ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ ПЛАЗМИНОГЕНАКТИВАТОРЫ Российский патент 2000 года по МПК A61K38/49 A61K47/12 A61K47/26 A61P7/02 

Изобретение относится к фармацевтическим препаратам, содержащим в качестве активных веществ плазминогенактиваторы или их производные, а также к соответствующим фармацевтическим формам применения в виде лиофилизатов или инъекционных или, соответственно, к инфузионным растворам.

Человеческий тканевый плазминогенактиватор (t-PA) имеет большое терапевтическое значение при растворении сгустков крови, например при инфарктах сердца. t-PA вызывает растворение сгустков крови путем активации плазминогена в плазмин. Плазмин в свою очередь растворяет фибрин, главный компонент протеиновой матрицы свернувшейся крови.

Природный t-PA состоит из нескольких функциональных доменов F, E, К1, К2 и P. Домен P содержит протеолитически активный центр, который обеспечивает расщепление плизминогена в плазмин. Гентехнологичное получение плазминогенактиватора (PA), в частности t-PA или t-PA-мутеина в эукариотных и прокариотных клетках, уже известно. При этом t-PA-производные из прокариотов в противоположность природному t-PA синтезируют в негликолизированном виде.

В качестве плазминогенактиваторов принципиально годятся в смысле изобретения такие, в частности рекомбинантно полученные производные t-PA, которые по существу включают те самые области природных протеинов, которые отвечают за фибринолиз тромбов. При этом могут применяться также и такие производные t-PA, которые имеют делеции или заместители отдельных или нескольких аминокислот в последовательности t-PA.

Согласно изобретению могут быть применены, например, следующие плазминогенактиваторы: t-PA (например, альтеплаза), LY210825 (К2Р, получаемый из клеточных линий сирийского хомячка ("Syrian hamster"). Girc. 1990, 82,930-940); ΔFE3x и ΔFEK1х (K1K2Р, Blood 1988, 71, 216-219); ΔFEK1 (K2P из C127 мышиных клеток, J. Cardiovasc. Pharmacol. 1990, 16, 197-209); E-6010 (Jap. Circ. J. 1989, 53, p. 918); t-PA-варианты (Thromb. Haemost., 1989, 62, p. 542); K2P и D-K2Р (Thromb. Haemost., 1989, 62, p. 393); МВ-1018 (FK2K2P, Thromb. Haemost., 1989, 62, p. 543); FK2P (FASEB J., 1989, 3, A1031, реферат 4791); Δ1х (Circulation, 1988, 4, 11-15); KIK2P (Thromb. Res., 1988, 50, 33-41); FK1K2P (J. Biol. Chem., 1988, 263, 1599-1602); TNK-вариант t-PA (WO 93/24635); bat-PA (Witt et al., Blood 1992; 79: 1213-1217 и Mullot et al., Arterioscler. Thrombos. 1992; 12: 212-221). В частности речь идет о таких плазминогенактиваторах, которые содержат Крингель-2-домен ("К2") t-PA и/или серин-протеаза-домен ("P"). Например, в этом отношении следует назвать t-PA-мутеин "r-PA" типа K2Р, который описан в EP 0382174 (WO 90/09437).

Настоящее изобретение относится, в частности, к плазминогенактиватору типа K2P, K1K2P, FK1K2P и FK2K2P, как они описаны в следующих литературных источниках: Protein Engineering 5(1), 93-100 (1992); DE-OS-3923339.1; Circ. 1990, 82, 930-940; J. Cardiovasc. Pharmacol. 1990, 16, 197-203; Blood 1988, 71, 216-219; J. Biol. Chem. 1988, 263, 1599-1602; Thromb. Haemost. 1989, 62, S. 543. Особенно применяют рекомбинантные плазминогенактиваторы типа K2P, описанные в EP-A-0382174 и в Protein Engineering Vol. 5(1), S. 93-100 (1992). Другие t-PA-мутеины этого вида описаны в следующих патентных заявках: США 4970159; EP-A-0196920; EP-A-0207589; AU 61804; EP-A-0231624; EP-A-0289508; JP63 133988; EP-A-0234051; EP-A-0263172; EP-A-0241208; EP-A-0292009; EP-A-0297066; EP-A-0302456; EP-A-0379890.

Из уровня техники известно, что содержание сахара имеет значительное влияние на растворимость и агрегацию протеинов (J. Biol. Chem. 263 (1988), 8832-8837). Так, в Европейском патенте EP-B-458-950 было установлено, что, например, негликолизированный рекомбинантный плазминогенактиватор с составом доменов K2P обладает значительно худшей растворимостью, чем гликолизированные t-PA-производные. Негликолизированные плазминогенактиваторы, как например r-PA, как правило, растворяются лишь незначительно в обычно применяемых для солюбилизации протеинов буферах, как например 50 ммоль/л цитрата натрия pH 6; 50 ммоль/л фосфатного буфера или физиологического раствора NaCl. Для применения в качестве терапевтического средства требуется, однако, чтобы плазминогенактиваторы присутствовали в достаточно высоких концентрациях, предпочтительно в концентрациях до 10 мг/мл.

Из Европейского патента EP-A-0217379 известно, что растворимость t-PA из прокарионтов может быть повышена с помощью нейтральных или слабощелочных аргининовых составов. Недостаток этого способа состоит, однако, в том, что хорошие растворимости t-PA из прокарионтов могут быть достигнуты лишь при очень высоких концентрациях аргинина.

Другие галеновые составы плазминогенактиваторов или их производных известны из WO 90/01333, WO 89/050347, WO 90/08557, EP 0297294, EP 0156169 и EP 0228862.

Так, в патенте WO 90/01333 (Invitron) описывается комбинация лизина, гистидина, аргинина с цитратом для t-PA и производных из бактерий. Цитрат применяют в количестве 5 ммоль/л, лизин, гистидин, аргинин в количестве 150 ммоль/л при pH 6. Кроме того добавляют альбумин.

В WO 89/050347 (Invitron) описывается комбинация аргинина (20-200 ммоль/л) и цитрата (20-80 ммоль/л) при pH 5-8.

WO 90/08557 (Genetics Institute) раскрывает комбинацию креатинина с добавками различных веществ, как-то гистидин, аргинин, пролин, бетаин, коллин, имидазол, триптофан, цитрат, возможно при добавке глутаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты и янтарной кислоты.

В Европейском патенте EP 0297294 (Behring) раскрывается комбинация по меньшей мере двух аминокислот как-то: лизин, орнитин, аргинин, транэкзамовая кислота и другие добавки при pH 5-10.

Европейский патент EP 0156169 (Asahi) описывает орнитан и/или лизин, возможно с добавкой цитрата, глицина или фосфата, а EP 0228862 (Genentech) раскрывает состав, содержащий аргинин с хлоридом или без, а также с детергентом или без.

Альтернативные составы с r-PA в присутствии лизина или, соответственно, лизиновых аналогов в растворах, буферированных лимонной кислотой, описываются также в EP 0458950 (Boehringer Mannheim). Более поздние исследования показывают, однако, что растворимость r-PA и в этих составах еще не полностью удовлетворена. Было установлено, что хотя растворимость и может быть улучшена повышением концентрации цитрата, однако такого рода составы не совместимы с венами или совместимы лишь условно. Наряду с этим, высокие концентрации соли и связанная с этим низкая температура стеклования (Tg') приводят к тому, что лиофилизацию этих составов приходится проводить при температурах ниже минус 45^oC и минус 50^oC. Эти температуры могут быть реализованы технически часто лишь с большими затратами и требуют дорогостоящих элементов управления и контроля для замера и регулирования оптимальных условий для лиофилизации. Кроме того, с этим связана и относительно высокая затрата энергии. К этому добавляется то, что часто для крупнопромышленного производства используют старые лиофилизационные установки, не располагающие необходимой сложной измерительной и регулирующей техникой, и эти установки, следовательно, могут гарантировать, как правило, лишь рабочую температуру около минус 45^oC.

Задачей изобретения является приготовление состава плазминогенактиваторов и их производных, который является хорошо переносимым для вен, содержит активное вещество в достаточно высоких концентрациях и обеспечивает хорошую растворимость активного вещества, причем стабильность PA в лиофилизате в течение продолжительного периода времени должна сохраняться. Кроме того, целью изобретения является разработка составов, которые надежно могут быть лиофилизированы и в масштабе промышленного производства, чем должно обеспечиваться хорошо воспроизводимое качество лиофилизата как продукта.

Эта задача согласно изобретению решается фармацевтическим препаратом, содержащим плазминогенактиватор, причем препарат содержит в качестве фармацевтических добавок по меньшей мере один сахар и транэкзамовую кислоту. Препарат в лиофилизированном виде способен сохраняться в течение продолжительного периода времени. Водный инъекционный раствор, полученный путем реконституции, также удовлетворяет этому критерию повышенной стойкости при хранении. Это особенно имеет место в том случае, когда pH раствора устанавливают на значение от 5,5 до 6,5. В качестве других добавок фармацевтический препарат может содержать обычные буферирующие вещества или поверхностно-активные вещества (анионные, катионные или нейтральные ПАВ).

В качестве примера для плазминогенактиваторов (PA), пригодных в смысле настоящего изобретения, применяли подробно описанный в Европейской патентной заявке EP-A-0382174 плазминогенактиватор K2P (BM 06.022). Он состоит из Крингель (K2) и протеазного домена (P) человеческого t-PA и вследствие своей экспрессии представлен в клетках: Escherichia coli в негликолизированной форме.

В качестве сахара составы согласно изобретению содержат предпочтительно моно- или дисахариды. Из дисахаридов особенно пригодны сахароза, трегалоза, мальтоза или лактоза. Моносахариды - это, в частности, галактоза или соответствующие аминосахара, как, например, галактозоамин. Предпочтительно применяют не восстановленные сахара сахароза или трегалоза. Концентрация сахара в водном инъекционном растворе составляет, как правило, 40-100 мг/мл, предпочтительно от 50 до 70 мг/мл.

В качестве буферных веществ фармацевтические препараты могут содержать обычно применяемые для этих целей вещества, представляющие собой соли сильных кислот со слабыми основаниями или слабых кислот с сильными основаниями. Можно назвать в качестве примера: щелочные соли фосфорной кислоты, винной кислоты, яблочной кислоты и тому подобное. Также речь идет об аминокислотах. Заявляемые препараты предпочтительно содержат фосфатный буфер. Концентрация фосфатного буфера в готовом инъекционном растворе составляет, в частности, 50-300 ммоль/л, предпочтительно 80-220 ммоль/л и особенно предпочтительно 130-170 ммоль/л. В качестве фосфатного буфера применяют, как правило, кислый динатрий- или дикалийфосфат, который фосфорной кислотой доводят до соответствующего значения pH.

В качестве агентов растворения препараты согласно изобретению содержат транэкзамовую кислоту (TES). Концентрация транэкзамовой кислоты в готовом для инъекции водном растворе составляет предпочтительно 1-50 ммоль/л, предпочтительно 8-12 ммоль/л. Особенно выгодно применять концентрацию 10 ммоль/л. Неожиданно было найдено, что транэкзамовая кислота повышает растворимость плазминогенактиваторов, в частности негликолизированных плазминогенактиваторов, в водной среде. Например, в случае производного плазминогенактиватора r-PA растворимость повышалась по меньшей мере в 1,5 раза в сравнении с раствором, не содержавшим транэкзамовой кислоты. Предпочтительно фактор повышения растворимости лежит в области 2-3. Этот эффект особенно благоприятен в рамках получения лиофилизированных фармацевтических композиций плазминогенактиваторов, так как благодаря возможности повышения концентрации плазминогенактиватора в применяемых растворах может быть существенно уменьшено количество воды, необходимое для процесса получения, и в целом достигнута экономия энергии и снижение издержек производства. В частности, благодаря этому сокращается время лиофилизации в процессе производства.

В качестве поверхностно-активных веществ могут применяться неионогенные, анионные или катионные ПАВ, предпочтительно, однако, неионогенные, как например Tween 80 или Tween 20. Концентрация поверхностно-активных веществ составляет 0,005-0,1% (вес./об.), предпочтительно 0,01%.

Подходящим для заявляемого фармацевтического препарата является pH между 5,5 и 6,5, предпочтительно pH от 5,8 до 6,2.

Заявляемые препараты содержат активное вещество в концентрации до 10 мг/мл, предпочтительно от 3 до 5 мг/мл.

Фармацевтические препараты согласно изобретению применяются в виде инъекционных или, соответственно, инфузионных растворов. Это достигается тем, что получают готовый для впрыскивания раствор, содержащий состав согласно изобретению. Однако также возможно готовить фармацевтические препараты в виде лиофилизатов. Тогда эти препараты реконституируются известными, пригодными для инъекционных целей средствами или растворами (например, водой). В качестве инъекционной среды для препаратов согласно изобретению применяется главным образом вода, которая при необходимости может содержать обычные изотонические добавки, как например, некоторую физиологическую концентрацию NaCl.

Предметом изобретения являются также способ получения фармацевтического препарата, содержащего плазминогенактиваторы или их производные с pH от 5,5 до 6,5, а также их применение для получения фармацевтических препаратов согласно изобретению.

Кроме того, предметом изобретения является применение определенной смеси фармацевтических вспомогательных веществ, состоящей из группы сахар и транэкзамовая кислота, для продолжительной стабилизации плазмогенактиваторов. Особенно благоприятна для достижения длительной стабильности при хранении комбинация вспомогательных веществ сахар, фосфатный буфер, транэкзамовая кислота и поверхностно-активное вещество.

Исследования стабильности показывают, что препараты согласно изобретению стабильны в виде растворов при 4^oC по меньшей мере - 30 дней. Стабильность активного вещества в лиофилизатах согласно изобретению составляет при 4^oC от двух до пяти лет. Особенно благоприятен, в частности, тот факт, что лекарственные препараты имеют даже при повышенной термической нагрузке прекрасную стабильность, которая делает их в значительной мере не чувствительными к колебаниям температуры, которые могут иметь место, в частности в регионах Земли с жарким климатом, в частности при нарушении непрерывного процесса охлаждения. В силу часто длинных путей доставки в случае фармацевтических лекарственных форм от изготовителя лекарства до конечного потребителя в различных странах, нельзя исключать того, что препараты ненамеренно и, возможно также, в течение продолжительного времени, подвергаются температурным колебаниям, приводящим к потере активности протеина, и тем самым в крайнем случае ставящим под вопрос терапевтический успех от их применения. Лекарственные формы согласно изобретению, однако, в значительной мере не чувствительны к таким температурным колебаниям. В предварительных исследованиях стабильности удалось показать, что в препаратах, также при температурах 35^oC, которым они подвергались в течение периода времени в 30 дней, не было установлено никакого сколько-нибудь значительного ухудшения стабильности протеина. Следовательно, можно исходить из того, что препараты при надлежащем хранении при температуре холодильного шкафа будут иметь стабильность от двух до пяти лет.

Заявляемые препараты имеют, кроме того, то преимущество, что температура стеклования (Tg') замороженного раствора для получения лиофилизатов относительно высока и лежит между -33^oC и -40^oC, так что воспроизводимость качества продукта лиофилизатов гарантируется также в промышленном масштабе с достаточной надежностью. Относительно высокая температура стеклования, в частности, потому благоприятна, что при технически обусловленных или непредвиденных повышениях температуры в течение часто очень продолжительного времени лиофилизации риск ненамеренного оттаивания замороженных растворов менее вероятен. В случаях, когда температура стеклования лежит ниже -40^oC и во время лиофилизационного процесса эта температура превышается, что в частности имеет место на лиофилизационных установках, работающих при температуре вблизи -45^oC, нежелательное превышение температуры стеклования может привести к неблагоприятным изменениям замороженного раствора. Достаточно хорошее качество продукта тогда уже не гарантируется. При этом, в частности, у протеинсодержащих лиофилизатов может произойти потеря активности или образование агрегатов. Другое преимущество препаратов согласно изобретению с температурой стеклования от -33^oC до -40^oC состоит в том, что сводятся к минимуму необходимые затраты энергии на процесс лиофилизации, так как процесс лиофилизации не обязательно должен проводиться при температурах ниже -50^oC.

В смысле настоящего изобретения относительно высокие температуры стеклования для замороженных растворов достигаются, в частности, тогда, когда в качестве фосфатного буфера для лиофилизации требуемых растворов применяется калиевая соль, например двузамещенный или однозамещенный фосфат калия. В частности, в этом отношении годится двузамещенный фосфат калия в концентрации 20-40 мг/мл, предпочтительно 20-30 мг/мл. Повышение температуры стеклования может быть усилено добавкой сахарозы. Сахарозу добавляют для этой цели преимущественно в концентрации 60-90 мг/мл, в частности 60-80 мг/мл. Особенно предпочтительно применяют раствор, содержащий около 26 мг/мл двузамещенного фосфата калия (K₂HPO₄•12H₂O) около 70 мг/мл сахарозы. Значение pH раствора устанавливают предпочтительно с помощью 85%-ной фосфатной кислоты (прибл. 12 мг/мл) на значение 6. Далее раствор содержит около 0,5-5 мг/мл, предпочтительно 1-2 мг/мл транэкзамовой кислоты, в частности около 1,6 мг/мл. Кроме того, могут содержаться также поверхностно-активные вещества, как например Tween 80, который применяют предпочтительно в концентрации 0,01-0,3 мг/мл, и в частности около 0,1 мг/мл.

Еще одно преимущество лиофилизатов согласно изобретению состоит в том, что они имеют относительно небольшую остаточную влажность после окончания лиофилизации. Остаточная влажность составляет, в частности, менее 5%, преимущественно от 0,5 до 4%, в частности 1-3%. Обычно эти значения для лиофилизатов составляют величину выше 6%. Низкая остаточная влажность способствует тому, что препараты обладают лучшей стойкостью при хранении. Препараты с более высокой остаточной влажностью часто приводят к нестабильности протеина, которая становится заметной благодаря потере биологической активности или образованию агрегатов.

Еще одно преимущество препаратов согласно изобретению состоит в том, что при получении лиофилизатов на основе повышения растворимости неглюкозилированных плазминогенактиваторов, достигаемого добавкой транэкзамовой кислоты, в частности в случае мутеинов типа K2P, K1K2P или P, можно исходить из меньших объемов (например прибл. 5 мл на единичную лекарственную форму) замораживаемых растворов, так что время лиофилизации заметно сокращается в сравнении с применяемыми до сих пор для получения лиофилизатов растворами (например, около 10 мл на лекарственную форму). Предпочтительно исходят из растворов, содержащих активное вещество в приблизительно вдвое более высокой концентрации в сравнении с готовыми для инъекции водными лекарственными формами, так что вместо обычных до сих пор объемов растворов в 10 мл могут применяться водные объемом 5 мл.

Исследования венной переносимости показывают очень хорошую совместимость препаратов согласно изобретению.

Изобретение поясняется нижеприводимыми примерами выполнения, которые не ограничивают изобретение.

Пример 1:
Помутнение после механической нагрузки/измерение светорассеяния препаратов согласно изобретению
r-PA (BM 06.022) доводили до концентрации протеина (C_прот) 6 мг/мл (ультрафильтрация через мембрану Amicon YM-10) и диализировали против указанного буфера. Затем пробы устанавливали на концентрацию C_прот = 4 мг/мл и a) оставляли без изменения, b) добавляли 0,01% Tween 80 и c) добавляли 0,0-1% Tween 20.

Загрузка проб производилась соответственно в течение 10 с на Whirl Mix (Janke & Kunkel IKA-Лабортехник, максимальное число оборотов). Затем пробы инкубировали в течение 2 минут при комнатной температуре.

Светорассеяние незагруженной и загруженной пробы измеряли флуорометрически (Экс. 360 нм, Эм.: 360 нм; полоса пропускания Экс.: 3 нм; полоса пропускания Эм.: 10 нм; интервал измерения: 10 сек в течение 3 минут).

Пример 2:
Хранение составов согласно изобретению, содержащих r-PA (BM 06.022) в TES/caxapoзе,// многократное замораживание и оттаивание
r-PA диализовали против указанного в табл. 1 буфера (без Twen 30), устанавливали на концентрацию C_прот= 4 мг/мл, добавляли Tween 80 до С = 0,01%, порционировали и стерилизовали. Замораживали, смотря по обстоятельствам, 9 проб при температурах -20^oC или -70^oC. В указанные в таблице дни все пробы, кроме контрольных, оттаивали (15 минут при 25^oC на водяной бане). Каждый раз брали по одной пробе для анализа (C_прот и амидолитическая активность). Оставшиеся пробы снова глубоко замораживали при -20 или -70^oC. По окончании серии определяли активность контрольной группы, не подвергнутой стрессу.

Результат: Как следует из данных таблицы 1, r-PA может без потери активности замораживаться или оттаивать по меньшей мере восемь раз.

Пример 3:
Стабильность r-PA в растворе
Сравнение различных составов при C_прот = 4 мг/мл
r-PA (BM 06.022) концентрировали через мембрану 10 до 5 мг/мл и диализовали против указанного в таблице 2 буфера (без Tween 80). Диализаты устанавливали на C_прот = 4 мг/мл, добавляли Tween 80 до 0,01%, порцианировали и хранили при -20^oC и при 4^oC. Через 7, 14, 20 и 30 дней определяли амидолитическую активность и концентрацию протеина загруженных проб.

Результат: Пробы, хранившиеся при -20^oC и 4^oC остаются неизменными через 30 дней (см. табл. 2).

Пример 4:
Стабильность r-PA в растворе
Сравнение различных составов при С_прот = 6 мг/мл
r-PA (BM 06.022) диализировали в течение ночи против нижеприведенного буфера и путем концентрирования через мембрану Amicon YM-10 устанавливали на C_прот = 6 мг/мл. Пробы разделяли на 1 мл-порции и хранили в течение 30 дней при -20^oC и 4^oC. Через 1, 2, 5, 9, 15 и 29 дней соответственно определяли активность и содержание протеина(см. табл. 3).

Результат: Из данных табл. 4 следует, что активное вещество BM 06.022 в названных составах стабильно при -20^oC и 4^oC по меньшей мере 29 дней.

Пример 5:
Растворимость r-PA в составах согласно изобретению
r-PA (BM 06.022) концентрировали через YM 10 до 6 мг/мл и диализовали против ниженазванного буфера. Диализаты затем снова концентрировали через мембрану Amicon YM 10 до тех пор, пока не появится помутнение. После центрифугирования проб надосадочную жидкость хранили пять дней при 4^oC. В начале и в конце хранения определялись амидолитическая активность и C_прот.

Результат: Растворимость r-PA составляет около 10 мг/мл. При максимальной концентрации протеина пробы при 4^oC могут сохраняться без изменения амидолитической активности по меньшей мере 5 дней (см. табл. 5).

Пример 6
Приготовление жидких лекарственных форм
Следующие формы применения были получены как растворы перед лиофилизацией:
Состав растворов перед лиофилизацией:
Раствор A:
BM 06.022 - 4 мг/мл
Na₂HPO₄•12H₂O - 53,72 мг/мл
H₃PO₄ 85% - 11,3 мг/мл
Транэкзамовая кислота - 1,6 мг/мл
Сахароза - 50 мг/мл
Tween 80, pH 6 - 0,1 мг/мл
Раствор B:
BM 06.022 - 4 мг/мл
K₂HPO₄•12H₂O - 26,2 мг/мл
H₃PO₄ 85% - 11,6 мг/мл
Транэкзамовая кислота - 1,6 мг/мл
Сахароза - 70 мг/мл
Tween 80, pH 6 - 0,1 мг/мл
Получение лиофилизатов:
После стерильной фильтрации аликвоты по 5 мл отбирали в соответствующие склянки емкостью по 20 мл каждая. Лиофилизацию проводили следующим образом: заполненные склянки ставили в сублимационную сушилку и замораживали при температурах от -40^oC до -50^oC (температура пластин) в течение 10 часов при атмосферном давлении. Затем в камере создавали вакуум величиной от p = 0,01 до 0,1 мбар. Температуру пластин затем устанавливали так, что температура продукта в любое время была ниже соответствующей температуры стеклования. После того как все количество льда отсублимировано, температуру пластин повышали до значения 20-40^oC и затем проводили дополнительную сушку в вакууме. Остаточную влагу определяли обычными методами (определение по методу Карла Фишера), и она составляла у раствора A 6%, a у раствора B - 3%. Хранение лиофилизатов для исследований стабильности происходит при температуре 4^oC (температура холодильного шкафа), 20^oC (комнатная температура) и 35^oC. Как следует из аналитических исследований относительно амидолитической активности и концентрации протеина, стабильность лиофилизатов по истечении времени хранения от четырех до двенадцати недель выполнена.

Реконституция лиофилизатов для применения:
Лиофилизаты заполняли водой для инъекционных целей до 10 мл. Это соответствует разбавлению в два раза по отношению к первоначальному объему раствора перед лиофилизацией.

Пример 7:
Испытание венной переносимости составов согласно изобретению
Готовят два действительных и два холостых контрольных растворов, указанных в таблице 6 составов, и вводят кроликам внутривенно. Применяемое количество составляет 0,5 мл/животное, для каждого из четырех испытуемых растворов применяют пять животных.

Результат: Реакция животных на инъекцию и данные гистологического анализа показывают, что все примененные испытуемые растворы хорошо переносимы.

Изобретение относится к медицине. Предложен новый фармацевтический препарат, содержащий плазминогенактиваторы, фосфатный буфер, сахар, транэкзамовую кислоту и поверхностно-активное вещество. Предложенный состав является хорошо переносимым для вен, содержит активное вещество в достаточно высоких концентрациях, обеспечивает хорошую растворимость и стабильность плазминогенактиваторов. 6 табл.

Фармацевтический препарат на основе плазминогенактиватора и обычных добавок, отличающийся тем, что он содержит
Плазминогенактиватор - 3 - 10 мг/мл
Сахар - 40 - 100 мг/л
Фосфатный буфер - 50 - 300 ммоль/л
Транэкзамовая кислота - 1 - 50 ммоль/л
Тензид (поверхностно-активное вещество) - 0,1%
при значении pH от 5,5 до 6,5.