СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ ПЛАЦЕНТЫ Российский патент 1995 года по МПК A61K35/50 

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к изготовлению лекарственных форм на основе стерилизующей механической обработки и химической денатурации хлором тканей.

Известен способ изготовления лекарственных форм на основе денатурации хлором трупных тканей (Труды Саратовского медицинского института, 1948, т. 48, с. 19-22).

Недостатком этого способа является то, что получаемые на его основе лекарственные формы имеют низкую лечебную эффективность.

Наиболее близким к изобретению способом, выбранным в качестве прототипа, является способ приготовления терапевтического агента из плаценты, включающий измельчение плаценты с водой или разбавленным физиологическим солевым раствором, подмешение смесью уксусной и соляной кислот, нагревание до 75-90^оС, центрифугирование, нейтрализацию надосадочной жидкости, ее концентрирование диализом или фильтрованием и последующую очистку с помощью хроматографии и лиофилизацию целевого продукта.

К недостаткам этого способа относится его сложность, длительность, а также низкий выход получаемого препарата.

Целью изобретения является повышение экономичности использования плаценты человека, обеспечение стерилизации продуктов при минимально возможном тепловом и химическом воздействии на плаценту, максимальное сохранение биологически активных веществ.

Способ получения препаратов из плаценты включает в себя получение окисляющего реагента, отмывку плаценты в нейтральном барьерном растворе, отделение амниона, пуповины, хориона гладкого, хориона ворсинчатого, грубое измельчение хориона ворсинчатого перед гемолизом, гемолиз полученных тканей в нейтральном барьерном растворе, денатурацию тканей в диоксиде хлора, отмывку от окисляющего раствора, грубое измельчение денатурированных амниона, пуповины, хориона гладкого, диспергирование тканей, разлив эмульсии, причем гемолиз и денатурация тканей проводят раздельно (в разных реакторах), режимы денатурации для разных тканей различны, диспергирование тканей производится специальным эмульгатором, обладающим по своей конструкции способностью частичной стерилизации диспергированной эмульсии за счет непрерывного разрывного воздействия на частицы в узком пристеночном потоке эмульсии.

Получение окисляющего реагента осуществляется в ходе реакций, описываемых следующими символическими уравнениями:
NaCl + HNO₃ NaNO₃ + HCl
3HCl + HNO₃ Cl₂ + 2H₂O + NOCl
KClO₃ + HNO₃ HClO₃ + KNO₃
HClO₃ + 5HCl 3Cl₂ + 3H₂O
Cl₂ + H₂O HCl + HOCl
3HClO₃ H₂O + 2ClO₂ + HClO₄
HOCl HCl + O
2HOCl H₂O + Cl₂O
3HOCl 2HCl + HClO₃
Для проведения указанных реакций в колбу емкостью 250 мл загружают 0,66 кг калия хлорноватистого, 0,066 кг натрия хлорида и 0,132 л 33% азотной кислоты плотностью 1,205 г/см³. Колбу закрывают пробкой с газоотводными трубками из флоропласта или стекла (для отвода образующихся газообразных продуктов).

В бутыль загружают 22 л дистиллированной воды. Бутыль закрывают пробкой из резины, снабженной двумя стеклянными трубками. Первая трубка служит для ввода газообразных продуктов, получаемых в колбе, и имеет на конце керамический распылитель воздуха аквариумный и доходит до дна бутылки, а вторая трубка, конец которой находится сразу же под пробкой, служит для отвода газов, не поглотившихся водой. Эти газы пропускаются в следующую бутыль с дистиллированной водой.

Колбу помещают на водяную баню и ведут постепенный нагрев до 80^оС. При этом происходит химическая реакция с выделением газообразных продуктов, содержащих промежуточные соединения хлора. Газ пропускается до тех пор, пока в колбе идет реакция. Внешними признаками прохождения реакции является вспенивание содержимого колбы, изменение цвета от бесцветно-белого до желтого. Реакция считается законченной, когда исчезает осадок, растворенный остаток становится прозрачным и когда не происходит выделение газа.

Раствор окисляющего реагента представляет собой светло-желтую с зеленоватым оттенком жидкость с резким специфическим удушливым запахом хлора.

По окончании реакции определяют содержание ClO₂ и Cl₂ в бутыле.

Способ иллюстрируется следующим примером.

Плаценту промывают проточным барьерным раствором NaCl в отфильтрованной воде над ситом (размер ячеек 1,5 мм). Отмывают плаценту вручную от сгустков крови, прочих мелких компонентов. Расход раствора 20 л на 1 л плаценты. Для приготовления раствора используется отфильтрованная промышленным фильтром вода и 1 г NaCl на 1 л воды.

Разделение плаценты на составные части проводят вручную, пуповину отделяют ножницами. После отделения от остальных тканей хорион ворсинчатый грубо измельчается на электромясорубке.

Полученные ткани подвергаются гемолизу в нейтральном барьерном растворе в течение 24 ч из расчета 20 л раствора на 1 кг сырья при комнатной температуре. Гемолиз проводится в полиэтиленовой или эмалированной посуде.

Денатурация тканей осуществляется в четырех реакторах (отдельный реактор для каждой ткани). В реакторы заливают раствор окисляющего реагента в количестве 4 л на 1 кг промежуточных продуктов с содержанием диоксида хлора для амниона N 1 г/л; для хориона гладкого N 2 N 3 г/л, N 3 N 2; для пуповины N 4 N 5 г/л; N 4 N 5, N 1, 1 2,3,4,5.

Смеси тщательно перемешивают, герметично закрывают и оставляют при комнатной температуре в темном месте.

Первая денатурация длится приблизительно 12 ч с частым перемешиванием.

Продолжительность денатурации определяется содержанием диоксида хлора в растворе окисляющего реагента. При отсутствии в растворе реакций на диоксид хлора производят замену раствора окисляющего реагента. Отработанный раствор окисляющего реагента сливают и заливают новой порцией раствор окисляющего реагента из расчета 1 кг сырья на 4 л окисляющего реагента. Количество денатураций зависит от промежуточного продукта: для амниона требуется до двух денатураций, для хориона гладкого до трех денатураций, для пуповины до пяти денатураций, для хориона ворсинчатого до семи денатураций.

Отмывка от окисляющего раствора осуществляется следующим способом.

Первоначально отделяют денатурированные ткани от раствора окисляющего реагента при помощи сита. Затем ткани подвергают отмывке дистиллированной водой в расчете 4 ч. воды на 1 ч. сырья, выдерживают в воде при комнатной температуре не более 0,5 ч, периодически перемешивают и измеряют кислотность (рН) промывных вод через каждые 10 мин. При рН в интервале от 2,6 до 3,0 материал считается отмытым. После отмывки денатурированные амнион, хориона гладкий и пуповина подвергаются измельчению на электрической мясорубке в течение 2 с. Хорион ворсинчатый был измельчен ранее.

После этого все ткани подвергаются диспергированию поочередно для изготовления препаратов из амниона, пуповины, хориона или препарата из всей массы плаценты. Для этого к тканям добавляется стерильная апирогенная вода в расчете 0,5 л воды на 1 кг ткани. После этого массу помещают в специальный диспергатор, где масса подвергается диспергированию в течение 3 мин. В процессе диспергирования частицы непрерывно подвергаются стерилизующему разрывному воздействию в узком пристеночном потоке эмульсии. Разрывное воздействие организуется специальной конструкцией неподвижной части диспергатора и ротора с большим числом оборотов, в которой каждая частица многократно движется по многовитковой спирали с узкими проходами и расширениями, чем достигается разрывающий эффект гидроудара на частицу, в том числе на микробы и вирусы.

Диспергированную плаценту и другие ткани пропускают через сито (размер ячеек 0,3 мм), чтобы полученная масса могла пройти через иглу 0840. Остаток на сите собирается и передается к следующей партии денатурированной плаценты для повторного диспергирования.

После диспергирования плаценты или тканей осуществляется разлив. Разлив эмульсии проводят в стерильном боксе. Наполняют индивидуально каждый флакон по 10, 50, 250, 500 мл. Флаконы с эмульсией закрывают резиновыми пробками и передают на закатку. На каждый флакон одевают металлический колпачок и флаконы устанавливают в гнездо закаточной машины.

Ткани плаценты могут подвергаться диспергированию как смешанные друг с другом, так и раздельно. В последнем случае эмульгированные компоненты могут использоваться в чистом виде или смешиваться друг с другом в пропорциях, обеспечивающих требуемое лечебное действие.

Проверка эффективности действия препаратов, полученных по описанному способу из плаценты, а также других тканей денатурированных эмульгированных проводилась в медицинской и ветеринарной практике в соответствии с официальными разрешениями фармкомитета и Веткомитета и утвержденными техническими условиями. Результаты подтвердили высокую специфическую активность препаратов из плаценты.

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к изготовлению лекарственных форм на основе стерилизующей механической обработки и химической денатурирации хлором тканей. Цель изобретения - повышение экономичности использования плаценты человека, обеспечение стерилизации продукта при минимально возможном тепловом и химическом воздействии на плаценту, максимальном сохранении биологически активных веществ. Изготовление препаратов из плаценты включает получение окисляющего реагента, отмывку плаценты в нейтральном барьерном растворе, отделение амниона, пуповины, хориона гладкого, хориона ворсинчатого, грубое измельчение хориона ворсинчатого перед гемолизом, гемолиз полученных тканей в нейтральном барьерном растворе, денатурацию тканей в диоксиде хлора, отмывку от окисляющего раствора, грубое измельчение денатурированных амниона, пуповины, хориона гладкого, диспергирование тканей, причем гемолиз и денатурация тканей происходит раздельно, режимы денатурации для разных тканей различны, диспергирование стерилизующее.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ ПЛАЦЕНТЫ, включающий измельчение сырья, обработку окисляющим раствором, отделение осадка фильтрованием с последующей очисткой фильтрата, содержащего целевой продукт, и его лиофилизацию, отличающийся тем, что в качестве сырья дополнительно используют пуповину, амнион, хорион гладкий и хорион ворсинчатый, последний измельчают, проводят гемолиз каждой ткани раздельно, окисляют раствором диоксида хлора каждую ткань, отмывают дистиллированной водой до рН 2,6 3,0, затем измельчают пуповину, амнион и хорион гладкий и дополнительно каждую ткань дважды измельчают и стерилизуют в диспергаторе, фильтруют через сито и собирают фильтраты, содержащие целевой продукт.