнего предела обусловлен наибольшей сохранностью клеток при криоконсервировании, а верхнего, исходя из токсического действия препарата.
Поставленная задача решается также и тем, что в способе лечения СПИД, заключающемся во введении биологического материала иммунозамещающего действия, согласно изобретению в качестве биологического материала иммунозамещающего действия используют патентуемый лекарственный препарат.
Авторы считают, что лекарственные препараты на основе означенных клеточных суспензий ранее никогда не использовались для лечения больных СПИД (ВИЧ-инфекцией). Однако длительная исследовательская работа по изучению механизмов воздействия препаратов на основе клеточных суспензий на процессы лечения различных заболеваний позволяет утверждать, что клеточные суспензии заявляемого состава весьма успешно могут быть использованы для лечения больных СПИД.
Применение клеточных суспензий на основе гемопоэтических и стволовых клеток эмбриональных кроветворных органов человека основано на следующих механизмах:
1. Стволовые клетки трансформируются под действием гемопоэческих факторов в те ростки кроветворения, недостаток которых имеется в организме.
2. Центральные органы иммуногенеза у больных СПИД нарушаются в меньшей степени, чем периферическое звено, представленное Т-лимфоцитами. Поэтому лимфоциты эмбрионального происхождения проходят "обучение" в неизмененных центральных органах иммунной системы.
3. У больных СПИД имеется существенное угнетение реакции гиперчувствительности замедленного типа вплоть до полной анергии, вот почему возможен длительный эффект замещения без коррекции иммунодепрессантами.
4. Наряду с коррекцией лимфоидного ростка гемопоэза происходит восстановление миелоидного ростка, включая мегакариоцитарный, что находит выражение в увеличении количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов.
5. Вопрос устойчивости эмбриональных стволовых клеток гемопоэза к ВИЧ-инфекции остается открытым, хотя имеются клинические данные, свидетельствующие об этом явлении.
6. Имеются обнадеживающие результаты при проведении комбинированного лечения, когда предварительная этиотропная терапия уменьшает вероятность поражения эмбриональной ткани ВИЧ за счет нарушения процесса репродукции вируса.
7. Способ лечения гемопоэтическими клетками эмбриональной печени и/или селезенки человека и стволовыми клетками гемопоэза эмбриональных кроветворных органов человека особенно показаны пациентам с непереносимостью AZT и DDL
Возможность использования клеточных суспензий, полученных из гемопоэтических клеток и стволовых клеток гемопоэза эмбриональных кроветворных органов человека, подтверждается клиническими испытаниями, проведенными авторами. У больных наблюдали значительное улучшение показателей иммунного статуса, достижение клинической и иммунологической ремиссии.
В соответствии с одним из аспектов данного изобретения целесообразно патентуемый лекарственный препарат вводить в дозе от 0,5 мл до 8 мл.
Кроме того, желательно, чтобы этот препарат был введен до и/или после терапии этиотропными препаратами.
Лекарственный препарат целесообразно выбирать из сформированного тканевого банка различных образцов с учетом индивидуальных показателей больного, причем при повторном введении использовать препарат того же образца.
Далее сущность изобретения станет более понятной из приведенного ниже подробного описания его осуществления, изложенного в конкретных примерах его реализации.
Лучший вариант осуществления изобретения
Лекарственный препарат заявляемого состава можно изготовить, используя следующую методику.
Эмбрионы получают при искусственном прерывании беременности у здоровых, предварительно обследованных на наличие вирусных и гемических инфекций женщин, используя эмбрионы сроком от 5 до 12 недель гестации. В целях сохранения целостности эмбриона аборт проводят вакуумэкстракцией. Эмбрион переносят в стерильный сосуд с раствором Хэнкса и антибиотика (группа аминогликозидов). Дальнейшая работа проводится в стерильных условиях бокса.
Эмбрионы переносятся в стерильные чашки Петри, заполненные раствором Хэнкса с антибиотиком, где, осторожно вскрыв брюшную полость, извлекают печень, селезенку, из которых отдельно готовят клеточные суспензии.
Кроветворящие органы помещают в гомогенизаторы, разрезают на небольшие фрагменты и измельчают до получения однородной массы. Клетки смывают со стенок и пестика гомогенизатора раствором Хэнкса в мерные пробирки, пропуская через фильтр для переливания препаратов крови, а затем через иглы уменьшающегося диаметра. Часть приготовленной суспензии переносят в полиэтиленовый контейнер и герметично закрывают. Эту часть используют для трансплантации нативной клеточной суспензии. Другую часть подвергают криоконсервации.
В качестве криопротектора используют диметилсульфоксид химически чистый (ДМСО). Перед использованием ДМСО пропускают через миллипоровый фильтр с диаметром пор 0,22 мкм. При легком перемешивании клеточной суспензии добавляют по каплям равный объем рабочего раствора ДМСО в количестве от 3 до 10%.
Клеточные суспензии разливают в полиэтиленовые контейнеры в зависимости от дальнейших целей объемом от 0,5 до 2 мл. Контейнеры помещают в камеру программного замораживателя, работающего на жидком азоте и замораживают до -196oC.
Криоконсервированные клеточные суспензии хранятся в банке эмбриональных тканей при - 196oC.
После приготовления клеточной суспензии определяют следующие показатели:
1-й - количество ядросодержащих клеток в 1 мл;
2-й - количество колониеобразующих единиц грануломоноцитарного ряда (КОЕ ГМ) в 1 мл;
3-й - количество колониеобразующих единиц бластов (КОЕ бл.) в 1 мл;
4-й - количество ранних предшественников гемопоэза (CD34) в 1 мл.
Далее формируют тканевый банк с учетом того, чтобы исследуемые показатели находились в следующих пределах:
1-й - от 5 до 200•106/мл
2-й - от 20 до 200•103/мл
3-й - от 0,5 до 50•103/мл
4-й - от 1 до 20•106/мл
Пренатальная диагностика включает в себя исследование на наличие сифилиса, ВИЧ- инфекции, вирусного гепатита B и C, токсоплазмоза, цитомегаловирусной инфекции. Проводят исследования содержимого контейнеров на бактериальную стерильность.
Фетальная диагностика включает исследования на наличие ВИЧ-инфекции, вирусного гепатита B и C, цитомегаловируса, вируса краснухи, герпеса и токсоплазмоза.
В зависимости от варианта клинического лечения лекарственный препарат вводят одним из следующих методов:
- введение (трансплантация) части нативных гемопоэтических клеток, в дальнейшем - введение криоконсервированных клеток, хранящихся в банке данного образца;
- введение всего нативного образца;
- введение части или всего криоконсервированного материала данного образца.
До и в ряде случаев после трансплантации клеточной суспензии следует провести этиотропное лечение больного, например, азидотимидином в субмаксимальных дозах до появления клинического положительного эффекта, улучшения иммунологических показателей, уменьшения титра антител к ВИЧ и явлений миелодепрессии.
Эффект лечения оценивают по:
- длительности клинической ремиссии;
- иммунологическим показателям - общему количеству лимфоцитов, содержанию CD3, CD4, CD8, коэффициенту CD4/CD8;
- количеству эритроцитов периферической крови, содержащей фетальный гемоглобин.
Подробное описание использования патентуемого изобретения в имеющейся у авторов клинической практике представлено в нижеследующих примерах.
Пример 1
Больная 920034 "Т", 37 лет, поступила в блок СПИД КНИИ ЭИБ 23.02.93 г.
Диагноз: СПИД клинический. Пневмоцистная пневмония в стадии реконвалесценции. Хронический бронхит курильщика. Состояние после перенесенного энцефалита. Кандидоз кишечника и дыхательных путей. Хронический гастрит, стадия нестойкой ремиссии. Хронический холецистит, стадия нестойкой ремиссии.
ВИЧ-инфекция выявлена в 1990 г., до сентября 1992 г. лечилась в Москве. Впервые в блоке СПИД КНИИ ЭИБ находилась 17.09.92-26.10.92 г. Перенесла пнемоцистную пневмонию.
23.10.92 г. переведена в отделение реанимации с герпетическим энцефалитом, где, после спинно-мозговой пункции, развилась нижняя параплегия, а также неврит лицевого нерва, как следствие энцефалита.
Предъявляла жалобы на постоянные головные боли, периодически усиливающиеся, сопровождающиеся тошнотой, иногда рвотой, а также на головокружения, периодическую потерю сознания. Также беспокоил кашель с отхождением небольшого количества мокроты, ощущение ломоты в костях и суставах, слабость мышц нижних конечностей (ходит, придерживаясь за опору), асимметрия лица (правосторонний неврит лицевого нерва). Температура тела периодически повышалась до 39oC.
Объективно: кожные покровы бледные, чистые. Периферические лимфатические узлы мелкие, до 0,5 см в диаметре, подвижные, эластической консистенции, безболезненные. Тоны сердца звучные, ритмичные. Дыхание в легких жесткое, рассеянные сухие хрипы над всей поверхностью.
Живот мягкий, чувствительный при пальпации в эпигастрии и правом подреберье. Стул и диурез - без особенностей.
Первая трансплантация клеточной суспензии, изготовленной из гемопоэтических клеток эмбриональной печени человека, проведена 4.03.93 г. Введено 2,5 мл.
Характеристика клеточной суспензии:
образец 3037 C-12H, возраст эмбриона 9 недель, количество ядросодержащих клеток - 98•106/мл, КОЕ ГМ - 26•103/мл. , КОЕ бл.- 1,4•103/мл, CD34 - 2,4•106/мл. Способ введения - внутривенный.
После трансплантации отмечалась положительная динамика: улучшилось общее состояние, повысился эмоциональный тонус, улучшился аппетит. Через несколько дней уменьшился кашель; больная отметила, что стало легче ходить, снизилась лихорадка. В легких сохранялось жесткое дыхание, однако хрипы не выслушивались.
29.04.93 г. проведена повторная трансплантация (тот же образец, введено 2,5 мл). Выписана 30.04.93 г. (по семейным обстоятельствам) в удовлетворительном состоянии.
Повторно находилась в блоке СПИД 13.05.93 -17.07.93 г. Сохранялись головные боли, головокружения, боли в костях и суставах. Однако температура тела не повышалась, отмечался хороший аппетит, сон, не было кашля, уменьшилась асимметрия лица, на небольшие расстояния больная ходила без опоры.
После выписки 7.07.93 г. находилась по месту жительства в Одессе, где перенесла опоясывающий лишай волосистой части головы, сопровождавшийся повышением температуры тела, энцефалопатией. Высыпания продолжались до 4.08.93 г.
9.09.93 г. поступила в блок СПИД с жалобами на головную боль, иррадирующую в правую и левую глазницы, ноющую боль и затруднение движений в суставах, повышение температуры тела до 37,3 - 38,2oC, ноющую боль в эпигастрии, кашель с отхождением густой мокроты гнойного характера. В легких выслушивалось жесткое дыхание, сухие хрипы с обеих сторон (19.10.93 г. пневмоцисты в 48% полей зрения).
5.11.93 г. проведена третья трансплантация клеточной суспензии того же образца (1,5 мл). 9.11.93 г. отмечалось уменьшение кашля, температура тела 37,2oC. Пневмоцисты не выявлялись. Выписана 11.11.93 г. в удовлетворительном состоянии.
В таблицах 1 - 6 приведены результаты лабораторных и иммунологических исследований (см. в конце описания).
В настоящее время состояние удовлетворительное. Наблюдение продолжается.
Пример 2
Больной 930002 "В" поступил в блок СПИД КНИИ ЭИБ 23.02.93 г. Диагноз: СПИД клинический. Пневмоцистная пневмония в стадии реконвалесценции. Кандидоз ротовой полости. Хронический гепатит с переходом в цирроз. Хроническая железодефицитная анемия. Хронический гастродуоденит, умеренное обострение. Дивертикул пищевода. Рецидивирующий внутренний геморрой, стадия обострения.
Впервые положительная реакция на ВИЧ в 1992 г. Находился в блоке СПИД с 29.12.92 г. по 11.02.93 г. В это время перенес пневмоцистную пневмонию.
Рентгенография органов грудной клетки 15.01.93 г. - бронхососудистый рисунок усилен, фиброзно изменен, особенно в нижних долях. Корни тяжисты, в правом - крупный кальцит. Заключение: Хронический бронхит. Во время лечения получал бисептол, нистатин, мукалтин, поливитамины. Выписан в удовлетворительном состоянии.
При повторном поступлении 23.02.93 г. предъявлял жалобы на слабость, быструю утомляемость, плохой аппетит.
Объективно: кожные покровы бледные. Периферические лимфатические узлы: пальпируются заднешейные, подчелюстные, локтевые, паховые, до 1,0 см в диаметре, подвижные, безболезненные, эластической консистенции.
Тоны сердца умеренно ослабленной звучности, ритмичные. В легких дыхание ослаблено, с жестким оттенком. Живот мягкий, безболезненный. Край печени на 4 см выступает из-под реберной дуги. Селезенка не пальпируется. Периферических отеков нет.
4.03.93 г. больному проведена трансплантация клеточной суспензии, полученной из гемопоэтических клеток эмбриональной печени и селезенки. Характеристика клеточной суспензии: образец 3037C-37HL, возраст эмбриона 7 недель, введено 2,5 мл, количество ядросодержащих клеток - 37•106/мл, КОЕ-ГМ - 22•103/мл, КОЕ бл. - 1,8•103/мл, CD34 - 3,4•106/мл. Способ введения - внутривенный.
После трансплантации в течение 2-3 дней отмечалось улучшение аппетита, уменьшилась слабость. Отмечалось снижение гемоглобина и положительная реакция Грегерсена, однако, при осмотре хирургом кровотечения не обнаружено. По назначению гематолога принимал тардиферон, состояние больного было стабильным.
В таблицах 7-12 приведены результаты лабораторных и иммунологических исследований (см. в конце описания).
Выписан в удовлетворительном состоянии. Наблюдение продолжается.
Пример 3
Больной 910004 "H", 48 лет, поступил в блок СПИД КНИИ ЭИБ 24.05.93 г.
Диагноз: СПИД клинический. Пневмоцистная пневмония в стадии реконвалесценции. Оникомикоз. Синдром WPW.
Впервые положительная реакция на ВИЧ выявлена в 1991 г.
В октябре 1992 г. перенес пневмоцистную пневмонию.
Поступил в плановом порядке на обследование.
Предъявлял жалобы на периодическое повышение температуры тела до субфебрильных цифр, боли в нижних отделах спины. На рентгенограмме органов грудной клетки 2.06.93 г. : легочные поля без видимой патологии. Определяются расширения тени средостения по правому контуру в области отхождения верхнедолевого бронха и корня легкого с наибольшей вероятностью за счет увеличения лимфатических узлов.
3.06.93 г. проведена трансплантация клеточной суспензии, приготовленной из гемопоэтических клеток эмбриональной печени человека. Характеристика клеточной суспензии: образец 3037С-24Н, возраст эмбриона 6 недель, введено 1,5 мл, количество клеток - 14•106/мл, КОЕ ГМ - 27•103/мл, КОЕ бл. - 3,4•103/мл, CD34 - 3,4•106/мл.
После проведенной трансплантации наблюдалось улучшение общего состояния, снижение температуры, ослабление болей в спине.
1.07.93 г. начал лечебное голодание, во время которого возникла слабость, потливость. С 15.07.93 г. - стойкий субфебрилитет, редкий кашель по утрам с небольшим количеством мокроты.
23.07.93 г. диагностирована правосторонняя нижнедолевая пневмония. Назначен цефазолин, бисептол.
С 6.08.93 г. получал гентамицин, бисептол, цефазолин, мефенаминовую кислоту.
Рентгенография органов грудной клетки 20.08.93 г. - пневмоническая инфильтрация в правом легком разрешилась.
Выписан 25.08.93 г. в удовлетворительном состоянии.
В таблицах 13-17 приведены результаты лабораторных и иммунологических исследований (см. в конце описания).
Больной периодически обследуется в блоке СПИД. Жалоб не предъявляет, сохраняется удовлетворительное состояние.
Наблюдение продолжается.
Пример 4
Больной 900007 "Г", 30 лет, поступил в блок СПИД КНИИ ЭИБ 31.05.93 г.
Диагноз: ВИЧ-инфекция, носитель. Хронический бронхит курильщика.
ВИЧ-инфекция выявлена в 1990 г., когда находился в стационаре по поводу холецистита.
17.05.-7.06.90 г. находился на лечении в блоке СПИД по поводу лакунарной ангины, с этого времени находится на диспансерном учете, периодически обследуется.
3.06.93 г. пациенту проведена трансплантация клеточной суспензии, приготовленной из нативных гемопоэтических клеток эмбриональной печени человека. Характеристика клеточной суспензии: образец 3037- 53Н, возраст эмбриона 8 недель, введено 3 мл, количество ядросодержащих клеток 78•106/мл, КОЕ ГМ - 44•103/мл, КОЕ бл. - 2,4•103/мл, CD34 - 2,7•106/мл. Способ введения - внутривенный.
Трансплантацию больной перенес удовлетворительно, изменений в самочувствии не отмечено.
23.07.93 г. находился на лечении в блоке СПИД в связи с острой левосторонней нижнедолевой пневмонией (Рентгенография органов грудной клетки 23.07.94 г. : в нижней доле левого легкого инфильтративные изменения в виде очаговых теней. Корень реактивен. Правое легкое без особенностей). При исследовании мокроты пневмоцисты не выявлены. В общем состоянии отмечалась выраженная слабость, потливость, кашель с отхождением небольшого количества мокроты. Больной получал доксициклин, бисептол, нистатин в течение 20 дней и по окончании курса выписан в удовлетворительном состоянии.
1.09.93 г. проведена повторная трансплантация криоконсервированной клеточной суспензии (тот же образец), которую пациент перенес удовлетворительно, 16.09.93 г. отмечался подъем температуры тела 37,7oC, сопровождавшийся слабостью, ощущением ломоты во всем теле, головной болью, 17.09.93 г. состояние нормализовалось.
В таблицах 18-23 приведены результаты лабораторных и иммунологических исследований (см. в конце описания).
Выписан 24.09.93 г. в удовлетворительном состоянии.
До настоящего времени состояние больного удовлетворительное.
Пример 5
Больной 930024 "Д", 36 лет, поступил в блок СПИД КНИИ ЭИБ 27.08.93 г.
Диагноз: СПИД клинический. Генерализованная лимфаденопатия. Кандидоз ротовой полости. Лямблиоз кишечника. Энтерит протейной этиологии. Гипохромная анемия.
Выявлен как ВИЧ-инфицированный в 1993 году, в связи с длительной (3 месяца) лихорадкой до 38-38,5oC, не поддающейся лечению антибиотиками (лечился сам), а также столь же длительной диареей, в связи с чем и был обследован на ВИЧ.
При поступлении предъявлял жалобы на сильную слабость, потливость, повышение температуры до 39oC, головные боли, плохой сон, стул 4 раза в сутки, жидкий. Похудел на 10 кг за последние несколько месяцев.
Объективно: кожные покровы бледные. Периферические лимфоузлы подвижные, безболезненные, эластической консистенции, заднешейные - множественные до 0,5 см, подмышечные - группами 3-5 до 1 см, паховые - 0,5 см. Тоны сердца ослабленной звучности, ритмичные, тахикардия. Дыхание в легких везикулярное, хрипы не выслушиваются. Живот мягкий, безболезненный. Край печени на 2 см выступает из-под реберной дуги. Периферических отеков нет.
28.08.93 г. рентгенограмма органов грудной клетки: в верхней доле левого легкого инфильтративные изменения на фоне усиленного бронхососудистого рисунка. Левый корень расширен, бесструктурен. Заключение: пневмония с локализацией в верхней доле левого легкого.
При осмотре ЛОР: хронический субатрофический фарингит.
Назначено лечение: цефазолин, бисептол, ретровир, метронидазол.
Несмотря на проводимую терапию лихорадка не снижалась, продолжалась диарея, усиливались слабость, прогрессировала анемия, увеличились лимфоузлы.
Поставлен диагноз: СПИД клинический. Септическое состояние.
12.09.93 г. больному проведена трансплантация клеточной суспензии эмбриональной печени человека. Характеристика клеточной суспензии: образец 3037-46Н, возраст эмбриона 10 недель, введено 4 мл, количество ядросодержащих клеток 110•106/мл, КОЕ ГМ - 39•103/мл, КОЕ бл. - 2,0•103/мл, CD34 1,5•106/мл. Способ введения - внутрибрюшинный.
После трансплантации состояние больного несколько улучшилось. Снизилась температура до субфибрильной, уменьшились явления интоксикации, слабость, потливость.
В таблицах 24-29 приведены результаты лабораторных и иммунологических исследований (см. в конце описания).
По настоянию больного был выписан домой. Разрешение пневмонии в течение месяца. В настоящее время состояние удовлетворительное, продолжает прием ретровира.
Пример 6
Больная 91005 "Н", 25 лет, поступила в блок СПИД КНИИ ЭИБ 21.04.93 г.
Диагноз: СПИД клинический. Пневмоцистная пневмония в стадии реконвалисценции. Кандидоз слизистой рта, бронхов. Аллергический блефароконъюнктивит. Хронический гепатит с переходом в цирроз. Портальная гипертензия. Асцит. Гепатолиенальный синдром.
ВИЧ-инфекция диагностирована в 1989 году, наблюдалась в Москве, получала азидотимидин.
С 15.12.91 г. наблюдается в блоке СПИД.
С 11.11. по 22.12.92 г. лечилась в блоке СПИД с диагнозом СПИД. Пневмоцистная пневмония. С 24.11 по 22.12.92 г. проводилось лечение азидотимидином в дозе 1000 мг/сутки, при выписке было рекомендовано продолжать прием 500 мг в сутки в течение двух недель.
С 31.01 по 16.03.93 г. находилась на лечении в блоке СПИД. Принимала ретровир с 18.02.93 г в дозе 1000 мг в сутки, с 6.03. по 16.03.93 г 750 мг в сутки, выписана с рекомендацией продолжать прием ретровира 500 мг в сутки в течение нескольких недель. За период лечения ретровиром улучшилось самочувствие (уменьшился кашель, увеличился вес тела на 4-5 кг), улучшились показания клеточного иммунитета.
При поступлении 21.04.93 г. предъявляла жалобы на слабость, сухой кашель, ноющую боль в правом подреберье, периодические носовые кровотечения, чувство жжения языка, быструю утомляемость, боль в горле при глотании, жжение в глазах.
Объективно: общее состояние относительно удовлетворительное. Кожные покровы обычные. Пальпируются периферические лимфоузлы: подчелюстные, заднешейные в виде цепочек в диаметре до 0.5 см, подмышечные - группами по 3- 5 в диаметре 0,7-1,0 см, лимфоузлы эластической консистенции, подвижные, безболезненные.
Тоны сердца умеренно ослабленной звучности, ритмичные, систолический шум на верхушке. В легких дыхание везикулярное. Живот мягкий, чувствительный в правом подреберье, несколько увеличен в объеме за счет асцита. Край печени на 5 см выступает из-под реберной дуги. Пальпируется большая плотная селезенка.
3.05.93 г. проведена трансплантация клеточной суспензии гемопоэтических клеток эмбриональной печени человека, которую больная перенесла удовлетворительно. Характеристика клеточной суспензии: образец 3037-81Н, возраст эмбриона 7 недель, введено 2 мл, количество ядросодержащих клеток 28•106/мл, КОЕ ГМ - 23•103/мл, КОЕ бл. - 2,4•103/мл, CD34 - 1,8•106/мл. Способ введения - внутривенный.
После трансплантации отмечалось улучшение аппетита, больная почувствовала себя бодрее.
26.05.93 г. выписана в удовлетворительном состоянии. От дальнейшего приема ретровира категорически отказалась.
В таблицах 30-35 приведены результаты лабораторных и иммунологических исследований (см. в конце описания).
Наблюдение продолжается.
Пример 7
Больной 930009 "В", 41 год, поступил в блок СПИД КНИИ ЭИБ 24.03.93 г.
Диагноз: СПИД клинический. Диссеминированный туберкулез легких. Кандидоз полости рта, кишечника.
ВИЧ-инфекция выявлена в марте 1993 года. С конца декабря 1992 года отмечает общее недомогание, головную боль, повышение температуры до 37,3-38oC, боль в суставах нижних конечностей и мышцах голеней, ощущение "ломоты" во всех костях и суставах, познабливание.
2.02.93 г. впервые обратился к врачу, установлен диагноз полиартрит.
Консультирован гематологом 11.02.93 г.: обращает на себя внимание увеличение печени и селезенки. Необходимо обследование больного в плане хронического гепатита, проявлений гиперспленизма (Нв-96 г/л, тромб.-124000).
Принимал аскорбиновую кислоту, фолиевую кислоту, витамины B1, B6, B12, никотиновую кислоту, спленин, анальгин, индометацин.
2.03.93 г. анализ крови: Нв- 105 г/л, Эр - 3,8•1012/л, Ц.п. - 0,9, тромбоциты - 135•109/л, СОЭ - 5 мм/час.
С 4.03.93 г. принимал преднизолон. После начала курса отмечал улучшение самочувствия (уменьшились боли, ощущение скованности в суставах). С 28.03.93 г. получал ретровир. С 6.04.93 г. бисептол - внутривенно.
Рентгенография органов грудной клетки 7.04.93г.: на фоне пневмосклероза на всем протяжении легких множественные очаговые тени инфильтративного характера. Корни расширены. Заключение: мелкоочаговую пневмонию следует дифференцировать с очаговым туберкулезом легких.
После консультации фтизиатра назначена противотуберкулезная терапия - рифампицин, этамбутол, изониазид, стрептомицин. С 21.04.93 г. температура тела снизилась и в дальнейшем держалась на 36,4-36,8oC.
Со снижением температуры улучшилось общее состояние, исчезла одышка, уменьшился кашель, слабость. Однако продолжали беспокоить ноющие боли в суставах, особенно кистей рук, периодически тошнота, головные боли, головокружение, быстрая утомляемость.
15.07.93 г. была проведена трансплантация клеточной суспензии гемопоэтических клеток эмбриональной печени человека. Характеристика клеточной суспензии: образец 3037- 19Н, возраст эмбриона 10 недель, введено 4 мл, количество ядросодержащих клеток 142•106/мл, КОЕ ГМ - 64•103/мл, КОЕ бл. - 1,3•103/мл, CD34 1,8•106/мл. Способ введения - внутрикостный.
Трансплантацию больной перенес удовлетворительно, хотя на следующий день утром повысилась температура тела до 37.2oC. Вечером температура нормализовалась, 20.07.93 г. утром температура тела у больного повысилась до 38oC, появилась гиперемия кожи предплечий, нижних конечностей, сопровождающаяся зудом (в общем анализе крови эозинофилов 9%). На следующий день после приема диазолина состояние нормализовалось.
С 27.07.93 г. больной отмечает впервые за все время пребывания в стационаре удовлетворительное самочувствие. Уменьшились головные боли и головокружения, утомляемость, нет болей в суставах и правом подреберье, улучшился аппетит, больной может выполнять физическую работу.
Удовлетворительное самочувствие было на протяжении недели, 6.08.93 г. появилась незначительная гиперемия кожи груди, верхних и нижних конечностей, сопровождающаяся зудом и повышением температуры до 38oC. Температура держалась два дня, однако не сопровождалась значительным изменением самочувствия.
В течение нескольких дней состояние нормализовалось.
10.09.93 г. выписан домой в удовлетворительном состоянии с рекомендациями продолжить противотуберкулезную терапию.
В таблицах 36-41 приведены результаты лабораторных и иммунологических исследований (см. в конце описания).
Наблюдение продолжается.
Таким образом, предлагаемый лекарственный препарат и способ лечения синдрома приобретенного иммунодефицита (ВИЧ-инфекции) с использованием данного препарата позволяют:
- достичь клинической ремиссии заболевания;
- улучшить иммунологические показатели;
- восстановить гемопоэз;
- уменьшить явление интоксикации.
Заявляемый лекарственный препарат на основе клеточной суспензии может быть использован как самостоятельно, особенно в случаях непереносимости и наличия противопоказаний к применению этиотропной терапии, так и в схемах комбинированного лечения.
Кроме того, клеточные суспензии заявляемого состава могут храниться в аптеках-банках криоконсервированных тканей и, с учетом отсутствия необходимости определения антигенов гистосовместимости, предполагают, при наличии показаний, более простое применение, чем, например, трансфузия крови.
Изобретение относится к медицине, в частности к клеточной терапии. Патентуется лекарственный препарат, характеризующийся определенным составом и количественными показателями клеточной суспензии, полученной из нативных или криоконсервированных гемопоэтических клеток эмбриональной печени и/или селезенки человека. Кроме того, патентуется способ лечения синдрома приобретенного иммунодефицита (ВИЧ-инфекции) путем введения означенного лекарственного препарата, который выбирают из сформированного тканевого банка различных образцов с учетом индивидуальных показателей больного, причем при повторном введении используют препарат того же образца. Техническим результатом изобретения является расширение арсенала средств для борьбы с ВИЧ-инфекцией. 2 с. и 4 з.п. ф-лы, 41 табл.
| Hassett J.M., Zaroulis Ch.G | |||
| et al., N.Engl | |||
| J.Med., 1983, v.309, №1, p.665 | |||
| Балаян М.С | |||
| Приобретенный иммунодефицитный синдром | |||
| Клин.мед | |||
| Колосниковая решетка с чередующимися неподвижными и движущимися возвратно-поступательно колосниками | 1917 |
|
SU1984A1 |
