СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИИ ПЕЧЕНИ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА Российский патент 1999 года по МПК A61K35/407 

Изобретение относится к медицине, а именно гепатологии, и может найти применение в реанимационных отделениях и отделениях интенсивной терапии при лечении острой и хронической печеночной недостаточности.

Наиболее близким к изобретению является способ лечения печеночной недостаточности при хронических заболеваниях печени путем перорального введения в желудочно-кишечный тракт взвеси гепатоцитов в растворе Хенкса из расчета и 2 мл на 100 г массы тела больного при концентрации 2x10 клеток в 1 мл за 30-40 минут до приема пищи через каждые два дня на третий до наступления устойчивой ремиссии, причем до и после приема взвеси гепатоцитов вводят 100 мл минеральной воды (Авторское свидетельство N 2063760, A 61 K 35/407).

Недостатками известного способа являются;
1. Невозможность длительного хранения взвеси, так как снижается функциональная активность гепатоцитов, а следовательно, эффективность лечения печеночной недостаточности.

2. Взвесь гепатоцитов, попадая в желудок, подвергается ферментной обработке и разрушению, что снижает функциональную активность гепатоцитов, а следовательно, и эффективность лечения.

3. Взвесь гепатоцитов требует дорогостоящих средств хранения, например, среда 199, раствор Хенкса.

4. Предложенная суточная доза взвеси гепатоцитов (2 мл на 100 г массы при концентрации 2x10 клеток в 1 мл) не может быть рассчитана на предсказуемый лечебный эффект, так как кислотность в желудке может колебаться в различных пределах: от низких до ее высоких значений. В связи с этим определить количество сохранившихся функциональных гепатоцитов не представляется возможным, поэтому лечебная доза гепатоцитов колеблется в различных пределах.

5. Пероральный прием взвеси гепатоцитов может вызывать у отдельных пациентов эстетически неприятные ощущения. Необходимость приема минеральной воды вызывает некоторую неопределенность: а) минеральная вода при заболеваниях желудочно-кишечного тракта подбирается соответственно заболевают; б) непонятно, почему необходимо принимать минеральную воду, с расчетом на какой эффект (содержание электролитов, pH раствора, наличие углекислого газа?),
Задачей изобретения является повышение эффективности лечения и упрощение способа.

Поставленная задача решается тем, что в способе лечения печеночной недостаточности при заболеваниях печени различного генеза путем перорального введения функционально активных гепатоцитов, ксеногенные лиофилизированные гепатоциты используют в капсульной форме по 0,2 г, которые вводят по 1-2 капсулы за 1,5 часа до еды 2-3 раза в день в течение 10 дней, причем при острой печеночной недостаточности вводят по 2 капсулы 3 раза в день в течение 10-15 дней, а затем по 1 капсуле 3 раза в день в течение следующих 10-15 дней, а при хронической печеночной недостаточности вводят по 2 капсулы 2 раза в день в течение 10 дней, а затем по 1 капсуле 2 раза в день в течение 14 дней.

Ксеногенные лиофилизированные гепатоциты при длительном хранении при комнатной температуре до 3-х лет сохраняют свою функциональную активность.

Клинический эффект достигается за счет поступления функционально активных гепатоцитов в составе химуса в тонкий отдел кишечника, откуда активные факторы гепатоцитов - фактор роста, энзимы - за счет пиноцитоза в неизменном виде и активном состоянии по кровеносной и лимфатической системам поступают в печень. Активные факторы гепатоцитов оказывают свой специфический эффект на печень больного, заключающийся в активации регенераторных процессов в пораженной печени, стимуляции синтезирующей и детоксикационной функций сохранившихся функционально активных клеток печени больного.

Для обоснования способа лечения и определения терапевтической дозы были проведены экспериментальные исследования на клинически здоровых крысах (106 голов) и больных собаках различного возраста и пород (1512 голов) со средней массой 10 кг.

Подопытные крысы были разделены на три группы.

Так, в первой группе для выявления побочного действия (токсичности) белым крысам вводили перорально 5 мл раствора с содержанием активного вещества 0,3; 0,4; 0,6 и 1,0 г. Как показали результаты проведенных исследований, препарат не оказывал токсического действия на экспериментальных животных даже при введении высоких концентраций. Экспериментальные животные в период наблюдения в течение 14 суток не погибали.

Общее клиническое состояние животных, а также динамика гематологических и биохимических исследований в период наблюдения были удовлетворительными.

Во второй группе животных модель токсического гепатита получали путем введения животным четыреххлористого углерода, предварительно разведенного в стерильном растительном масле в соотношении 1:1 в дозе 0,6 мл/кг перорально в течение трех дней.

Для определения оптимальной терапевтической дозы лиофилизированных ксеногенных гепатоцитов использовали широкий диапазон доз - от 0,06 до 0,50 мг/кг массы тела. Критерием терапевтической дозы считали такое количество препарата, при введении которого снижалась летальность, улучшалось клиническое состояние животных. Препарат вводили однократно или двукратно в течение пяти дней. Анализ полученных результатов показал зависимость выживаемости опытных животных от количества вводимого препарата (дозы), а также кратности введения. Так, при двукратном введении одной и той дозы препарата в течение 5 дней процент летальности снижался во всех опытных группах в 1,3-1,7 раза по сравнению с группами, где препарат вводился однократно, а при увеличении дозы препаратов до 0,5 мг/кг массы тела данный показатель снижается в 4-5 раз. На основании полученных данных можно считать оптимальной терапевтической дозой 0,20-0,50 мг/кг массы тела двукратно в течение 5 дней. Выявленные оптимальные терапевтические дозы препаратов подтверждали еще раз методом фармакологического скрининга при введении их животным с различной степенью поражения печени.

Проведенные исследования позволили установить целесообразность применения препарата при токсическом гепатите в указанных дозах, что позволяет снизить гибель животных в 2-5 раз и увеличить продолжительность их жизни.

В третьей группе опытных животных определяли кинетику перорально введенных лиофилизированных гепатоцитов, окрашенных трипановым синим. Для этого через определенные интервалы времени осуществлялась эутаназия животных. Установили движение клеточной суспензии в течение суток, часть этих клеток доходит до толстого отдела кишечника.

Данные результатов опытных исследований на крысах были подтверждены при лечении собак, с острой и хронической печеночной недостаточностью.

Критерием оценки эффективности препарата являлись показатели клинического состояния, положительная динамика снижения концентрации токсических веществ в крови и активности цитоплазматических ферментов сыворотки крови. Расчетным путем была составлена оптимальная терапевтическая доза предложенного препарата - 0,2 г в капсуле.

Определялась лечебная эффективность капсул препарата с содержанием активного вещества 0,2 г. Препарат назначали по 1 капсуле утром и вечером до кормления животного в течение пяти или десяти дней в зависимости от динамики клинических и биохимических показателей. Результаты лечения коррелировали с динамикой биохимических показателей (табл. 1 в конце описания). В таблице 1 представлены результаты биохимических исследований крови при лечении печеночной недостаточности в эксперименте.

Как видно из таблицы, в процессе лечения происходит улучшение клинико-гематологических показателей: стабилизация артериального давления, урежение пульса, частоты дыхания; нормализация уровня протеинемии, глюкоземии и холестеринемии; снижение концентрации токсических веществ, активности некоторых печеночных ферментов и т.д.

Полученные результаты легли в основу перорального применения лиофилизированных гепатоцитов в клинической практике.

Способ осуществляют следующим образом: при острой печеночной недостаточности больной перорально принимает лиофилизированные гепатоциты, содержащие по 0,2 г, в капсульной форме по 2 капсулы три раза в день за 1,5 часа до еды в течение 10-15 дней, затем по 1 капсуле три раза в день в течение следующих 10-15 дней; при хронической печеночной недостаточности в стадии декомпенсации больные перорально принимают по 2 капсулы два раза в день за 1,5 часа до еды в течение 10 дней, затем по 1 капсуле два раза в день в течение 14 дней.

Клинический пример
Больная Огородная И. В. , 35 лет, N истории болезни 11525, поступила 02.08.97 г., выписана 26.08.97 г. Диагноз: Передозировка парацетамолом, острая печеночно-почечная недостаточность.

При поступлении состояние тяжелое, в сознании, заторможена, беспокоит резкая слабость, головная боль. При осмотре: отмечается выраженная желтушность кожных покровов, геморрагии на коже туловища, инъецирование склер. В легких дыхание жесткое, хрипов нет. Гемодинамика стабильная, ЧСС - 78 уд/мин, АД -120/80 мм рт.ст. Живот вздут, перистальтики вялая, болезненность в правом подреберье. Диурез 50 мл в сутки. Из анамнеза известно: накануне 28.07.97 г. с целью самолечения в течение суток приняла 5 таблеток парацетамола. 29.07.97 г. - у больной появилась тошнота, рвота. 30-31.07.97 г отметила желтушность кожных покровов, иктеричность склер, снижение диуреза. В анализах крови отмечалась гиперферментемия: АлАТ - 524,5 н/моль с. л (30-40), АсАТ - 110,5 н/моль с. л (30-40), ЛДГ - 15,21 мкмоль/л (8,6), гипербилирубинемия: общий билирубин - 208,67 мкмоль/л (5,0-30,0), прямой - 154,0 мкмоль/л (2,0-26,0), протромбин - 79% (80-95), гиперазотемия: мочевина - 14,6 ммоль/л (10,0-12,0), креатинин - 354,0 мкмоль/л (80,0-120,0).

УЗИ брюшной полости: эхографические признаки диффузных изменений в печени, уплотнение паренхимы, увеличение селезенки, воротная вена - 1,5 см, R_i (индекс резистентности) - на ветвях печеночной артерии - 0,65, токсические изменения почек, размеры 11х5,6 см, R_i - 0,75. В брюшной полости, плевральных полостях значительное количество свободной жидкости.

Проводилась комплексная терапия; активные методы детоксикации - гемодиафильтрация (N5), плазмаферезы (N3), "рулеточные" диализы (N2), бужирование и катетеризация пупочной вены (БПВ) с последующим в/портальным введением глюкозы с витаминами группы "В", липоевой кислотой, спазмолитиками, реопрепаратами - трентал, курантил.

Консервативная терапия включала: инфузионную терапию с форсированием диуреза, корректно анемии, гипопротеинемии, водно-электролитного баланса. В связи с сохраняющейся гипербилирубинемией (билирубин общий - 112,0 мкмоль/л), гиперферментемией (АлАТ - 107,8 н/моль с.л, АсАТ - 121,0 н/моль с.л, ЛДГ - 8,0 мкмоль/л), в курс защитной печеночной терапии был включен пероральный прием лиофилизированных гепатоцитов в течение 10 дней по 2 капсулы 3 раза в день, а затем по 1 капсуле 3 раза в день в течение последующих 10 дней.

После проведенного лечения в анализах крови отмечалось снижение концентрации общего билирубина до 87,3 мкмоль/л, уровень аланиновой и аспарагиновой трансаминаз нормализовался. Отмечалось восстановление диуреза. При контрольном исследовании брюшной полости (УЗИ+допплер) отмечалось восстановление внутрипеченочной гемодинамики; диаметр воротной вены - 1,3 см, R_i - нормализовался (0,58), восстановилась гемодинамика почек. Сохранялись умеренные явления портальной гипертензии: увеличение до 11х5 см. После проведенного лечения состояние больной улучшилось: исчезли признаки энцефалопатии, появился аппетит, стала активнее. Концентрация билирубина и ферментов достигла нормальных, величин. Больная выписана через 26 дней.

Клинический пример 2
Больной Фокин В.А., 49 лет, история болезни 4508, поступил 26.03.97 г. Диагноз: Цирроз печени, декомпенсация. Портальная гипертензия: гепатоспленомегалия, варикозно расширенные вены пищевода, асцит. Жалобы при поступлении: слабость, нарушение сна, головная боль. Из анамнеза известно, что больной страдает циррозом печени в течение 3 лет, злоупотребляет алкоголем.

Последнее ухудшение три недели назад - появилась слабость, снизился аппетит, нарушился сон, появилась неадекватность в поведении. Увеличился живот в размерах, появились отеки на нижних конечностях. При осмотре: кожные покровы, склеры желтушные, печень при пальпации +6 см из-под края реберной дуги, болезненная. Проводились инструментальные исследования. Сцинтиграфия печени: печень неправильной формы, контуры размытые, нечеткие, размеры 13х9х20 см, распределение РФП диффузно-неравномерное, со снижением РФП в правой доле, селезенка 16х12 ом, захват РФП 48%. Признаки цирроза печени, спленомегалия, портальная гипертензия. При УЗИ выявлено увеличение печени, уплотнение паренхимы, внутрипеченочная сеть расширена за счет портальной системы, диаметр портальной вены - 2,2 см, R_i - 0,80, диаметр селезеночной вены - 1,6 см. В брюшной полости - свободная жидкость. В анализах крови при поступлении отмечается гипербилирубинемия: общий билирубин -184,3 мкмоль/л, за счет прямого - 137,0 мкмоль/л, холестерин - 1,8 ммоль/л, бета-липопротеиды - 1,7 г/л, гипокалиемия - 3,5 ммоль/л, гипопротеинемия: общий белок - 58,0 г/л, гиперферментемия: АсАТ - 72,5 н/моль с.л, ЛДГ - 10,86 мкмоль/с.л, ГТП - 99,9 мЕ/л, протромбин - 85,0%.

Проводилось лечение: инфузионная терапия с форсированием диуреза - глюкоза, витамины группы "В", спазмолитики, антибиотики, диуретики. На 5 сутки со дня поступления больной получал перорально за 1,5 часа до еды лиофилизированные гепатоциты по 2 капсулы два раза в день в течение 10 дней, затем по 1 капсуле 2 раза в день в течение 14 дней. На 7 сутки приема лиофилизированных гепатоцитов отмечалось снижение концентрации общего билирубина на 45%, концентрация липидов увеличилась: холестерин - 3,3 ммоль/л, бета-липопротеиды - 3,0 г/л. Концентрация общего белка составляла 63,0 г/л. Концентрация АсАТ, ЛДГ нормализовались на 14-е сутки приема гепатоцитов.

Эти данные подтверждаются УЗИ: уменьшились признаки портальной гипертензии, свободной жидкости - минимальное количество. Больной стал активным, адекватным, улучшился аппетит, нормализовался сон. Больной выписан на 34 сутки заболевания с последующей ремиссией 6 месяцев.

По предлагаемому способу проведено лечение 47 больных. У всех больных течение заболевания соответствовало гепатопатии I - II степени. В лечении этой группы больных использовали лиофилизированные гепатоциты в капсульной форме в виде перорального приема.

Динамика изменения биохимических показателей крови в процессе лечения представлены в табл. 2 (см. в конце описания). Как видно из таблицы, снижение билирубинемии на 60% отмечалось на 6-е сутки, а на 14-е сутки - концентрация общего билирубина и его фракций уменьшилась на 80%.

Ферментемия снизилась на 14-е сутки: АсАТ - на 34%, АлАТ - на 60%. К концу третьей недели лечения биохимические показатели крови нормализовались. В процессе лечения отмечалось улучшение самочувствия больных, уменьшались проявления энцефалопатии: нормализовался сон и появлялся аппетит. У больных с хроническими заболеваниями печени уменьшались признаки портальной гипертензии, что подтверждалось инструментальными исследованиями (УЗИ, сцинтиграфия печени).

Таким образом, способ лечения больных с острыми и хроническими заболеваниями печени лиофилизированными гепатоцитами может рассматриваться как более эффективный, упрощенный и удешевленный по сравнению с приемом взвеси живых гепатоцитов, преимуществом данного способа лечения является высокая функциональная активность, точность дозировки, сохранность препарата от разрушающего действия желудочного сока, длительность их хранения (в течение 3 лет), что позволяет проводить лечение больных с различной степенью тяжести нарушений функции печени.

Изобретение относится к медицине, а именно гепатологии, и может найти применение в реанимационных отделениях и отделениях интенсивной терапии при острой и хронической печеночной недостаточности. Для лечения печеночной недостаточности различного генеза больному перорально вводят ксеногенные лиофилизированные гепатоциты в капсульной форме по 2,0 в одной капсуле. При острой печеночной недостаточности вводят по 2 капсуле три раза в день за 1,5 ч до еды в течение 10 дней, затем по 1 капсуле три раза в день в течение следующих 10 дней. При хронической печеночной недостаточности вводят по 2 капсуле два раза в день в течение 10 дней, затем по 1 капсуле два раза в день в течение 14 дней. При упрощении лечения способ значительно повышает его эффект. 2 з.п.ф-лы., 2 табл.

1. Способ лечения печеночной недостаточности при заболевании печени различного генеза путем перорального введения функционально активных гепатоцитов, отличающийся тем, что ксеногенные лиофилизированные гепатоциты используют в капсульной форме по 0,2 г, которые вводят по 1 - 2 капсулы за 1,5 ч до еды 2 - 3 раза в день в течение 10 - 30 дней. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при острой печеночной недостаточности вводят по 2 капсулы 3 раза в день в течение 10 - 15 дней. 3. Способ по п.2, отличающийся тем, что при хронической печеночной недостаточности вводят по 2 капсулы 2 раза в день в течение 10 дней, а затем по 1 капсуле 2 раза в течение 14 дней.