СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕЦИПИТИРУЮЩИХ СЫВОРОТОК ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИДОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ МЯСА ДОМАШНИХ И ДИКИХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 2000 года по МПК A61K39/395 

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, в частности к экспертизе продуктов животноводства.

Известно изобретение [см. СССР, N 1018643, Кл. A 61 K 39/395, 1984 г.], где многоспецифическую сыворотку получают путем инъекций комплексом антиген-антитело с последующим извлечением иммунной сыворотки, ее обработкой специфическим антигеном и введением полученного комплекса животному-продуценту.

Также известен способ получения специфических сывороток [Получение специфических сывороток к иммунноглобулинам различных классов, автор: В.М. Жавненко, А. Ф. Могиленко, ж-л "Ветеринария", 1981 г., с. 27 - 28, автором взято за прототип].

Недостатком известного технологического решения является расширение технологических возможностей, т.к. в производстве отсутствуют преципитирующие сыворотки таких животных как нутрии, крыс и лягушек, которые необходимы для дифференциальной диагностики с целью определения видовой принадлежности мяса, в связи с расширением импортных ввозов продуктов питания, в частности окорочков - лягушек, на которых отсутствуют лапки задних конечностей и шкурки, по которым можно было бы ориентировочно определить принадлежность мяса, кроме того, в замороженном виде цвет мяса изменяется, поэтому легко можно ошибиться в дифференциальной диагностике, т.к. строение задних конечностей крыс и нутрий в возрасте 14 дней сходны с задними конечностями лягушек.

Технологическим решением задачи является расширение технологических возможностей.

Задача достигается тем, что в способе получения антисывороток для определения видовой принадлежности мяса домашних и диких животных, включающем подкожные и внутримышечные инъекции антигена лабораторному животному, например кролику с последующим взятием крови у того же животного, в качестве антигена используют кровь животных, например нутрии или крыс или лягушек, и вводят подкожно через каждые 5 дней в следующих дозировках 0,2 - 0,3; 0,4 - 0,5; 0,6 - 0,7; 0,8 - 0,9 мл, затем 1 - 1,2 мл внутримышечно одно введение, и три последних по 1,4 - 1,5 мл. Не ранее чем 10 дней берут кровь из сердца лабораторных животных.

Новизна предложения обусловлена тем, что за счет подобранных доз введения антигена обеспечивается расширение технологических возможностей при определении видовой принадлежности мяса.

По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена заявляемая совокупность признаков, что позволяет судить об изобретательском уровне предложения.

Способ осуществляется следующим образом:
Кровь лягушек, крыс и нутрий вводили кроликам с интервалом 5 дней в количестве 0,3; 0,5; 0,7; 0,9 мл на каждое введение, 1 мл внутримышечно в область бедра и три последних введения по 1,5 мл с интервалом 5 дней. Через 10 дней после последней инъекции антигена, при обнаружении достаточного титра сыворотки [1: 1000] брали кровь из сердца кролика. Из взятой крови получали антисыворотку.

Пример конкретного осуществления
Для получения преципитирующих сывороток определения видовой принадлежности мяса, например лягушек. С данной целью кролику вводили подкожно 0,3 мл цельную кровь лягушки и через 5 дней вновь этому же кролику вводили 0,5 мл цельной крови лягушки подкожн, затем аналогично по 0,7 и 0,9 мл. Через 5 дней после последней подкожной инъекции вводили внутримышечно 1 мл цельной крови в область бедра и три последних с интервалом 5 дней по 1,5 мл также внутримышечно.

Для получения отдельной преципитирующей сыворотки для каждого вида животного [нутрий, крыс и т.д.] брали отдельное лабораторное животное - кролики с массой не менее 2 кг.

Антисыворотки, применяемые для реакции преципитации, обладали специфичностью, т.е. давали преципитат только с сывороткой того вида животного, кровью которого проводилась гипериммунизация.

Сыворотка обладала большой чувствительностью и давала положительную реакцию даже при значительном разведении используемого раствора белков [мясной вытяжки] . Титр антисыворотки определяли путем последовательных разведений сыворотки того же вида животного, против которого была приготовлена данная антисыворотка. Пригодна к употреблению антисыворотка с титром не ниже 1:1000 при условии, что она реагирует только с сывороткой определенного вида животного.

Исследование мяса методом преципитации проводили следующим образом. Мясо, освобожденное от жира и связок, мелко нарезали и в течение 3 ч настаивали в физрастворе. Полученный экстракт фильтровали до концентрации в нем белка 1: 1000, степень разведения определяли при помощи капиллярной пробы. Для этого стеклянный капилляр длиной около 10 см опускали одним концом в экстракт, жидкость засасывали в таком количестве, чтобы энергия капиллярности не была полностью исчерпана. Затем капилляр тем же концом вносили наклонно в налитую азотную кислоту, которая также входила в капилляр. На месте соприкосновения экстракта с кислотой образовалось белое кольцо осажденного белка. Экстракт разводили до тех пор, пока в последней пробе не появлялось едва заметное кольцо, что соответствует содержанию белка в экстракте 1:1000.

Разведенный экстракт вводили в Уленгутовскую пробирку в количестве 0,9 мл и в третью - столько же сыворотки животного, мясо которого предполагали обнаружить при исследовании. Появление кольца в первой и третьей пробирках в течении 1 ч указывало на то, что исследуемое мясо принадлежит данному виду животного. Кольцо только в третьей пробирке означало отрицательный результат и исследование повторяли с другой антисывороткой.

Наиболее достоверным при определении видовой принадлежности мяса является реакция преципитации, которая является неоспоримой в судебной экспертизе. Реакция преципитации - наиболее точный и быстрый метод в отличие от других известных методов исследования.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к экспертизе продуктов животноводства. Для расширения технологических возможностей в качестве антигена используют кровь животных, например крыс, нутрий или лягушек, и вводят подкожно через определенные интервалы. Реакция преципитации наиболее точный и быстрый метод в отличие от других известных методов исследования и применяется в судебной экспертизе.

Способ получения преципитирующих сывороток для определения видовой принадлежности мяса домашних и диких животных, включающий подкожные и внутримышечные инъекции антигена лабораторному животному с последующим взятием крови у того же животного, отличающийся тем, что в качестве антигена используют кровь животных, например нутрии, крыс или лягушек, и вводят подкожно через каждые 5 дней в следующих дозировках: 0,2 - 0,3; 0,4 - 0,5; 0,6 - 0,7; 0,8 - 0,9 мл и 1 - 1,2 мл внутримышечно с интервалом 5 дней, затем после последнего введения не ранее чем 10 дней берут кровь из сердца лабораторного животного.