СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ТКАНЕВОГО ПРЕПАРАТА Российский патент 2000 года по МПК A61K35/50 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу получения биологически активного тканевого препарата из плаценты, обладающего профилактическим и терапевтическим действием при заболеваниях различной этиологии сельскохозяйственных животных.

Известен способ получения тканевых препаратов из трупных тканей, денатурированных хлором (Труды Саратовского медицинского института, том 48, стр. 19 - 22, 1948 г.).

Недостатком известного способа является получение лекарственных средств с низкой биологической активностью.

Известен способ приготовления препарата из плаценты, включающий измельчение сырья, проведение слабого кислотного гидролиза, выделение продукта центрифугированием, нейтрализацию надосадочной жидкости, выделение и очистку препарата, сублимационное высушивание (патент США N 4054648, МПК 6 А 61 К 35/50, 1977 г.).

Недостатком указанного способа являются большие затраты времени, трудоемкость и низкий выход конечного продукта.

Наиболее близким к настоящему изобретению по технической сущности и достигаемому результату при использовании является способ получения биологически активных веществ из плаценты, включающий промывку плаценты проточным барьерным раствором NaCl в отфильтрованной воде над ситом, разделение плаценты на составные части: пуповину, амнион, хорион гладкий, хорион ворсинчатый, последний перед гемолизом грубо измельчают. Проводят гемолиз каждой ткани раздельно, затем каждую ткань окисляют диоксидом хлора, отмывают дистиллированной водой до pH 2,6 - 3,0, после чего пуповину, амнион и хорион гладкий измельчают и дополнительно каждую ткань дважды измельчают и стерилизуют в диспергаторе, фильтруют через сито и собирают фильтраты, содержащие целевой продукт (патент Российской Федерации N 2033797, МПК 6 А 61 К 35/50, 1992 г. ).

В качестве основных недостатков, характерных для известного способа, является использование в процессе получения препарата химических веществ 2 и 3 класса опасности (хлорат калия, азотная кислота), взрывоопасного вещества (хлорат калия), сложность, длительность и высокая трудоемкость процесса производства и наличие в готовом препарате диоксида хлора.

Технология реализации способа не исключает многочисленные контакты продукта в процессе его изготовления с окружающей средой.

Различные режимы неоднократной механической и химической обработки для каждого компонента исходного сырья: пуповины, амниона, хориона гладкого, хориона ворсинчатого, обширная номенклатура используемых материалов и реагентов усложняют технологию получения препарата, приводят к увеличению длительности и трудоемкости процесса.

Отрицательное влияние на обслуживающий персонал оказывает ультразвуковое излучение стерилизующего диспергатора.

Задача, на решение которой направлено данное изобретение, заключается в создании способа получения биологически активного тканевого препарата, не содержащего соединений хлора, а также в обеспечении повышения биологической активности получаемого препарата, упрощении способа производства при сокращении его длительности, снижении трудоемкости и повышении уровня безопасности производства.

Указанный технический результат, заключающийся в получении препарата, не содержащего соединений хлора, с повышенной биологической активностью достигается в предложенном способе за счет использования экологически чистого окисляющего реагента, позволяющего реализовать иной механизм воздействия на ткани плацентарной оболочки и обеспечить снижение в готовом препарате концентрации гормональных веществ.

Иная последовательность технологических операций получения препарата позволяет унифицировать процесс обработки тканей, т.к. плацентарные оболочки перерабатываются целиком, без разделения на составные части, в отличие от раздельного процесса обработки тканей в прототипе, т.е. использовать только один режим, реактивы, материалы и т.д.

Выбранное аппаратурное оформление позволило организовать замкнутый технологический процесс, что существенно повысило уровень асептики производства.

Поставленная задача с достижением упомянутого технического результата, решается тем, что в известном способе получения биологически активного тканевого препарата, включающем отмывку плацентарной оболочки, грубое измельчение и гемолиз тканей, обработку их окисляющим раствором, тонкое измельчение и фильтрацию препарата, плацентарную оболочку подвергают гомогенизации без разделения на составные части, после чего проводят гемолиз измельченных тканей в очищенной воде, тонко измельчают ткани, а на полученную суспензию воздействуют раствором перекиси водорода, после чего повторно тонко измельчают полупродукт, фильтруют и получают готовый препарат;
- а также тем, что плацентарную оболочку перед гемолизом гомогенизируют до получения частиц размером 0,01 - 1,0 мм;
- а также тем, что гемолиз плацентарной оболочки осуществляют в течение 10 - 18 часов в очищенной воде с температурой 8 -10^oС, расходом воды не более трех литров на 1 кг тканей;
- а также тем, что используют трехпроцентный раствор перекиси водорода, воздействуя на суспензию в течение 50 - 60 минут при постоянном перемешивании;
- а также тем, что полученный полупродукт, по крайней мере, дважды подвергают тонкому измельчению в течение 4,5 - 5 минут.

Предлагаемый способ получения биологически активного тканевого препарата из плаценты человека включает отмывку плаценты, гомогенизацию тканей плаценты без разделения на составные части, гемолиз тканей в очищенной воде, загрузку тканей в роторно-пульсационную установку (РПУ) марки УМ-0,75.

Установка включает в себя реактор, систему трубопроводов, роторно-пульсационный аппарат (РПА).

Реактор состоит из корпуса с рубашкой, крышки с загрузочным люком, мотора редуктора, мешалки рамного типа, устройств наполнения и опорожнения, устройств ввода в полость реактора приборов контроля, систем нагрева и охлаждения продукта.

РПА обеспечивает тонкое перемешивание и измельчение получающейся эмульсии с одновременной циркуляцией продукта. Специальная конструкция рабочей зоны аппарата обеспечивает гидродинамический режим с генерацией импульсов отрицательного ускорения и давления, что приводит к возникновению в пограничном слое явления кавитации, способствуя повышению эффективности процесса эмульгирования и позволяет получить стабильную эмульсию, содержащую до 90% частиц с размерами не более 5 мкм. На выходе из аппарата автоматически осуществляется фильтрация готового продукта. Использование аппаратов подобного типа позволяет значительно повысить биологическую активность обрабатываемых лекарственных субстанций.

Далее проводят тонкое измельчение тканей путем циркуляции измельченных тканей через РПА, обеззараживание и окисление раствором перекиси водорода в реакторе, затем повторно обрабатывают полупродукт в роторно-пульсационном аппарате и после фильтрации получают готовый продукт.

Способ иллюстрируется следующим примером.

Плаценту тщательно отмывают вручную в проточной очищенной воде. Удаляют слизь, сгустки крови и другие включения. Расход воды составляет 8 - 10 литров на одну плацентарную оболочку.

Проводят измельчение плаценты на гомогенизаторе, получая гомогенат с размерами частиц 0,01 - 1,0 мм. Затем его помещают в реактор и подвергают гемолизу в течение 10 - 18 часов в очищенной воде с температурой 8 - 10^oC. Расход воды составляет не более 3 литров на 1 кг тканей.

Отмытый от следов крови гомогенат загружают в реактор РПУ и подвергают тонкому измельчению на РПА в течение 1 минуты. Размеры получающихся при этом частиц составляют 0,001 - 0,0001 мм.

После этого заливают в емкость установки 3%-ный раствор перекиси водорода в соотношении 2 : 1, и выдерживают в течении 50 - 60 минут при постоянном перемешивании. Полученный полупродукт повторно обрабатывают, пропуская через РПА в течение 4 - 5 минут, на выходе из которого осуществляется его фильтрация.

Препарат при помощи РПА выгружают из установки и разливают во флаконы вместимостью 10, 50, 100 и 250 см³, укупоривают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками.

Препарат представляет собой эмульсию белого или белого с желтоватым оттенком цвета, со специфическим запахом, отвечает требованиям, предъявляемым к инъекционным препаратам. Сухой остаток препарата в пределах (2,1 - 2,5)%, величина pH (2,4 -3,0) единиц pH.

Препарат содержит нуклеиновых кислот не менее 0,04 мг/мл, гексуроновых кислот не менее 0,25 мг/мл, белка не более 3,0 мг/мл, диоксид хлора отсутствует.

Диапазон параметров и режимы, характеризующие операции способа, были определены на основании теоретических расчетов, моделирования и подтверждены экспериментально.

Диапазон размеров частиц 0,01 - 1,0 мм после гомогенизации тканей оболочки выбран исходя из условий оптимизации процесса гемолиза, в целях увеличения поверхности раздела фаз для уменьшения времени протекания процесса.

Время, в течение которого осуществляется гемолиз тканей, определено в 10 - 18 часов. Величина нижнего предела соответствует минимально необходимому времени, в течение которого обеспечивается отмывка измельченных тканей от следов крови (отсутствует розовая окраска промывных вод). Верхний предел установлен исходя из того, что после 18 - 19 часов начинается интенсивная экстракция полезных веществ из тканей.

Температура очищенной воды, используемой для гемолиза, выбрана в диапазоне 8 - 10^oC исходя из условий замедления процесса экстракции полезных веществ. Расход очищенной воды (3 литра на 1 кг тканей) обеспечивает полное удаление следов крови из полученного гомогената.

Время воздействия раствором перекиси водорода определяется временем эффективного воздействия перекиси (30 - 40 минут), по истечении которого перекись разлагается на безвредные компоненты, обеспечивая тем самым отсутствие в препарате вредных примесей.

При испытаниях препарата, полученного по предлагаемому способу, в производственных условиях были установлены его широкий спектр действия и высокая эффективность при профилактике и лечении различных заболеваний у коров, свиней и молодняка. Применение препарата способствовало увеличению продуктивности у животных и положительно влияло на воспроизводство. (см. таблицы 1 и 2).

Положительные результаты получены при испытании препарата в птицеводстве и рыбоводстве.

Препарат увеличивает яйценоскость, привесы у цыплят-бройлеров, выводимость и вывод цыплят из инкубаторов и их сохранность; повышает сохранность сеголеток карпа и способствует получению дополнительных привесов живой массы у них.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу получения биологически активного тканевого препарата из плаценты, обладающего профилактическим и терапевтическим действием при заболеваниях различной этиологии сельскохозяйственных животных. Способ включает отмывку плаценты очищенной водой, получение гомогената плаценты, гемолиз тканей в очищенной воде, первое тонкое измельчение тканей в роторно-пульсационном аппарате, обеззараживание и окисление 3%-ным раствором перекиси водорода, повторную обработку полупродукта в роторно-пульсационном аппарате, фильтрацию и получение готового продукта. Препарат увеличивает яйценоскость, привесы у цыплят-бройлеров, выводимость и вывод цыплят из инкубаторов и их сохранность; повышает сохранность сеголеток карпа и способствует получению дополнительных привесов живой массы у них. 4 з.п. ф-лы, 2 табл.

1. Способ получения биологически активного тканевого препарата, включающий отмывку плацентарной оболочки, грубое измельчение и гемолиз тканей, обработку их окисляющим раствором, тонкое измельчение и фильтрацию препарата, отличающийся тем, что плацентарную оболочку подвергают гомогенизации без разделения на составные части, после чего проводят гемолиз измельченных тканей в очищенной воде, тонко измельчают ткани и на полученную суспензию воздействуют раствором перекиси водорода, после чего повторно тонко измельчают полупродукт, фильтруют его, получая готовый препарат. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что плацентарную оболочку перед гемолизом гомогенизируют до получения частиц размером 0,01 - 1,0 мм. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что гемолиз плацентарной оболочки осуществляют в течение 10 - 18 ч в очищенной воде с температурой 8 - 10^oC, расходом воды не более 3 л на 1 кг тканей. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют 3%-ный раствор перекиси водорода, воздействуя на суспензию в течение 50 - 60 мин при постоянном перемешивании. 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что полученный полупродукт, по крайней мере, дважды подвергают тонкому измельчению в течение 4,5 - 5 мин.