СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГИПЕРХОЛЕСТЕРИНЕМИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ У БОЛЬНЫХ С ЖЕЛЧНОКАМЕННОЙ БОЛЕЗНЬЮ ПУТЕМ ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТА "ГЕПАТОСАН", УСКОРЯЮЩЕГО ОКИСЛЕНИЕ ХОЛЕСТЕРИНА В ПЕЧЕНИ Российский патент 2007 года по МПК A61K35/407 A61P1/16 

Изобретение относится к области медицины, а именно кардиологии и гастроэнтерологии, и может быть использовано для коррекции нарушений липидного обмена.

Известно, что целый ряд патологических состояний сопровождается повышением уровня холестерина (ХС) в плазме крови - гиперхолестеринемией (ГХС). Она может быть результатом как избыточного поступления ХС (ускорения всасывания в кишечнике и активации синтеза в печени, стенке кишечника и других тканях), так и замедления выведения ХС из организма (метаболизма в печени, надпочечниках и половых железах, а также выведения с желчью и через сальные железы).

Основной путь элиминации ХС из организма состоит в окислении в желчные кислоты (ЖК), которое протекает в печени. Ключевым ферментом этого процесса является холестерол-7α-гидроксилаза, локализованная в эндоплазматическом ретикулуме и относящаяся к надсемейству цитохромов. Активность фермента контролируется множеством факторов, в том числе концентрацией самих ЖК (по принципу обратной отрицательной связи). Первичные ЖК - холевая и хенодезоксихолевая, в том числе введенные в диету, оказывают на 7α-гидроксилазу ингибирующее действие, а уменьшение поступления ЖК в печень (например, при дренировании желчного протока или применении связывающих смол) стимулирует фермент [Jelinek, D., Andersson S., Slaughter S., Russell D. Cloning and regulation of cholesterol 7ahydroxylase, the rate-limiting enzyme in bile acid biosynthesis // J. Biol. Chon. - 1990. - V.265. - P.8190-8197.]. Увеличение экспрессии 7α-гидроксилазы методами генной терапии приводит к существенному снижению плазменного уровня ХС у мышей (Izzat NN, Deshazer ME, Loose-Mitchell SL. New molecular targets for cholesterol lowering therapy. The Journal for Pharmacology and Experimental therapeutics. 2000; 293(2):315-320). В то же время защита от ГХС путем индукции 7α-гидроксилазы и ускорения желчегенеза выражена у крыс и собак, а у человека и у кроликов отсутствует. Из-за неиндуцируемости фермента пищевая нагрузка холестерином у человека не приводит к увеличению синтеза ЖК и, соответственно, сопровождается ростом уровня ХС в крови.

Такие особенности регуляции гомеостаза ХС в гепатоцитах были приняты во внимание при создании фармакологических препаратов, способствующих снижению уровня ХС в крови. К ним относятся статины, конкурентно угнетающие ключевой фермент синтеза ХС - ГМГ-КоА-редуктазу, фибраты, ингибиторы абсорбции холестерина (эзетимиб), секвестранты ЖК (колестимид и колесевилам) и др. (Климов А.Н. //Превентивная кардиология. - М., 1977. - С.260-321; Сусеков А.В. Гиперлипидемия - современное состояние проблемы и методы ее коррекции.// РМЖ. - т.11. - №5. - 2003 - с.28-32). К сожалению, эти препараты, помимо их высокой стоимости, обладают и некоторыми недостатками, проявляющимися при длительном лечении. Это хронические запоры, боли в мышцах, помутнение хрусталика глаза (катаракта), токсическое воздействие на печень, импотенция и др. Широко применяемые в настоящее время статины обладают выраженным гепатоповреждающим действием, вплоть до развития "статинового гепатита", и поэтому противопоказаны при активных заболеваниях печени.

Прототипом данного изобретения является отдельное направление в лечении гиперхолестеринемий - стимуляция синтеза ЖК с последующей их эвакуацией через кишечник, что сопровождается усиленным потреблением ХС на эти цели и снижением его плазменного уровня, что достигается, например, пероральным приемом холестирамина (Лопухин Ю.М., Арчаков А.И., Владимиров Ю.А., Коган Э.М. Холестериноз. - М., 1983). Известно действие секвестрантов ЖК, связывающих их в кишечнике и препятствующих реабсорбции, что приводит к уменьшению пула ЖК в гепатоэнтеральной циркуляции и ускорению их новообразования путем активации окисления ХС в печени и, тем самым, его усиленного потребления (Reihnir E., Angelin В., Rudling M., Ewerth S., Bjorkhem I, Einarsson K. Regulation of hepatic cholesterol metabolism in humans: stimulatory effects of cholestyramine on HMG-CoA reductase activity and low density lipoprotein receptor expression in gallstone patients // J. Lipid Res. - 1990. - V.31. - P.2219-2226).

Однако данный способ имеет ряд существенных недостатков. Применение указанных препаратов сопровождается выраженными побочными эффектами в виде диспепсии, тошноты, расстройства стула, а также нарушением переваривания и всасывания липидов, в том числе жирорастворимых витаминов и полиненасыщенных жирных кислот, вследствие связывания в кишечнике ЖК как эмульгирующих агентов. Секвестранты ЖК принимаются в фиксированных дозах, их нельзя сочетать с другими препаратами.

Дополнительные возможности для лечения ГХС может открыть обнаружение специфических индукторов 7α-гидроксилазы гепатоцитов. Их действие также должно сопровождаться усиленным потреблением ХС и снижением его плазменного уровня, но без побочных эффектов, свойственных секвестрантам ЖК.

Технический результат - ускорение окисление холестерина в клетках печени за счет повышения активности фермента 7-альфа гидроксилазы, расширение арсенала средств гипохолестеринового действия.

Предлагаемый способ лечения осуществляется следующим образом: больным с ГХС на фоне подтвержденного диагноза желчнокаменной болезни (ЖКБ) с билиарным сладжем для коррекции билиарной недостаточности и достижения гипохолестеринемического эффекта вводят клеточный препарат "Гепатосан" в дозе 0,8 г в сутки (по 2 капсулы 2 раза в день) в течение 2-х месяцев. Препарат представляет собой смесь лиофилизированных клеток донорской печени свиньи и был предложен ранее для коррекции печеночной недостаточности при заболеваниях печени различного генеза [Билиарная недостаточность при заболеваниях органов пищеварения. В.А.Максимов, А.Л.Чернышев, К.М.Тарасов, С.Д.Каратаев, А.Г.Куликов, С.Е.Бунтин, С.Н.Зеленцов. Materia Medica Бюллетень для фармацевтов №3 (39) - М.: 2003 г. - с.25].

В доступных источниках научно-технической и патентной информации авторами не был найден способ лечения ГХС у больных с ЖКБ и билиарным сладжем путем применения активаторов окисления ХС в печени. Таким образом, заявляемый способ соответствует критерию "Новизна".

Для определения влияния препарата "Гепатосан" сравнительно с другими лекарственными средствами на активность 7α-гидроксилазы гепатоцитов авторы провели серию экспериментов на 48 беспородных белых крысах-самцах массой 180-200 г, которые содержались в стандартных условиях вивария. У животных вызывали ГХС путем перорального введения раствора ХС в растительном масле. В дальнейшем крысы получали медикаментозную терапию гепатосаном, карсилом, энтеросаном и аллохолом, а в группе контроля - воду. По окончании эксперимента животных забивали, определяли массу печени и рассчитывали весовой коэффициент, а также определяли концентрацию малонового диальдегида в гомогенате печени (по Стальной и Гаришвили) и уровень ХС в сыворотке крови ХС-оксидазным методом (Андреева А.И., Кожемякин Л.А., Кишкун А.А. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой // Лаб. Дело - 1988. - №41. - с.41-46).

Для определения активности гидроксилазы печени использовали ХС, меченый тритием в 7α-положении. Принцип метода основан на том, что в реакции окисления (гидроксилирования) ХС один атом трития переходит в состав воды. Таким образом, радиоактивность тритиевой воды (³H₂О) в моче отражает скорость гидроксилирования ХС в микросомальной системе печени (В.П.Твердохлиб, А.А.Никоноров, Ф.З.Меерсон и соав., авт. свид. SU 1476380 А1). Меченый ХС фирмы Amersham вводили крысам внутривенно в виде эмульсии с 10% альбумином накануне опыта, на 17-й день холестериновой диеты и на 21-й день с момента начала медикаментозной терапии. У животных затем собирали суточную мочу и определяли ее β-активность на сцинтилляционном счетчике (с пересчетом на 1 мл мочи).

В группах животных, получавших медикаментозную терапию гепатосаном, карсилом, энтеросаном и аллохолом, наблюдались однонаправленные изменения в виде повышения радиоактивности мочи, т.е. имело место дополнительное ускорение гидроксилирования ХС в печени. Повышение активности 7-α-гидроксилазы на фоне лечения гепатосаном было максимальным и составило 137% от контроля. Карсил оказался на втором месте, энтеросан - на третьем. В группе животных, получавших аллохол, повышения активности фермента не наблюдалось

Аналогичные тенденции отмечались и в отношении влияния препаратов на сывороточный уровень ХС. На фоне холестериновой нагрузки его содержание в плазме крови животных составляло более 10 ммоль/л (1,95 ммоль/л в контроле); при лечении гепатосаном уровень ХС снижался до 3,7 ммоль/л, в группе карсила - до 6,9 ммоль/л, энтеросана - до 7,9 ммоль/л, аллохола - до 9,1 ммоль/л.

Таким образом, действие лекарственных препаратов сопровождалось дополнительной индукцией микросомальной ХС-гидроксилазы, активизирующейся при ГХС, и корригирующим эффектом, который убывает в ряду гепатосан - карсил - энтеросан.

Использование предлагаемого способа позволяет производить коррекцию ГХС с исключением побочных эффектов применяемых ныне гиполипидемических препаратов и значительно расширить контингент больных с ГХС, которым может быть применен гепатосан, в силу отсутствия противопоказаний для его приема.

Как было показано в проведенных нами экспериментальных исследованиях на животных препарат гепатосан также обладает гипохолестеринемической активностью и действует путем активации 7α-гидроксилазы гепатоцитов, что соответствует критерию "Изобретательский уровень".

На базе Клиники БГМУ и РКБ им. Куватова под наблюдением находились 60 больных с диагнозом ЖКБ I ст.(билиарный сладж) и II стадии (Ильченко А.А. Билиарный сладж как начальная стадия желчнокаменной болезни //Consilium Medicum - том 6 /№6/ 2004). Диагноз подтверждался клиническими, инструментальными и лабораторными данными, включающими УЗИ органов брюшной полости, дуоденальное зондирование, биохимическое исследование крови (липидный профиль, печеночные пробы). Для коррекции билиарной недостаточности больным с дислипидемией и с неизмененной липидограммой назначался гепатосан в дозе 0,8 г в сутки в течение 2-х месяцев. Гепатосан представляет собой смесь лиофилизированных клеток донорской печени свиньи, в состав которой входят 17 заменимых и незаменимых аминокислот, микроэлементы, витамины, фосфолипиды, окислительно-восстановительные ферменты. Анализ дуоденального содержимого после курса гепатосана выявил уменьшение литогенных свойств желчи за счет увеличения пула желчных кислот, фосфолипидов, холатохолестеринового и фосфолипиднохолестеринового коэффициентов. В результате проведенного лечения нами также были зарегистрированы положительная атерогенная направленность изменений липидного профиля у больных с тенденцией к снижению уровней повышенного уровня плазменного ХС и липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), повышению уровня липопротеинов высокой плотности (ЛПВП).

Предлагаемый способ иллюстрируется следующими клиническими примерами:

Пример 1. Больная А. 44 лет находилась на стационарном лечении в Клинике БГМУ с диагнозом желчнокаменная болезнь I стадии. Больная предъявляла жалобы на ощущение болей и дискомфорта в правом подреберье различной интенсивности и продолжительности, в основном, связанные с приемом пищи, периодически - ощущение горечи во рту.

По данным УЗИ: определяется гиперхогенная мелкозернистая структура печени с гипоэхогенными участками 5-6 сегментах диаметром от 9 до 17 мм, сглаженный сосудистый рисунок; протоки не расширены, холедох - 8 мм, свободен. Желчный пузырь - изогнутый, с перегибом, стенки его утолщены до 4,2 мм, в его полости определяется густая желчь на 1/4 объема. Размеры поджелудочной железы 24-19-20 мм, контуры ровные, структура однородная, уплотненная

Биохимические показатели крови: ХС 6,20 ммоль/л, ЛПВП-ХС - 1,10 ммоль/л, ACT 16 ед./л, АЛТ 11 ед/л, триглицериды 1,51 ммоль/л, билирубин общий 10,8 ммоль/л, СРБ отрицательный, щелоч. фосфотаза 160 ед./л, гамма - ГГТ 14,6 ед./л. При анализе дуоденального содержимого в желчи в порции В выявлено снижение уровня холевой кислоты до 14,1 ммоль/л (норма 18,6 ммоль/л), фосфолипидов до 2,98 ммоль/л (норма 3,58 ммоль/л) и повышение уровня холестерина до 11,64 ммоль/л (норма 8,9 ммоль/л).

Аналогичные изменения наблюдались в порции С: холевая кислота - 2,99 ммоль/л (норма - 3,49 ммоль/л), фосфолипиды - 0,37 ммоль/л (норма 0,40 ммоль/л), холестерин - 3,08 ммоль/л (норма 2,38 ммоль/л).

Больной для коррекции ГХС в стандартное лечение был включен гепатосан по 2 капсулы 2 раза в день за 30 минут до еды в течение 2-х месяцев. По окончании лечения больная отмечает улучшение самочувствия в виде исчезновения болевого синдрома, чувства тяжести в правом подреберье, горечи во рту.

При повторном УЗИ обследовании у больной отмечается уменьшение гиперэхогенности печени, восстановление размеров органа до нормы и исчезновение билиарного сладжа в желчном пузыре.

Биохимический анализ показал позитивные изменения в липидном спектре в сторону снижения холестерина до 5,20 ммоль/л, ЛПНП - до 3,10 ммоль/л, триглицеридов - до 1,49 ммоль/л, гамма ГГТ - 142 ед./л, повышение уровня ЛПВП - до 1,50 ммоль/л. В желчи отмечались однонаправленные изменения холестерина в сторону его снижения до 9,00 ммоль/л и до 2,36 ммоль/л в порциях В и С соответственно и повышение уровня желчных кислот до 18,1 ммоль/л и 3,49 ммоль/л в порциях В и С и уровня фосфолипидов до 3,36 ммоль/л и 0,44 ммоль/л в порциях В и С.

Пример 2. Больная В. 35 лет находилась на стационарном лечении в Клинике БГМУ с диагнозом нейроциркуляторная дистония с синдромом кардиалгии. В процессе обследования у нее была выявлена клинически латентное течение желчнокаменной болезни начальной стадии в форме взвеси гиперэхогенных частиц. В анамнезе больная отметила длительный прием противозачаточных препаратов. Жалоб по поводу диспепсии билиарного типа не предъявляла.

По данным УЗИ: определяется однородная гипоэхогенная структура печени; протоки не расширены, холедох - 7 мм, свободен. Желчный пузырь - изогнутый, стенки его утолщены до 4,1 мм, в его полости по задней стенке определяется гиперэхогенные включения без эхотени. Размеры поджелудочной железы 25-20-23 мм, контуры ровные, структура однородная, гиперэхогенная.

Биохимические показатели крови: ХС - 6,40 ммоль/л, ЛПВП-ХС - 1,30 ммоль/л, ACT - 13 ед/л, АЛТ - 16 ед./л, триглицериды - 1,46 ммоль/л, билирубин общий -11,8 ммоль/л, СРБ - отр., ГГТ - 15,6 ед./л.

При анализе дуоденального содержимого в желчи в порции В выявлено снижение уровня холевой кислоты до 13,4 ммоль/л, фосфолипидов до 2,39 ммоль/л и повышение уровня холестерина до 10,4 ммоль/л. Аналогичные изменения наблюдались в порции С: холевая кислота - 2,48 ммоль/л, фосфолипиды - 0,39 ммоль/л, холестерин - 3,11 ммоль/л.

Больной для коррекции ГХС в лечебный алгоритм был включен гепатосан по 2 капсулы 2 раза в день за 30 минут до еды в течение 2-х месяцев.

По окончании лечения при повторном УЗИ обследовании у больной выявлена однородная эхогенность печени и исчезновение эховзвеси в желчном пузыре.

Биохимический анализ показал позитивные изменения в липидном спектре в сторону снижения холестерина до 5,49 ммоль/л, триглицеридов - до 1,31 ммоль/л, ЛПНП - до 3,21, щелочной фосфотазы до 64 ед./л, гамма ГТ - до 13,1 ед./л, ACT и АЛТ - до 7 ед. и 9 ед. соответственно, биллирубина - до 10,7 ммоль/л, повышения уровня ЛПВП - до 1,69 ммоль/л.

В желчи отмечались однонаправленные изменения холестерина в сторону его снижения до 8,76 ммоль/л и до 2,39 ммоль/л в порциях В и С соответственно и повышение уровня желчных кислот до 79,45 ммоль/л и 3,28 ммоль/л в порциях В и С; фосфолипиды - 2,68 ммоль/л и 0,51 ммоль/л.

Типичные показатели лабораторного обследования больных, которым проводилось лечение гепатосаном, приведены в приложении. Предлагаемый способ лечения является более экономически выгодным по сравнению с другими липидемическими средствами, дает выраженный клинический эффект, не обладает побочными действиями и противопоказаниями. Может быть использован в любых клинических учреждениях, и, таким образом, соответствует критерию «Промышленная применимость».

Способ лечения гиперхолестеринемических состояний у больных с желчнокаменной болезнью путем применения препарата "Гепатосан", ускоряющего окисление холестерина в печени

Таблица 1Биохимический состав желчи у больной «А» на фоне лечения гепатосаном (ммоль/л)N=1Пузырная желчьХолевая кислотаХолестеринХХКФЛФХК      До лечения14,111,641,222,980,26После лечения18,109,002,013,360,37N=1Печеночная желчьХолевая кислотаХолестеринХХКФЛФХК      До лечения2,903,080,940,370,12После лечения3,492,361,480,440,18

Таблица 2Биохимический состав желчи у больной «В» на фоне лечения гепатосаном (ммоль/л)N=1Пузырная желчьХолевая кислотаХолестеринХХКФЛФХК      До лечения13,4010,401,292,390,23После лечения17,458,761,992,680,31N=1Печеночная желчьХолевая кислотаХолестеринХХКФЛФХК      До лечения2,483,110,790,390,12После лечения3,282,391,370,510,21

Таблица 3Биохимические показатели крови у больных ЖКБ I-II стадии (ммоль/л)ГруппаКонцентрация липидов, ммоль/л ХСЛПВПЛПНПТГЛОНПАЛТ (ед)ACT (ед)        Больная «А» до лечения6,201,104,411,510,6917,016,0Больная«А»после лечения5,201,503,101,320,6016,011,0Больная «В» до лечения6,401,304,401,460,6616,013,0Больная «В» после лечения5,491,693,211,310,597,09

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии, и касается лечения гиперхолестеринемических состояний у больных с желчекаменной болезнью. Для этого перорально вводят гепатосан. Доза препарата составляет 0,8 г в сутки. Продолжительность курса 2 месяца. Способ обеспечивает повышение активности фермента 7-альфа гидроксилазы и как следствие ускоренное окисление холестерина в клетках печени при отсутствии побочных эффектов. 3 табл.

Способ лечения гиперхолестеринемии у больных с желчнокаменной болезнью путем перорального введения лекарственного препарата, отличающийся тем, что вводят гепатосан, содержащий смесь высушенных гепатоцитов печени свиньи, в дозе 0,8 г в сутки в течение 2-х месяцев.