ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ХОЛЕЛИТОЛИТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 1999 года по МПК A61K38/08 

Изобретение относится к медицинe, фармакологии и касается лекарственных средств, обладающих холелитолитическим действием.

Известны лекарственные средства обладающие холелитолитическим действием: урсодезоксихолевая кислота и хенодезоксихолевая кислота, применяемые в терапии холестаза и желчнокаменной болезни [1-5]. Положительный эффект указанных кислот основан на увеличении секреции с желчью желчных кислот, увеличении скорости холереза и соответственно увеличении солюбилизирующей способности желчи в отношение холестерина. Ряд других препаратов, применяемых для этой цели, либо не обладают достаточной эффективностью, либо препараты имеют побочные эффекты, либо механизм их действия основан на реализации желчегонного эффекта входящих в их состав желчных кислот [6].

Введение урсодезоксихолевой и хенодезоксихолевой кислот приводит к изменению секреции липидных компонентов в желчь и в эксперименте [7,8].

Введение урсодезоксихолевой и хенодезоксихолевой кислот приводит к благоприятному изменению свойств желчи, однако при этом рекомендуется проводить длительную терапию [9,10], причем эта терапия требует высоких доз препарата [11] и к ней также имеются достаточно обширные противопоказания [5]. К тому же применение этих желчных кислот не всегда приводит к желаемому снижению литогенности, а высокие дозы препарата могут вызвать появление побочных эффектов [12] . Сказанное заставляет вести поиск новых препаратов, которые бы вызывали снижение литогенных свойств желчи и у которых отсутствовали бы побочные эффекты.

Даларгин является синтетическим аналогом опиоидных пептидов, в частности лей-энкефалина и по химическому строению представляет из себя гексапептид Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg. К настоящему времени обнаружено, что даларгин является одним из наиболее активных синтетических аналогов энкефалинов, обладающих высокой активностью в отношении функций желудка и поджелудочной железы [13,14] . Продемонстрирована его способность снижать уровень желудочной секреции соляной кислоты [15,16], модулировать секрецию компонентов поджелудочного сока. Даларгин обладает способностью усиливать белковый обмен и репаративную способность тканей [17-20], которая реализуется через изменение активности орнитиндекарбоксилазы и усиление синтеза ДНК. Убедительно продемонстрирована высокая антиульцерогенная эффективность даларгина как в эксперименте [21,22] , так и в клинике [16,23], где его эффективность оказалась выше, чем у блокатора Н2-гистаминовых рецепторов циметидина. Препарат также эффективен при язвенном гастродуоденальном кровотечении [24]. Даларгин повышает пролиферативную способность слизистой желудка в постстрессорный период, что является фактором, способствующим ограничению повреждения слизистой желудочно-кишечного тракта и повышению ее репаративных возможностей.

При остром экспериментальном панкреатите применение даларгина способствует торможению деструкции ткани, четкому отграничению очагов некроза от интактной паренхимы [25,26], сопровождаясь угнетением активности панкреатических ферментов и кининов плазмы, что в конечном итоге способствует торможению патологического процесса.

Поскольку даларгин является пептидом, то после введения он подвергается быстрой деградации пептидазами до олигопептидов и аминокислот, которые включаются в ресинтез собственных белков организма [27]. Это, а также то, что даларгин является синтетическим аналогом естественного компонента организма приводит к отсутствию каких-либо побочных эффектов как при остром [28,29], так и при курсовом применении [30] препарата, что является несомненным преимуществом даларгина перед большим количеством фармакологических средств.

Кроме эффектов на органы желудочно-кишечного тракта обнаружены влияния даларгина на течение инфаркта миокарда [31,32] и его иммуномодулирующие свойства [33,34].

На основании высокой фармакологической активности в отношении различных патологических процессов даларгин был разрешен к применению в качестве лекарственного средства (Машковский М.Д. Лекарственные средства.- М.: Медицина, 1993, ч.2, с. 171-172).

Несмотря на широкий спектр нозологических форм и экспериментальных моделей, при которых даларгин демонстрирует протекторные свойства, его эффекты в отношении к функции печени не изучены. Имеются единичные работы, касающиеся протективного действия препарата на морфологическое и функциональное состояние гепатоцитов [35,36]. В указанных выше работах изучались протективные свойства даларгина в норме и при остром холестазе. Было обнаружено, что даларгин снижает активность в плазме крови гистидазы и уроканиназы - маркерных ферментов повреждения печени и тормозит процессы перекисного окисления липидов, что отражает мембрано-стабилизирующий эффект даларгина на гепатоциты. Существует также указание, что даларгин снижает детальность лабораторных животных при остром токсическом поражении печени [37].

Таким образом, изучениe влияния даларгина на холерез и на секрецию компонентов желчи до сих нор не проводилось.

Цель изобретения - расширение арсенала фармакологических средств, обладающих холелитолитическим действием.

Цель достигается применением даларгина в качестве лекарственного средства, обладающего холелитолитическим действием.

Новым является то, что впервые обнаружено свойство даларгина, позволяющее использовать его в качестве лекарственного средства, обладающего холелитолитическим действием.

Авторами не обнаружено в проанализированной ими литературе данной совокупности отличительных признаков. Использование даларгина в качестве лекарственного средства, обладающего холелитолитическим действием, не вытекает явным образом из уровня техники для специалиста.

Предлагаемое лекарственное средство может использоваться при лечении больных желчнокаменной болезнью.

Таким образом, предлагаемое техническое решение соответствует критериям изобретения "новизна", "изобретательский уровень", "промышленно применимо".

Нами было проведено экспериментальное исследование влияния введения даларгина на скорость секреции желчи и на секрецию в ее составе отдельных компонентов у животных.

Материалы и методы исследования.

Эксперименты проводились на белых крысах-самцах линии Вистар массой 160-250 г, после 12-часового голодания в условиях свободного доступа к воде. Секрецию компонентов желчи изучали в условиях острого опыта под нембуталовым наркозом 50 мг/кг путем канюлирования общего желчного протока после срединной лапаротомии. Исследованию подвергались порции желчи, полученные к 1, 2 и 3 ч после введения препаратов. В каждой порции определялась концентрация общего билирубина унифицированным методом по Ендрашику в модификации Акинчиц М. А. и соавт. [38] (расчет секреции проводили на 100 г массы тела за 1 ч), концентрация общего холестерина и суммарное содержание желчных кислот по реакции Златкиса-Зака в модификации Мирошниченко В.П. с соавт. спектрофотометрическим методом [39], концентрация липоидного фосфора унифицированным методом [40] после экстракции фосфолипидов желчи [41], концентрация ионов натрия методом пламенной фотометрии. Рассчитывались скорость желчетока (мл/100 г/ч), концентрация (мкмоль/л) и абсолютная секреция билирубина (мкг/100 г/ч), концентрация холестерина (ммоль/л), содержание суммарных желчных кислот за исключением литохолевой кислоты и ее конъюгатов (мг%), концентрация лецитина (ммоль/л), концентрация ионов натрия (ммоль/л).

На основании полученных показателей рассчитывались холатохолестериновый коэффициент и молярное отношение холестерин/фосфолипиды (молярное отношение холестерин/лецитин является важным показателем солюбилизирующих свойств желчи [42], который учитывает экстра- и интрамицеллярный лецитин, участвующий в солюбилизации холестерина).

Даларгин (официнальный препарат "Даларгин лиофилизированный" в ампулах, содержащих 1 мг, АО Вектор-БиоПродукт, Новосибирск) перед употреблением разводился в стерильном физиологическом растворе и применялся в дозе 10 мкг/кг путем внутрибрюшинного введения в соответствующем объеме физиологического раствора. Контрольным животным вводился физиологический раствор в соответствующих количествах. Результаты исследований обрабатывались методом вариационной статистики с расчетом критерия t-Стъюдента. Различия считались достоверными при P<0,05
Результаты исследований.

Концентрация желчных кислот - одного из компонентов солюбилизирующей системы желчи в контроле постепенно снижается (табл. 1), что обусловлено нарушением в нашем случае печеночно-кишечной циркуляции желчных кислот. Под влиянием даларгина эта концентрация значительно возрастает ( к 1 ч исследования на 40.20%), что повышает растворимость холестерина в данной системе. Причем особенности примененной нами методики таковы, что основная холестатическая кислота - литохолевая [43] (повышение относительной концентрации которой происходит при желчнокаменной болезни [44]) и ее конъюгаты не определяются, что дает основание констатировать уменьшение литогенных свойств желчи под влиянием даларгина путем повышения концентрации в желчи желчных кислот.

Концентрация в желчи контрольных животных холестерина (табл. 2) и фосфолипидов (табл. 3) имеет тенденцию к снижению по ходу эксперимента. Введение даларгина не вносит достоверных отличий в величины концентраций указанных компонентов, что в отношении холестерина можно расценивать как благоприятное изменение, поскольку происходит снижение относительной концентрации холестерина.

Скорость холереза в контрольных экспериментах увеличивается по мере увеличения времени наблюдения (табл. 4), и к 3 ч это увеличение носит достоверный характер, введение даларгина не вызывает значительного увеличения скорости холереза, несмотря на значительное повышение концентрации желчных кислот, что, вероятно, связано с тем, что они включаются в состав мицеллярного комплекса с холестерином и фософолипидами, в котором теряют свою осмотическую активность [45].

Тенденция к увеличению скорости желчеотделения при применении даларгина может быть объяснена высокодостоверным повышением концентрации ионов натрия (табл. 5), вызываемым этим препаратом.

Данные, приведенные в табл. 6, свидетельствуют, что концентрация билирубина в желчи животных контрольной группы достаточно стабильна в течение трех часов исследования и не претерпевает достоверных изменений. Введение даларгина высокодостоверно снижает концентрацию билирубина на 33.0, 22.4 и 21.58% в 1, 2 и 3 ч соответственно. Примечательным является тот факт, что препарат, значительно уменьшая концентрацию билирубина в желчи, не изменяет его абсолютной секреции, что обусловлено одновременной тенденцией к увеличению скорости холереза, и, таким образом, снижая вероятность выпадения кристаллов билирубиновых солей в желчных путях, даларгин не вызывает нежелательной задержки пигмента в ткани печени, что в конечном итоге ведет к снижению риска билирубинового литогенеза [46].

Индексы литогенности (основным и наиболее легко выполнимым является холатохолестериновый коэффициент) являются информативным показателем, характеризующим соотношение липидных компонентов желчи [47,42]. В наших исследованиях холатохолестериновый коэффициент в контрольной серии не претерпевает достоверных изменений по ходу эксперимента, а применение даларгина высокодостоверно повышает его по отношению к контролю (к 1 ч исследования на 55.01%) (табл. 7). Это изменение свидетельствует о повышении солюбилизирующих свойств желчи по отношению к холестерину за счет желчно-кислотного компонента. Коэффициент холестерин/фосфолипиды, который в контроле, снижается, отражая, таким образом, повышение растворимости холестерина за счет фосфолипидного компонента (на 21.35% от 1 к 3 ч ), при введении даларгина не изменяется, являясь свидетельством того, что даларгин не повреждает естественного повышения растворимости холестерина, обусловленного фосфолипидами (табл. 8).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что даларгин в остром опыте у белых крыс снижает способность желчи к литогенезу за счет повышения концентрации в составе желчи желчных кислот (что выражается в увеличении холатохолестеринового коэффициента, которое при неизменном отношении холестерин/фосфолипиды отражает снижение литогенной способности желчи) и снижения концентрации секретируемого билирубина.

Список литеретуры
1. Roseau G. Acide ursodesoxycholique dans la cirrose biliaire primitive: premiereetude en double aveugle // Presse med., 1990, v. 19, N 6, p. 237- 237.

2. Cotting J., Lentze M.J., Reichen J. Effects of ursodeoxycholic acid treatment on nutrition and liver function in patient with cystic fibrosis and longstanding cholestasis // Gut., 1990, v. 31, N 8, p. 918-921.

3. Nilsell К., Angelin В., Leijd В., Einarsson K. Comparative effects of ursodeoxycholic acid and chenodeoxycholic acid on bile acid kinetics and biliary lipid secretion in humans. Evidence for different modes of action on bile acid synthesis // Gastroenterology, 1983, v. 85, N 6, p. 1248-1256.

4. Jungst D., Brenner G., Pratschke E., Paumgartner G. Low-dose ursodeoxycholic acid prolongs cholesterol nucleation time in gallbladder bile of patients with cholesterol gallstones // J. Hepatol., 1989, v. 8, N 11, p. 1-6.

5. Голочевская B.C., Геня Л.П., Консервативное лечение больных желчнокаменной болезнью препаратами хенодезоксихолевой и урсодезоксихолевой кислот // Клиническая медицина, 1992, N 7-8, с. 60-63.

6. Саратиков А.С., Скакун Н.П. Желчеобразование и желчегонные средства, Томск, Изд-во ТГУ, 1991, 260 с.

7. Baumgartner U., Sholmerich J., Leible P., Fartmann E.H. Cholestasis, metabolism and biliary lipid secretion during perfuaion of rat liver with different bile salts // Biochim Biophys Acta, 1992, v. 1125, N 3, p. 142-149.

8. Nakai Т., Katagiri К., Hoshino M., Hayakawa Т., Ohiwa T. Microtubule-independent choleresis and anti-cholestatic action of tauroursodeoxycholate in colchicine-treated rat liver // Biochem. J., 1992, v. 228, pt 2, p. 613-617.

9. Arrese M. , Accatino L. Acido ursodeoxicolico en el tratamiento de enfermedades hepaticas colestaticas // Rew. Med. Chil., 1993, v. 121, N 4, p. 439-446.

10. Jungst D., Brenner G., Pratschke E., Paumgartner G. Low-dose ursodeoxycholic acid prolongs cholesterol nucleation time in gallbladder bile of patients with cholesterol gallstones // J. Hepatol., 1989, v. 8, N 11, p. 1-6.

11. Walker S., Rudolph G., Raedsch R., Stiehl A. Intestinal absorbtion of ursodeoxycholic acid in patients with extrahepatic biliary obstraction and bile drainage // Gastroenterology, 1992, v. 102, N 3, p. 810-815.

12. Георгадзе А.К., Карпов В.И., Коробков В.В. Медикаментозное лечение желчнокаменной болезни хенодезоксихолевой и урсодезоксихолевой кислотой // Клиническая медицина, 1987, N 1, с. 32-37.

13. Виноградов В.А., Полонский В.М. Фармакология нового пептидного противоязвенного препарата даларгина // В кн.: Нейропептиды, их роль в физиологии и патологии (тезисы докладов), Томск, 1984, с. 164.

14. Виноградов В.А., Полонский В.М. Даларгин - наиболее эффективный синтетический аналог эндогенных опиоидов для лечения язвенной болезни (итоги пятилетнего поиска) // Бюл. ВКНЦ АМН СССР, 1986, N 2, с. 62-63.

15. Теплюк С.Г. Влияние даларгина на уровень желудочной секреции // Бюл. ВКНЦ АМН СССР, 1986, N 2, с. 67-68.

16. Смагин В.Г., Виноградов В.А., Булгаков С.А., Прописнова Е.П., Титов М.И. Синтетический пептидный препарат даларгин в лечении язвенной болезни // Тер. арх., 1987, N 2, с. 44-48.

17. Ярыгин К.Н., Шитин А.Г., Полонский В.М., Московкин Г.Н. Влияние периферического введения даларгина на активность орнитиндекарбоксилазы в слизистой ДПК крыс с экспериментальными дуоденальными язвами // Бюл. ВКНЦ АМН СССР, 1986, N 2, с. 76-78.

18. Панькова Т.Д., Тимошин С.С., Радивоз М.И., Титов М.И. Влияние стабильного аналога лей-энкефалина даларгина на процессы клеточного деления эпителия роговицы белых крыс // Бюл. Экспер. Биол., 1988, N 7, с. 97-99.

19. Шехтер А.Б., Соловьева А.И., Спевак С.Е., Титов М.И. Влияние опиопептида даларгина на репаративные процессы при заживлении ран // Бюл. Экспер. Биол., 1988, N 10, с. 487-490.

20. Тимошин С. С. , Швец С.И., Мурзина Н.Б., Березина Г.П. Влияние даларгина на процессы размножения клеток в эпителии желудка при стрессе // Бюл. Экспер. Биол., 1990, N 10, с. 399-401.

21. Виноградов В. А., Полонский В.М. Влияние нейропептидов на экспериментальную дуоденальную язву у крыс // Пат. физиология и экспер. терапия, 1983, N 1, с. 3-7.

22. Полонский В.М., Ярыгин К.Н., Кривошеев О.Г., Московкин Г.Н., Виноградов В. А. Место приложения (центральное или периферическое) противоязвенного действия синтетического аналога эндогенных опиоидов даларгина в экспериментальной модели цистеаминовых дуоденальных язв у крыс // Бюл. Экспер. Биол., 1987, N 4, с. 433-434.

23. Смагин В.Г., Титов М.И., Булгаков С.А., Прописнова Е.П. Клиническая апробация даларгина - нового средства для лечения язвенной болезни // Бюл. ВКНЦ АМН СССР, 1986, N 2, с. 63-65.

24. Георгадзе А.К., Фомин В.Б., Булгаков С.А,, Феденко В.В. Лечение язвенных гастродуоденальных кровотечений с применением аналога лейцин-энкефалина даларгина // Хирургия, 1990, N 3, с. 39-43.

25. Курзанов А.Н., Титова Г.П., Виноградов В.А., Алейник В.А., Герасимов Н. Ф. Морфофункциональные изменения поджелудочной железы под влиянием даларгина в норме и при экспериментальном панкреатите // Бюл. Экспер. Биол., 1988, N 4, с. 445-447.

26. Канаян А.С., Пермяков Н.К., Титова Г.П., Габриелян Н.А., Восканян Л. О. , Геворкян Г.А. Влияние синтетических аналогов L-энкефалина на жизнеспособные отделы поджелудочной железы при экспериментальном панкреатите // Бюл. Экспер. Биол., 1988, N 4, с. 447-451.

27. Каленикова Е.И., Дмитриева О.Ф., Коробов Н.В., Жуковский С.В., Тищенко В. А., Виноградов В.В. Фармакокинетика даларгина // Вопросы Мед. Химии, 1988, N 1, с. 75-83.

28. Соколов А.С., Дмитриева О.Ф., Тищенко В.А. Влияние внутривенной инфузии даларгина на некоторые биохимические и гормональные показатели в крови у больных язвенной болезнью ДПК // Бюл. ВКНЦ АМН СССР, 1986, N 2, с. 68-70.

29. Булгаков С.А., Богданов А.Н., Овтрахт Н., Павлов С.А. Оценка эндокринного статуса у язвенных больных на фоне лечения даларгином // Бюл. ВКНЦ АМН СССР, 1986, N 2, с. 70-71.

30. Смагин В.Г., Виноградов В.А., Булгаков С.А., Прописнова Е.П., Титов М.И. Синтетический пептидный препарат даларгин в лечении язвенной болезни // Тер. арх., 1987, N 2, с. 44-48.

31. Слепушкин В.Д., Павленко В.С., Хлыстов В.В., Лисаченко Г.В., Усынин А. Ф. , Золоев Г. К. , Крицкая Н.Г. Влияние даларгина на морфологические и функциональные показатели при экспериментальном инфаркте миокарда // Бюл. ВКНЦ АМН СССР, 1986, N 2, с. 54-55.

32. Слепушкин В.Д., Золоев Г.К., Виноградов В.А., Титов М.И. Нейропептиды, их роль в физиологии и патологии, Томск, 1988, с. 100-110.

33. Хугаева В.К. Влияние даларгина на микрогемо- и микролимфоциркуляцию // Бюл. Экспер. Биол., 1988, N 3, с. 300-302.

34. Александрова Е.Н., Насонов Е.Л., Виноградов В.А., Титов М.И. Влияние синтетического аналога эндогенных опиоидов даларгина на естественную цитотоксичность лимфоцитов человека // Бюл. Экспер. Биол., 1988, N 4, с. 442-445.

35. Кузин М.И., Карелин А.А., Короткина Р.Н., Бабкина Н.В., Шлозников Б. М. Изучение в эксперименте гепатопротекторного действия транскраниальной чрезкожной электростимуляциии синтетического аналога лей-энкефалина - даларгина // Бюл. Экспер. Биол., 1988, N 9, с. 266-268.

36. Короткина Р.Н., Фомиченков Е.П., Бабкина Н.В., Андреев В.И., Шлозников Б.М., Карелин А.А. Антиоксидантное действие даларгина на печень в условиях острого холестаза // Пат. физиол. и экспер. терапия, 1990, N 4, с. 42-44.

37. Полонский В. М. , Тищенко В.А. Протективное действие нового гексапептада при остром токсическом поражении печени у крыс, вызванном черыреххлористым углеродом // В кн.: Нейропептиды, их роль в физиологии и патологии (тезисы докладов), Томск, 1985, с. 147-148.

38. Акинчиц М.А., Павловская Н.А. Модификация метода определения билирубина в сыворотке крови // Лаб. дело, 1988, N 12, с. 727-730.

39. Мирошниченко В.П., Громашевская Л.Л., Касаткина М.И., Козачек Г.А. Определение содержания желчных кислот и холестерина в желчи // Лаб. дело, 1978, N 3, с. 149-153.

40. Лабораторные методы исследования в клинике // Под ред. Меньшикова В. В.- М., 1987, 365 с.

41. Ганиткевич Я.В., Карбач Я.И. // Исследование желчи биохимические и биофизические методы, Киев, 1985, 135 с.

42. Рубенс Ю.П., Скуя Н.А., Юрика Э.В. Клинико-теоретические аспекты исследования литогенности дуоденальной желчи, полученной при гастродуоденальном зондировании // Успехи гепатологии, Рига, 1984, вып. 11, с. 312-343.

43. Marinelli R. A. , Roma M.G., Pellegrino J.M., Rodrigues-Garay E.A. Taurolithocholate-induced ingibition of biliary lipid and protein excretion in the rat//Biochim. Biophys. Acta, 1992, v. 1125, N 1, p. 44-48.

44. Berr F., Schreiber E., Frick U. Interrelationships of bile acid and phospholipid fatty acid species with cholesterol saturation of duodenal bile // Hepatology, 1992, v. 16, N 1, p. 71-81.

45. Baumgartner U., Sholmerich J., Leible P., Fartmann E.H. Cholestasis, metabolism and biliary lipid secretion during perfusion of rat liver with different bile salts // Biochim. Biophys. Acta, 1992, v. 1125, N 3, p. 142-149.

46. Carey M. C. Pathogenesis of gallstones // Recenti. Prog., 1992, v. 83, N 7-8, p. 379-391.

47. Рубенс Ю.П., Юрика Э.В., Селезнев Ю.В. Индексы литогенности желчи: методы определения, клиническая доступность, информативность // Клиническая Медицина, 1992, N 7-8, с. 39-41.

Изобретение относится к медицине. Предложено использовать даларгин в качестве средства, обладающего холелйтолитическим действием. Средство повышает концентрацию желчных кислот в составе желчи, снижая способность желчи к литогенезу. 8 табл.

Применение даларгина в качестве средства, обладающего холелитолитическим действием.