СПОСОБ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВЕННОЙ ПОЛНОЦЕННОСТИ ТРОМБОЦИТОВ Российский патент 2000 года по МПК G01N33/48 G01N1/30 

Изобретение относится к медицине, а именно к клиническим лабораторным исследованиям, и может быть использовано для оценки качественной полноценности форменных элементов крови - тромбоцитов.

Известен способ оценки качественной полноценности тромбоцитов (см. Балуда В.П., Баркаган 3.С., Гольдберг Е.Д., Кузник Б.И., Лакин К.М. Лабораторные методы исследования системы гемостаза. Томск, 1980 г., с.83-95), предусматривающий регистрацию изменений оптической плотности плазмы крови, полученной из вены, до и после введения в нее определенного количества активаторов агрегации тромбоцитов (АДФ, коллагена, тромбина, адреналина, ристомицина и др.).

Однако данный способ является трудоемким, требует наличия соответствующей квалификации исследователя, специальной аппаратуры: фотоэлектроколориметра, оснащенного мешалкой, спектрофотометра, агрегографа или агрегометра, дефицитных реактивов. Необходим предварительный подбор оптимальных доз активаторов агрегации, подготовка аппаратуры. На проведение одного исследования требуется времени от 1 до 1,5 ч. Поэтому метод почти не применяется в лабораториях лечебных учреждений практического здравоохранения, что затрудняет своевременную диагностику большой группы заболеваний, обусловленных качественной неполноценностью, дисфункцией тромбоцитов - тромбоцитопатий.

Задача изобретения заключается в сокращении времени исследования, упрощении способа оценки качественной полноценности тромбоцитов и снижении материальных затрат.

Для этого в способе оценки качественной полноценности тромбоцитов путем исследования крови, согласно изобретению, готовят два мазка крови из пальца, докрашивают второй мазок чернилами в течение 1 мин, затем мазки микроскопируют с иммерсией и при наличии в первом мазке скоплений не менее чем из 10 тромбоцитов, а во втором - псевдоподий не менее чем у 60% тромбоцитов считают тромбоциты качественно полноценными.

Циркулирующие в неповрежденных сосудах тромбоциты имеют дисковидную форму и представляют собой неактивированные элементы. При повреждении эндотелия сосудов, что имеет место, в частности, при проколе пальца скарификатором для взятия крови на анализ, происходит мгновенная активация тромбоцитов за счет освобождающихся при этом различных агонистов - индукторов. Активированный тромбоцит из дисковидной клетки с гладкой поверхностью превращается в сферически-шиповидную: набухает, округляется и выделяет отростки-псевдоподии. Это облегчает последующее взаимодействие тромбоцитов друг с другом, с фибрином и сосудистой стенкой, то есть способствует процессам адгезии и агрегации, характеризующим качественную полноценность этих клеток. При тромбоцитопатиях такая способность тромбоцитов нарушается.

В мазках крови из пальца, подготовленных в соответствии с изобретением, отчетливо просматривается возможность тромбоцитов к образованию псевдоподий и спонтанной агрегации (агломерации).

Нормальные величины обоих информативных параметров, то есть число клеток в скоплениях тромбоцитов в первом мазке - не менее 10 клеток, а также количество тромбоцитов с псевдоподиями во втором мазке - не менее чем у 60% тромбоцитов, определены экспериментальным путем в ходе обследования более 150 пациентов.

Разработанный способ оценки качественной полноценности тpoмбoцитoв позволяет давать скрининговую оценку качественной полноценности последних и решать вопрос о необходимости проведения дальнейших более сложных анализов, характеризующих функциональную активность тромбоцитов как у отдельных больных с соответствующей патологией, так и при массовых обследованиях.

Способ апробирован на 36 больных стационара клиники института и 467 рабочих Нижнекамского нефтехимкомбината.

Способ осуществляют следующим образом.

У обследуемого в процессе забора крови из пальца на обычный клинический анализ делают два тонких мазка крови: первый - для изучения лейкоцитарной формулы, второй - для подсчета количества тромбоцитов (из крови, набранной с 5%-ным раствором лимоннокислого натрия для определения СОЭ). Оба мазка фиксируют 96%-ным этиловым спиртом в течение 30 мин, окрашивают краской Романовского общепринятым унифицированным методом. Второй мазок затем докрашивают фиолетовыми или синими чернилами для авторучек в течение 1 мин для большей контрастности окраски тромбоцитов. Мазки промывают водой, высушивают и изучают с помощью иммерсионной системы микроскопа. В первом мазке крови, предназначенном для подсчета элементов лейкоцитарной формулы, отыскивают скопления тромбоцитов, содержащих не менее 10 клеток. Способность тромбоцитов собираться в скопления характеризует их достаточную агрегационную активность. Во втором мазке крови, предназначенном для подсчета количества тромбоцитов, оценивают способность последних образовывать отростки-псевдоподии, что является показателем их качественной полноценности. При наличии псевдоподий не менее чем у 60% тромбоцитов делают вывод об их хорошей функциональной активности.

Одно исследование, проводимое в вышеуказанных двух мазках, занимает времени не более 3-5 мин.

Примеры практической реализации.

Пример 1. Пациент X. Количество тромбоцитов 285,6•10⁹/л. При просмотре первого мазка по обоим краям его выявлено до 20-25 скоплений тромбоцитов, содержащих не менее 50 клеток в каждом. Во втором мазке до 90% тромбоцитов имеют отчетливые отростки.

Заключение: способность тромбоцитов к образованию псевдоподий и спонтанной агрегации не нарушена, то есть тромбоциты качественно полноценные.

Пример 2. Пациент О. Жалуется на геморрагические петехиальые высыпания. Количество тромбоцитов 60,5•10⁹л.

При просмотре первого мазка обнаружены 2-3 скопления тромбоцитов, содержащих от 20 до 50 клеток. Во втором мазке все тромбоциты содержат отчетливые отростки-псевдоподии.

Заключение: при наличии выраженной тромбоцитопении способность тромбоцитов к образованию псевдоподий и спонтанной агрегации не нарушена - тромбоциты качественно полноценные.

Пример 3. Пациент И. Жалуется на носовые кровотечения и периодическое появление синяков на теле и конечностях. Количество тромбоцитов 310,6•10⁹л.

При просмотре первого мазка тромбоциты располагаются изолированно, скоплений их не обнаружено. Во втором мазке выявлены лишь единичные тромбоциты, содержащие отростки-псевдоподии.

Заключение: способность тромбоцитов к образованию псевдоподий и спонтанной агрегации нарушена, подозрение на наличие тромбоцитопатии - тромбоциты качественно неполноценные.

Предлагаемый способ оценки качественной полноценности тромбоцитов, в сравнении с прототипом, прост в исполнении, сокращает время исследования с 1-1,5 ч до 3-5 мин, снижает трудоемкость и материальные затраты.

Способ технически подготовлен и может широко применяться в лабораториях практического здравоохранения.

Способ может быть использован в медицине, в частности в клинических лабораторных исследованиях. Способ обеспечивает простоту исследования и сокращение времени при снижении материальных затрат. Осуществляют забор крови из пальца и готовят два мазка. Второй мазок докрашивают чернилами в течение 1 мин, затем мазки микроскопируют с иммерсией и при наличии в первом мазке скоплений не менее чем из 10 тромбоцитов, а во втором - псевдоподий не менее чем у 60% тромбоцитов считают тромбоциты качественно полноценными.

Способ оценки качественной полноценности тромбоцитов путем исследования крови, отличающийся тем, что готовят два мазка крови из пальца, второй мазок докрашивают чернилами в течение 1 мин, затем мазки микроскопируют с иммерсией и при наличии в первом мазке скоплений не менее чем из 10 тромбоцитов, а во втором - псевдоподий не менее чем у 60% тромбоцитов считают тромбоциты качественно полноценными.