СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОЛИЗАТА МОЗГОВОЙ ТКАНИ Российский патент 2000 года по МПК A61K35/30 

Изобретение относится к производству лекарственных средств, применяемых в медицинской практике, и касается получения препаратов из животного сырья, а именно гидролизата мозговой ткани сельскохозяйственных животных.

Известен способ получения гидролизата мозговой ткани, включающий измельчение и ферментативный гидролиз сырья, отделение экстракта от жмыха микрофильтрацией на мембранных фильтрах с размером пор 0,22 - 0,5 мкм с последующей двухстадийной ультрафильтрацией на мембранах с селективностью 30 - 50 и 10 - 15 кД и выпариванием ультрафильтрата в вакууме [1]. Однако вследствие малой эффективности метода микрофильтрации в процессе разделения получаемого субстрата способ характеризуется низким выходом целевого продукта.

По достигаемому техническому результату наиболее близким аналогом (т.е. прототипом) является метод, включающий измельчение головного мозга убойного скота, ферментативный гидролиз сырья сериновой протеазой, нагрев фермент-субстратной смеси с целью инактивации фермента и ее охлаждение с последующим осаждением жмыха и нерасщепленного белка этиловым спиртом в соотношении 2,5 к 1 объему гидролизата, микрофильтрацию через мембраны с размером пор 0,22 - 0,5 мкм, ультрафильтрацию на мембранах с селективностью 5 - 15 кД и выпаривание в вакууме спирта и воды [2]. Недостатками метода являются низкий выход целевого продукта, составляющий 0,2 л с 1 кг исходного сырья, а также использование в технологии больших объемов спирта, что делает производство взрывоопасным и дорогостоящим.

Настоящим изобретением решена задача повышения выхода целевого продукта с единицы сырья при сохранении требуемого качества.

Для достижения поставленной задачи используют свежую или дефростированную кору головного мозга убойного скота, которую измельчают, смешивают с водой в соотношении 1: 1 и подвергают гидролизу ферментом "Бактилин" [3, 4], взятым из расчета 0,8 - 1,2 ПЕ/г сырья, в условиях pH-статирования при (7,6 ± 0,1) и температуре (40 ± 1)^oC в течение 3 - 4 ч. По окончании процесса гидролиза смесь подкисляют до pH (5,5 ± 0,5), прогревают при температуре (98 ± 0,5)^oC в течение 30 - 40 мин и фильтруют горячей через тканевой фильтр. Осветленный гидролизат после охлаждения подвергают ультрафильтрации на мембранах с селективностью 10 - 15 кД с целью доочистки от белковых контаминаций, выпаривают под вакуумом на 50% (по объему) и обрабатывают активированным углем, взятым из расчета 3 - 4%, в течение 10 - 15 мин.

Целевой продукт, полученный согласно разработанному способу, не содержит белковых контаминаций (отрицательная реакция с трихлоруксусной кислотой) и по своему составу полностью соответствует гидролизату мозговой ткани, получаемому по способу-прототипу (см. табл. 2).

В отличие от способа-прототипа, согласно которому освобождение гидролизата от жмыха и нерасщепленного белка осуществляется спиртовым осаждением, предлагаемый метод предусматривает денатурацию высокомолекулярных контаминаций термической обработкой при пониженных значениях pH с последующим удалением осадка фильтрацией через полотняный фильтр и ультрафильтрацией на мембранах с селективностью 10 - 15 кД.

Другим отличительным признаком заявляемого способа является использование фермента "Бактилин", который, обладая высокой специфичностью к субстрату, обеспечивает наиболее полное расщепление белка.

Совокупность отличительных признаков позволяет существенно увеличить выход целевого продукта при сохранении требуемого качества.

Примеры осуществления способа.

Пример 1. 30 кг свежей или дефростированной коры головного мозга крупного рогатого скота измельчают электромясорубкой, заливают 30 л дистиллированной воды и гомогенизируют на роторно-пульсационном аппарате. Гомогенат помещают в реактор, нагревают до температуры (40 ± 1)^oC, с помощью 1 н. раствора NaOH устанавливают pH (7,6 ± 0,1) и, при постоянном перемешивании электромешалкой, добавляют 24000 ПЕ бактилина. Гидролиз проводят в течение 3 - 4 ч при перемешивании.

По окончании процесса гидролиза субстрат подкисляют до pH (5,0 ± 0,1) с помощью 12%-ного раствора HCl, прогревают при температуре (98 ± 0,5)^oC в течение 30 - 40 мин и фильтруют горячим через миткаль.

Осветленный гидролизат охлаждают до комнатной температуры и подвергают баромембранному разделению в тангенциальном потоке на ультрафильтрационных мембранах с селективностью 15 кД. Полученный пермеат (около 30 л) выпаривают под вакуумом до объема, составляющего 50% от исходного (15 л), и обрабатывают активированным углем, взятым из расчета 4%, в течение 10 мин, фильтруют через полотняный фильтр, стерилизуют и готовят лекарственную форму. Выход целевого продукта составляет 0,5 л/кг сырья.

Пример 2. 30 кг свежей или дефростированной коры головного мозга свиней измельчают, гомогенизируют и гидролизуют по примеру 1, добавляя 36000 ПЕ бактилина. Полученный гидролизат подкисляют до pH (6,0 ± 0,1), прогревают и фильтруют горячим. Охлажденный фильтрат подвергают ультрафильтрации на мембранах с селективностью 10 кД. Полученный пермеат выпаривают под вакуумом на 50% (по объему) и обрабатывают активированным углем, взятым из расчета 3%, в течение 15 мин, фильтруют, стерилизуют и готовят лекарственную форму. Выход составляет 0,5 л/кг сырья.

Данные, представленные в таблицах, свидетельствуют о 2,5-кратном повышении выхода целевого продукта, получаемого заявляемым методом (таблица 1) при отсутствии статистически значимых различий в компонентном составе целевых продуктов, полученных согласно способу-аналогу [1] и заявляемому способу (таблица 2).

Использованные источники информации
1. Патент РФ N 2049471, A 61 K 35/28, Опубл. 10.12.95, Бюл. 34.

2. Патент РФ N 2049472, A 61 K 35/28, Опубл. 10.12.95, Бюл. 34.

3. Бактилин. ТУ 9381-001-04863057-97.

4. Мат. конф. биохимиков Урала и Западной Сибири "Актуальные вопросы прикладной биохимии и биотехнологии"/ - Уфа, - 1998. - С. 254-256.

Изобретение относится к производству лекарственных средств, применяемых в медицинской практике, и касается получения препаратов из животного сырья, а именно гидролизата мозговой ткани сельскохозяйственных животных. Сущность метода состоит в том, что используют кору головного мозга убойного скота, которую измельчают и подвергают гидролизу ферментом "Бактилин", отделение экстракта от жмыха осуществляют термической обработкой при рН 5,0 - 6,0 с последующим отделением осадка на полотняном фильтре. Технический результат - повышение выхода целевого продукта с единицы сырья при сохранении требуемого качества. 1 з.п.ф-лы, 2 табл.

1. Способ получения гидролизата мозговой ткани путем измельчения и гомогенизации коры головного мозга убойного скота, ферментативного гидролиза с последующей инактивацией фермента, отделения экстракта от жмыха, очистки от негидролизованного белка методом ультрафильтрации и выпаривания под вакуумом, отличающийся тем, что в качестве фермента используют "Бактилин", отделение экстракта от жмыха осуществляют термической обработкой при пониженных значениях рН с последующим отделением осадка на полотняном фильтре. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что термическую обработку гидролизата проводят при рН 5,0 - 6,0 в течение 30 - 40 мин.