ЛИПИДНЫЕ СЛОЖНЫЕ ЭФИРЫ НУКЛЕОЗИДМОНОФОСФАТОВ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2001 года по МПК C07H19/10 C07H19/20 A61K31/7072 A61K31/7076 A61P35/00 

Настоящее изобретение относится к новым нуклеозидмонофосфатным производным с остатками липидных сложных эфиров общей формулы (I)

в которой
R¹ может представлять собой линейную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную алкильную цепь, содержащую 1-20 атомов углерода, необязательно моно- или полизамещенную галогеном, (C₁-C₆)-алкоксигруппой, (C₁-C₆)- алкилмекаптогруппой, (C₁-C₆)-алкоксикарбонилом, (C₁-C₆)- алкилсульфинильной или (C₁-C₆)-алкилсульфонильной группами;
R² может представлять собой водород, линейную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную алкильную цепь, содержащую 1-20 атомов углерода, необязательно моно- или полизамещенную галогеном, (C₁-C₆)-алкоксигруппой, (C₁-C₆)-алкилмеркаптогруппой, (C₁-C₆)-алкоксикарбонилом или (C₁-C₆)-алкилсульфонильной группой;
R³ представляет собой водород, гидроксильную группу, азидогруппу, аминогруппу, цианогруппу или галоген;
R⁴ представляет собой гидроксильную группу, азидогруппу, аминогруппу, цианогруппу или галоген;
R⁵ представляет собой водород, гидроксильную группу, азидогруппу, аминогруппу, цианогруппу или галоген;
X представляет собой валентную связь, атом кислорода, атом серы, сульфинильную или сульфонильную группу;
Y представляет собой валентную связь, атом кислорода или атом серы;
B представляет собой пуриновое и/или пиримидиновое основание формулы III (а-г)




в которых
R⁶ может представлять собой водород; алкильную цепь, содержащую 1-6 атомов углерода, которая может быть замещена галогеном; алкенильную и/или алкинильную группу, содержащую 2-6 атомов углерода, необязательно замещенную галогеном; или галоген;
R^6′ может представлять собой атом водорода, или бензил, или фенилтиогруппу;
R⁷ может представлять собой водород; алкильную цепь, содержащую 1-6 атомов углерода, которая может быть замещена галогеном; или галоген;
R⁸ может представлять собой водород; алкильную цепь, содержащую 1-6 атомов углерода, галоген или гидроксильную или аминогруппу;
R⁹ может представлять собой водород, аминогруппу или атом галогена; и
R¹⁰ может представлять собой водород, галоген, меркаптогруппу, гидроксильную группу, (C₁-C₆)- алкоксигруппу, (C₁-C₆)-алкилмеркаптогруппу или аминогруппу, которая может быть моно- или дизамещена (C₁-C₆)-алкилом, (C₁-C₆)-алкоксигруппой, гидрокси-(C₂-C₆)-алкилом и/или (C₃-C₆)- циклоалкилом, арилом, гетероарилом, аралкилом или гетероарилалкильной группой, необязательно замещенными в арильном или гетероарильном остатке одной или несколькими меркаптогруппами, гидроксильными группами, (C₁-C₆)-алкоксигруппами или (C₁-C₆)-алкильными группами или галогенами; или (C₂-C₆)-алкенил, необязательно замещенный моно- или диалкильной группой или алкоксигруппой;
при условии, что по крайней мере один из остатков R³ или R⁵ представляет собой водород;
к их таутомерам и их физиологически приемлемым солям неорганических и органических кислот и/или оснований, а также к способам их получения и к лекарственным средствам, содержащим упомянутые соединения.

Так как соединения общей формулы I содержат асимметричные атомы углерода, настоящее изобретение также относится ко всем оптически активным формам и рацемическим смесям упомянутых соединений.

В J. Biol Chem. 265, 6112 (1990), и в европейском патенте ЕР 0350287 описывается получение и применение липонуклеотидов в качестве противовирусных лекарственных средств. Однако в этих работах проверены и синтезированы только соединения, в которых димиристоилфосфатидильный и дипальмитоилфосфатидильный остатки сочетаются с семействами нуклеозидов, такими как AZT (азидотимидин) и ddC (2', 3'- дидезоксицитидин), включающие в свою структуру остатки сложных эфиров жирных кислот.

B J. Med. Chem. 33, 1380 (1990), описываются нуклеозидные конъюгаты липидов - простых тиоэфиров - с цитидиндифосфатом, которые обладают противоопухолевой активностью и могут найти применение в онкологии. В Chem. Pharm. Bull. 36, 209, (1988), описываются 5'-(3-sn-фосфатидил)нуклеозиды, обладающие противолейкозной активностью, а также их ферментативный синтез из соответствующих нуклеозидов и фосфохолинов в присутствии фосфолипазы D с активностью трансферазы. Подобным образом, в J. Med. Chem 34, 1408 (1991), описываются нуклеотидные конъюгаты, обладающие активностью против БИЧ 1, которые замещены метокси- или этоксигруппами в Sn-положении липидной части. В заявке на патент ВОИС 92/03462 описываются конъюгаты тиоэфирных липидов, обладающие противовирусной активностью, в частности для лечения ВИЧ-инфекций.

Соединения настоящего изобретения обладают ценными фармакологическими свойствами. В частности, они пригодны для лечения и профилактики злокачественных опухолей, таких как неоплазмы, карциномы, саркомы, или лейкозов. Кроме того, соединения обнаруживают иммунодепрессивную активность и, следовательно, могут применяться при лечении органоспецифических или системных аутоиммунных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, системная красная волчанка, хроническая гомологичная болезнь, рассеянный склероз, и т.п., или для предупреждения отторжения аллотрансплантата или полуаллотрансплантата, например, почек, печени, легких, сердца, и т.п. Кроме того, соединения обладают противовирусной, противоретровирусной или противоопухолевой активностью и, таким образом, являются также подходящими средствами при профилактике и лечении заболеваний, индуцированных/вызванных вирусами и онкогенно (таких как СПИД и т.п.). По сравнению с соединениями, используемыми до настоящего времени при лечении злокачественных опухолей, соединения по настоящему изобретению обладают повышенной эффективностью или меньшей токсичностью и, таким образом, имеют более широкий терапевтический спектр действия. По этой причине, они имеют то преимущество, что введение лекарственных средств, содержащих эти соединения, может продолжаться непрерывно в течение продолжительного периода времени, и можно избежать синдрома отмены препарата или дробного введения, которое в настоящее время часто используется с цитостатическими средствами при лечении опухолей, или бывает необходимым вследствие их нежелательных побочных действий.

Соединения по настоящему изобретению свободны от таких недостатков. Их действие в фармакологически необходимых дозах является иммуносупрессивным или противовирусным, не будучи неспецифическим цитотоксичным.

Подобным образом, соединения настоящего изобретения и содержащие их фармацевтические составы могут использоваться в сочетании с другими лечебными средствами для лечения и профилактики упомянутых выше заболеваний. Примерами таких других лекарственных средств являются такие средства, как, например, ингибиторы митоза, такие как колхицин, митоподозид, винбластин, алкилирующие цитостатические средства, такие как циклофосфамид, мелфалан, милеран или цисплатин, антиметаболиты, такие как антагонисты фолиевой кислоты (метотрексат) и антагонисты пуриновых и пиримидиновых оснований (меркаптопурин, 5-фторуридин, цитарабин), цитостатически активные антибиотики, такие как антрациклины (например, доксорубицин, даунорубицин), гормоны, такие как фосфэстрол, тамоксифен, другие цитостатически/цитотоксически активные химиотерапевтические средства и другие иммунодепрессивные лекарственные средства (такие как циклоспорины, FK 506, рапамицины, дезоксиспергуалин и т. п.).

Возможные соли соединений общей формулы I представляют собой, прежде всего, соли щелочных и щелочноземельных металлов и аммония фосфатной группы. Предпочтительными солями щелочных металлов являются литиевые, натриевые и калиевые соли. Возможными солями щелочноземельных металлов являются магниевые и кальциевые соли в особенности. В соответствии с изобретением под аммониевыми солями подразумеваются соли, содержащие аммониевый ион, который может замещаться до четвертой степени алкильными остатками, имеющими 1-4 атома углерода, и/или аралкильными остатками, предпочтительно бензильными остатками. Заместители могут быть одинаковыми или различными.

Соединения общей формулы I могут содержать группы основного характера, в частности аминогруппы, которые могут быть превращены в соли присоединения кислот с помощью соответствующих неорганических или органических кислот. В таком случае, подходящими кислотами являются, в частности, хлористоводородная кислота, фумаровая кислота, янтарная кислота, винная кислота, лимонная кислота, молочная кислота, малеиновая кислота или метансульфоновая кислота.

В общей формуле I R¹ предпочтительно представляет собой линейную (C₈-C₁₅)-алкильную группу, которая также может быть замещена (C₁-C₆)-алкоксигруппой или (C₁-C₆)-алкилмеркаптогруппой. Точнее, R¹ представляет собой нонильную, децильную, ундецильную, додецильную, тридецильную или тетрадецильную группу. Метоксигруппа, этоксигруппа, бутоксигруппа и гексилоксигруппа являются предпочтительно возможными (C₁-C₆)-алкоксизаместителями R¹. В случае, когда R¹ замещен (C₁-C₆)-алкилмеркаптогруппой, подразумевается, что эта группа представляет собой, в частности, метилмеркаптогруппу, этилмеркаптогруппу, пропилмеркаптогруппу, бутилмеркаптогруппу и гексилмеркаптогруппу.

R² предпочтительно представляет собой линейную (C₈-C₁₅)-алкильную группу, которая также может быть замещена (C₁-C₆)-алкоксигруппой или (C₁-C₆)-алкилмеркаптогруппой. Конкретнее, R² представляет собой октильную, нонильную, децильную, ундецильную, додецильную, тридецильную или тетрадецильную группу. Метоксигруппа, этоксигруппа, пропоксигруппа, бутоксигруппа и гексилоксигруппа являются предпочтительными (C₁-C₆)-алкоксизаместителями R². В случае, когда R² замещен (C₁-C₆)-алкилмеркаптогруппой, подразумевается, что эта группа представляет собой, в частности, метилмеркаптогруппу, этилмеркаптогруппу, бутилмеркаптогруппу и гексилмеркаптогруппу.

Предпочтительно X представляет собой атом серы, сульфинильную или сульфонильную группу и Y представляет собой кислород.

Подобным образом, предпочтительными являются соединения, в которых X и Y представляют собой валентные связи, R² представляет собой водород и R¹ представляет собой (C₁-C₂₀-алкильную цепь, необязательно замещенную (C₁-C₆-алкоксигруппой или (C₁-C₆) -алкилмеркаптогруппой.

Предпочтительно R⁵ представляет собой водород, азидогруппу, цианогруппу или галоген, такой как фтор, хлор или бром.

Предпочтительно, каждый из R³ и R⁴ представляет собой гидроксильную группу, или цианогруппу, или азидогруппу, или атом галогена, такого как фтор, хлор, бром или азидогруппу, или атом галогена, такого как фтор, хлор, бром или иод, при этом группы могут быть одинаковыми или разными.

Особенно предпочтительными являются соединения, в которых R⁵ представляет собой атом водорода и R³ и R⁴ являются гидроксильными группами, цианогруппами, азидогруппами или атомами фтора.

На основаниях общей формулы (III) группы R⁶ и R⁷ предпочтительно представляют собой атомы водорода, метильные, трифторметильные, этильные, пропильные или бутильные группы, или атомы галогена, такие как атомы фтора, хлора, брома или иода, а также алкенильные группы, которые могут быть замещены галогеном.

Особенно предпочтительными значениями R⁶ и R⁷ являются атомы водорода, метильные, трифторметильные или этильные группы и атомы фтора, хлора или брома и/или винильные, пропенильные, этинильные или пропинильные группы, необязательно замещенные галогеном.

Группа R⁸ предпочтительно представляет собой атом водорода, метильную, этильную, пропильную или бутильную группу, аминогруппу или атом галогена, такого как фтор, хлор, бром или иод, предпочтительно атом хлора или брома.

R¹⁰ предпочтительно представляет собой атом водорода, фтора или брома, (C₁-C₆-алкоксигруппу, конкретнее метоксигруппу, этоксигруппу, пропоксигруппу, бутоксигруппу или гексилоксигруппу, меркаптогруппу, (C₁-C₆)-алкилмеркаптогруппу, точнее метилмеркаптогруппу, этилмеркаптогруппу, бутилмеркаптогруппу или гексилмеркаптогруппу, или аминогруппу, которая может быть моно- или дизамещенной (C₁-C₆)-алкильной группой, такой как метильная, этильная, бутильная или гексильная группа, гидрокси-(C₂-C₆)-алкильной группой, такой как гидроксиэтильная, гидроксипропильная, гидроксибутильная или гидроксигексильная группа, (C₃-C₆)-циклоалкильной группой, такой как циклопропильная, циклопентильная или циклогексильная группа, арилом, предпочтительно фенилом, аралкильной группой, такой как, в частности, бензил, необязательно замещенный одной или несколькими гидроксильными или метоксильными группами, (C₁-C₆)-алкильными группами, такими как метильная, этильная, пропильная, бутильная или гексильная группы, или атомами галогена, такими как атомы фтора, хлора или брома. Подобным образом, аминогруппа может быть замещена гетероалкильной или гетероарильной группой, такой как, в частности, тиенильная, фурильная или пиридильная группа, например. Под гетероарильной группой подразумевается предпочтительно тиенилметильная, фурилметильная или пиридилметильная группа.

Нуклеозидами, подходящими в качестве компонентов сочетания для получения липиднуклеотидных конъюгатов формулы (I), являются
6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид,
5-фторуридин,
инозин,
5-метилуридин,
2',3'-дидезокси-2',3'-дифтортимидин,
5-хлоруридин,
5-трифторметилуридин,
5-этинилуридин,
5-этинилцитидин,
5-проп-1-енилуридин,
5-проп-2-енилуридин,
аденозин,
гуанозин,
2,6-диaминoпуpин-9-β-D-pибoфуpaнoзид,
2-aминo-6-мepкaптoпуpин-9-β-D-pибoфуpaнoзид,
2-амино-6-меркаптометилпурин-9-β-D-рибофуранозид,
2-амино-6-хлорпурин-9-β-D-рибофуранозид,
2'-дезокси-2'-аминоаденозин,
2'-дезокси-2'-азидоаденозин,
2'-дезокси-2'-азидоцитидин,
2'-дезокси-5-фторуридин,
2-хлораденозин,
2-бромаденозин,
3'-дезокси-3'-фтораденозин,
6-метилмеркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид,
2-фтораденозин,
2-фтор-2'-дезоксиаденозин.

Соединения общей формулы (I) могут быть получены
1) взаимодействием соединения общей формулы V

в которой R¹, R², X и Y имеют установленные выше значения, с соединением общей формулы VI

в которой R³, R⁴, R⁵ и B имеют установленные выше значения, или представляют собой гидроксильную группу, защищенную защитной для гидроксильной функциональности группой, привычной для специалиста,
в присутствии активного хлорангидрида, такого как хлорид 2,4,6-триизопропилбензолсульфоновой кислоты, и четвертичного азотистого основания, например пиридина или лутидина, в инертном растворителе, таком как толуол, или непосредственно в безводном пиридине, и, необязательно, с последующим гидролизом, удаляющим защитные группы, в соответствии со способами, принятыми в химии нуклеозидов, или
2) взаимодействием соединения общей формулы VII

в которой R¹, R², X и Y имеют установленные выше значения, с соединением общей формулы VI, в которой R³, R⁴, R⁵ и В имеют вышеустановленные значения, в присутствии фосфолипазы D из Streptomyces, в инертном растворителе, таком как флороформ, в присутствии подходящего буфера, и, необязательно, с последующей реакцией, удаляющей защитные группы, в соответствии с методами, принятыми в химии нуклеозидов.

Получение соединений общих формул V и VII осуществляют по аналогии с методами в Lipids 22, 947 (1987) и в J. Med. Chem. 34, 1377 (1991).

Получение соединений общей формулы VI описано, например, в ЕР-A-0286028 и в ВОИС 90/08147. Некоторые из перечисленных нуклеозидов являются коммерчески доступными соединениями.

Соединения, подобные соединениям формулы I, описываются в ЕР-A-0350287. В этом патенте описываются соответствующие сложные 1,2-диэфиры глицерина.

Лекарственные средства для лечения вирусных инфекций, содержащие соединения формулы I, могут применяться в жидкой или твердой формах интестинальным или парентеральным способом. Возможно использование обычных форм, таких как таблетки, капсулы, таблетки с покрытием, сиропы, растворы или суспензии. В качестве инъекционной среды применяют предпочтительно воду, содержащую такие добавки, как стабилизаторы, солюбилизаторы и буферы, которые обычны для растворов для инъекций. Такие добавки представляют собой, например, тартратные или цитратные буферные растворы, этанол, комплексообразующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота и ее нетоксичные соли, высокомолекулярные полимеры, такие как жидкие полиэтиленоксиды для регулирования вязкости. Жидкие носители для растворов для инъекций должны быть стерильными и предпочтительно разливаются в ампулы. Твердыми носителями являются, например, крахмал, лактоза, маннит, метилцеллюлоза, тальк, высокодисперсные кремниевые кислоты, высокомолекулярные жирные кислоты, такие как стеариновая кислота, желатин, агар-агар, фосфат кальция, стеарат магния, животные и растительные жиры, твердые высокомолекулярные полимеры, такие как полиэтиленгликоль, и т.п. Если желательно, составы, пригодные для перорального применения, могут включать корригенты и подслащиватели.

Дозировка может зависеть от различных факторов, таких как способ введения, вид, возраст или индивидуальное состояние. Обычно соединения по настоящему изобретению применяют в количестве 0,1-100 мг, предпочтительно 0,2-80 мг, в сутки и на кг массы тела. Предпочтительно разделять суточную дозу на 2-5 применений, причем при каждом применении принимают таблетки, имеющие содержание активного ингредиента 0,5-500 мг. Подобным образом, таблетки могут обладать продолжительным выделением лекарственного средства, что снижает число приемов до 1-3 раз в сутки. Содержание активного ингредиента в таблетках с длительным выделением может составлять 2-1000 мг. Активный ингредиент также может вводиться непрерывными инфузиями, при которых обычно достаточным является количество 5-1000 мг в сутки.

Помимо соединений, упомянутых в примерах, для целей настоящего изобретения можно использовать соединения формулы 1, перечисленные ниже.

1. (3-Додецилмеркапто-2-децилокси)пропиловый эфир (5-хлор-уридин)-5'-фосфорной кислоты
2. (3-Додецилмеркапто-2-децилокси)пропиловый эфир (5-трифторметилуридин)-5'-фосфорной кислоты
3. (3-Додецилмеркапто-2-дециклоси)пропиловый эфир (6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид)-5'-фосфорной кислоты
4. (3-Додецилмеркапто-2-децилокси)пропиловый эфир (5- фтор-уридин)-5'-фосфорной кислоты
5. (3-Додецилмеркапто-2-децилокси)пропиловый эфир (5-проп-1-енилуридин)-5'-фосфорной кислоты
6. (3-Додецилмеркапто-2-децилокси)пропиловый эфир (5-этинил-цитидин)-5'-фосфорной кислоты
7. (3-Додецилмеркапто-2-децилокси)пропиловый эфир (2-амино-6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид)-5'-фосфорной кислоты
8. (3-Додецилмеркапто-2-децилокси)пропиловый эфир (2,6-диаминопурин-9- β-D-рибофуранозид)-5'-фосфорной кислоты
9. (3-Додецилмеркапто-2-децилокси)пропиловый эфир (5-проп-2-енилуридин)-5'-фосфорной кислоты
10. (3-Додецилсульфонил-2-децилокси)пропиловый эфир (5-фтор-уридин)-5'-фосфорной кислоты
11. (3-Додецилсульфонил-2-децилокси)пропиловый эфир (5-хлор-уридин)-5'-фосфорной кислоты
12. (3-Додецилсульфонил-2-децилокси)пропиловый эфир (6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид)-5'-фосфорной кислоты
13. (3-Додецилокси-2-децилокси)пропиловый эфир (5-фтор-уридин)-5'-фосфорной кислоты
14. (3-Додецилокси-2-дицилокси)пропиловый эфир (6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид)-5'-фосфорной кислоты
15. (3-Додецилмеркапто-2-децилмеркапто)пропиловый эфир (5-фторуридин)-5'-фосфорной кислоты
16. (3-Ундецилмеркапто-2-ундецилокси)пропиловый эфир (5-фторуридин)-5'-фосфорной кислоты
17. (3-Ундецилмеркапто-2-ундецилокси)пропиловый эфир (5- трифторметилуридин)-5'-фосфорной кислоты
18. (3-Ундецилмеркапто-2-ундецилокси)пропиловый эфир (6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид)-5'-фосфорной кислоты
19. (3-Децилмеркапто-2-додецилокси)пропиловый эфир (5- трифторметилуридин)-5'-фосфорной кислоты
20. (3-Ундецилмеркапто-2-додецилокси)пропиловый эфир (5-фторуридин)-5'-фосфорной кислоты
21. (3-Ундецилмеркапто-2-децилокси)пропиловый эфир (5-трифторметилуридин)-5'-фосфорной кислоты
22. (3-Тетрадецилмеркапто-2-децилокси)пропиловый эфир (6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид)-5'-фосфорной кислоты
23. (3-Тридецилмеркапто-2-децилокси)пропиловый эфир (5-фторуридин)-5'-фосфорной кислоты
24. (3-Додецилмеркапто-2-децилокси)пропиловый эфир (2-фтораденозин)-5'-фосфорной кислоты
25. (3-Додецилмеркапто-2-децилокси)пропиловый эфир (2-дезокси-2-фтораденозин)-5'-фосфорной кислоты
26. Додециловый эфир (6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид)-5'-фосфорной кислоты
27. Гексадециловый эфир (5-фторуридин)-5'-фосфорной кислоты
28. Эйкозиловый эфир (5-трифторметилуридин)-5'-фосфорной кислоты
29. Додециловый эфир (5-фторуридин)-5'-фосфорной кислоты
30. Додециловый эфир (6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид)-5'-фосфорной кислоты
Пример 1.

(3-Додецилмеркапто-2-децилокси)пропиловый эфир (5-фторуридин)-5'-фосфорной кислоты
Обрабатывают 3,6 г (6,1 ммоль) (3-додецилмеркапто-2-децилокси)пропилового эфира фосфорной кислоты, дважды, 30 мл безводного пиридина, и концентрируют путем упаривания. Остаток растворяют в 30 мл безводного пиридина, обрабатывают в атмосфере азота 2,76 г (9,1 ммоль) хлорангидрида 2,4,6-триизопропилбензолсульфоновой кислоты и перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем добавляют 1,60 г (6,1 ммоль) 5-фторуридина (Fluka) и загрузку оставляют стоять в атмосфере N₂ в течение 24 часов.

Гидролиз осуществляют, используя 15 мл воды, смесь перемешивают еще в течение 2 часов при комнатной температуре, освобождают от растворителя в вакууме и дважды очищают от растворителя, используя небольшое количество толуола. Остаток очищают колоночной хроматографией на LiChoprep^® RP-18 с линейным градиентом элюента от метанола с водой (7/1) до метанола. Выход составляет 3,1 г (69% от теоретического количества); масло. R_f=0,24 (CH₂Cl₂/MeOH 8/2); R_f= 0,55 (CH₂Cl₂/MeOH/H₂O 6,5/2,5/0,4) на пластинах для ТХС Merk 5715, силикагель 60 F.

(3-Додецилмеркапто-2-децилокси)пропиловый эфир фосфорной кислоты получают в соответствии с описанием в ВОИС 92/03462.

Пример 2.

(3-Додецилмеркапто-2-децилокси) пропиловый эфир (6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид)-5'-фосфорной кислоты
Обрабатывают 6,2 г (12,5 ммоль) (3-додецилмеркапто-2-децилокси) пропилового эфира фосфорной кислоты 5,7 г (18,75 ммоль) хлорангидрида 2,4,6-триизопропилбензолсульфоновой кислоты, как описано в примере 1, и затем 3,55 г (11,25 ммоль) 6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозида и через 24 часа осуществляют гидролиз водой.

Затем к полученной смеси постепенно прикапывают раствор 2,85 г ацетата кальция в 15 мл воды, осаждая сырую кальциевую соль конъюгата. После продолжительного перемешивания с ацетоном (1/10) получают 6 г сырого аморфного продукта, имеющего площадь в 72% по ВЭЖХ.

Кальциевую соль суспендируют в 350 мл метанола, обрабатывают 150 г амберлита IR 120 в форме Na⁺ и перемешивают в течение 2 суток.

После этого удаляют ионообменную смолу, фильтрат упаривают и остаток очищают колоночной хроматографией на LiChoprep^® RP-18 с линейным градиентом метанола с водой от 5/1 до 9/1. Фракции, содержащие продукт, упаривают в вакууме и остаток перемешивают с ацетоном и сушат. Выход 3,52 г (41% от теоретического количества).

DC; R_f=0,45 (изопропанол/бутилацетат/конц.аммиак/вода 50/30/5/15).

Пример 3.

Натриевая соль (3-додецилмеркапто-2-децилокси)пропилового эфира (6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид)-5'-фосфорной кислоты
Аналогично примеру 2 в 400 мл безводного пиридина вводят во взаимодействие 41,4 г (3-додецилмеркапто-2-децилокси) пропилового эфира фосфорной кислоты с 42,9 г хлорангидрида 2,4,6-триизопропилбензолсульфоновой кислоты, и затем - с 23,7 г 6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозида. Сырую кальциевую соль, которую отфильтровывают отсасыванием после гидролиза и осаждения 25 г ацетата кальция в 160 мл воды, распределяют между 500 мл МТВ (метилтретбутиловый эфир) и 250 мл 2N HCl и перемешивают до полного растворения в органической фазе. Органическую фазу отделяют, промывают насыщенным раствором хлорида натрия и концентрируют в роторном испарителе. Остаток вносят в 80 LiChoprep^® RP-18 (обрабатывают RP-18 раствор сырого продукта в МТВ, упаривают и сушат) и разделяют на части на форколонке с RP-18. Каждый раз в качестве элюента служит смесь 3,7 л метанола, 400 мл воды, 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 г ацетата натрия. Фракции, содержащие продукт, объединяют, осаждают нужное соединение путем добавления 20 г ацетата кальция в 100 мл воды и фильтруют отсасыванием. Выход 32 г (43% от теоретического количества).

Кальциевую соль суспендируют в 250 мл МТВ, экстрагируют 80 мл 2N HCl путем встряхивания и органическую фазу дважды промывают насыщенным раствором хлорида натрия. После удаления растворителя остаток растворяют в 200 мл толуола и доводят pH до 7 против Friscolyt электрода 30% раствором метилата натрия. Натриевую соль осаждают путем перемешивания в 200 мл ацетона, фильтруют отсасыванием и сушат в печи для вакуумной сушки. Выход 29 г (37% от теоретического количества).

Величина R_f 0,18 (силикагель; элюент изопропанол/бутилацетат/вода/конц. аммиак 50/30/15/5).

Пример 4.

Натриевая соль (3-додецилмеркапто-2-децилокси)пропилового эфира(6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид)-5'-фосфорной кислоты
Аналогично примеру 3 получают сырой конъюгат из 40 г 6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозида. Сырой продукт очищают колоночной хроматографией, используя каждый раз 8 г, на колонке с фазой DIOL (диаметр 4 см, длина 25 см) (детекция при 254 нм; элюент: метанол/МТВ 10/4). Внесенный образец образует в элюенте прозрачный раствор. Фракции из различных выделений, содержащие продукт, объединяют, упаривают и осаждают в виде натриевой соли из толуола и ацетона, как в примере 3. Выход 64,5 г (51% от теоретического количества).

Значение R_f 0,85 (фаза DIOL; элюент метанол).

Пример 5.

Натриевая соль (3-додецилмеркапто-2-децилокси)пропилового эфира (6-метилмеркаптопурин-β-D-рибофуранозид)-5'-фосфорной кислоты
Аналогично примеру 1 вводят во взаимодействие 14,9 г 6-метилмеркаптопурин-9-β-D-рибофуранозида (50 ммоль) со смешанным ангидридом, полученным из 27,3 г (3-додецилмеркапто-2-децилокси)-пропилового эфира фосфорной кислоты и 25 г хлорангидрида 2,4,6-триизопропилбензолсульфоновой кислоты в 250 мл безводного пиридина, гидролизуют и концентрируют путем выпаривания. Аналогично примеру 3 сырой продукт (ВЭЖХ: 67% площадь) очищают хроматографией на RР-18, осаждают в виде кальциевой соли и превращают в натриевую соль. Выход 15,2 г (38% от теоретического количества).

Значение R_f, 0,22 (силикагель; элюент изопропанол/бутилацетат/вода/конц. аммиак 50/30/15/5).

Пример 6.

Натриевая соль (3-додецилмеркапто-2-децилокси) пропилового эфира (5-фторуридин)-5'-фосфорной кислоты
Аналогично примеру 1 50 г 5-фторуридина превращают в сырой конъюгат, осаждают в виде кальциевой соли, как описано в примере 3, и затем, чтобы конвертировать ее в свободную кислоту, очищают сырой продукт хроматографией аналогично примеру 4 на фазе DIOL, используя в качестве элюента метанол/МТВ 10/4. Натриевую соль, полученную, как в примере 3, извлекают с выходом 69%.

Значение R_f 0,35 (пластины DIOL; элюент метанол/МТВ 10/4).

Пример 7.

Значения IC₅₀ (мкг/мл) для азатиоприна, 6-меркаптопурина (6-МР), 6-меркаптопуринрибозида, ВМ 92-0729 и доксорубицина при анализах КОЕ-Э и КОЕ-ГМ
В таблице 1 приводятся величины IC₅₀, мкг/мл, для азатиоприна, 6-меркаптопурина (6-МР) и 6-меркаптопуринрибозида в сравнении с (3-додецилмеркапто-2-децилокси)пропиловым эфиром (6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид)-5'-фосфорной кислоты - ВМ 92·0729 - для цитотоксичности in vitro для стволовых муриновых клеток костного мозга, полученные при анализах отношений колониеобразующих единиц к эритроцитам (КОЕ-Э) и колониеобразующих единиц к гранулоцитам- макрофагам (КОЕ-ГМ). В качестве вещества для сравнения также включено цитостатическое-цитотоксическое соединение доксорубицин. Все соединения проверяются при 3-6 различных концентрациях при по крайней мере двух-трехкратном повторении для каждой проверяемой концентрации.

Как можно видеть из результатов, ВМ 92·0729 значительно лучше переносится стволовыми клетками костного мозга по сравнению со всеми другими тестируемыми соединениями, в частности по сравнению с 6-меркаптопуринрибозидом.

Значения IC₅₀ (мкг/мл) для азатиоприна, 6-меркаптопурина (6-МР), 6-меркаптопуринрибозида, ВМ 92·0729 и доксорубицина при анализах КОЕ-Э и КОЕ-ГМ^a (см. в табл. 1).

Пример 8.

Токсичность ВМ 92·0729, азатиоприна, 6-меркаптопурина и 6-меркаптопуринрибозида для костного мозга у самок мышей Balb/c на 4 сутки (эксп. 930740)
Эксп. 930740 показывает токсичность для костного мозга ВМ 92 ·0729, азатиоприна, 6-меркаптопурина и 6-меркаптопуринрибозида in vivo на самках мышей Balb/c, которым препараты давались один раз в сутки, р. о., четыре дня подряд (сутки 0 - сутки + 3). Животных умерщвляют на 4 сутки (сутки +4) и определяют насыщенность клетками костного мозга (клетки/бедр. кость). Результаты показывают отсутствие токсичности для костного мозга в случае конъюгата 6-меркаптопуринрибозида с простым эфиром липида ВМ 92 · 0729 вплоть до самых высоких проверенных доз, т.е. до 100 мг.кг^-1 сутки^-1, что соответствует, в молярном отношении, 30 мг.кг^-1. сутки^-1 6-меркаптопуринрибозида. Это последнее соединение, в отличие от простого эфирного липидного конъюгата ВМ 92·0729, показывает отчетливое, зависящее от дозы, снижение насыщенности клетками костного мозга. Такие же результаты получают для других веществ, в том числе, для азатиоприна и 6-меркаптопурина.

Токсичность ВМ 92 · 0729, азатиоприна, 6-меркаптопурина и 6-меркаптопуринрибозида для костного мозга у самок мышей Balb/c, на 4 сутки (эксп. 930740) (см. табл. 2).

Пример 9.

Токсичность ВМ 92·0729, азатиоприна, 6-меркаптопурина, 6-меркаптопуринрибозида и циклоспорина A для костного мозга у самок мышей Balb/c, на 4 сутки (эксп. 940026)
Эксп. 940026 является экспериментом с целью воспроизведения результатов, полученных в эксп. 930740 (пример 8). В этот эксперимент в качестве соединения для сравнения также включен циклоспорин A. Результаты эксп. 940026 подтверждают результаты, полученные в эксп. 930740 in vivo.

Токсичность ВМ 92 · 0729, азатиоприна, 6-меркаптопурина, 6-меркаптопуринрибозида и циклоспорина A для костного мозга у самок мышей Balb/c, на 4 сутки (эксп. 940026) (см. табл. 3).

Пример 10.

Токсичность (мкМ) BM 92·07. и 5-FU при анализах КОЕ-Э и КОЕ-ГМ для костного мозга
В приведенной ниже таблице даются значения IC₅₀ для 5-фторуридина (5-FU) и (3-додецилмеркапто-2-децилокси)пропилового эфира (5-фторуридин)-5'-фосфорной кислоты ВМ 92·0700) для токсичности для костного мозга при анализах in vitro КОЕ-Э и КОЕ-ГМ. Условия испытаний см. в примере 7.

Результаты показывают, что конъюгат простого эфира липида и 5-фторуридина ВМ 92 · 0700 в 610 раз и в 238 раз менее токсичен для эритроцитных и гранулоцитных/макрофаговых стволовых клеток костного мозга, соответственно, чем сам 5-FU.

Токсичность (мкМ) ВМ 92·0700 и 5-FU при анализах КОЕ-Э и КОЕ-ГМ для костного мозга (см. табл. 4).

Пример 11.

Влияние конъюгата простого эфира липида с 5FU (ВМ 92 · 0700) (фиг. 1) и 5-FU (фиг. 2) на лейкоз L1210 in. vivo время жизни
Мышей инокулируют клетками лейкоза L1210 в день О (n = 10 животных/группу) и затем дают лечебные препараты один раз в сутки, ip., от дня 0 (+1 час) до дня +41 (6 недель) еженедельными циклами, указанными на фиг. 1 и 2 соответственно.

Из графиков времени выживания контрольных и обрабатываемых групп, приведенных на фиг. 2, очевидно, что 5-FU, как сообщалось в литературе, имеет весьма узкий профиль зависимости доза-эффективность, т.е. увеличение дозы, например, от 2·10/5·0,1 мг.кг^-1·сутки^-1 до 2·10/5·0,3 мг.кг^-1·сутки^-1 или даже до более высоких доз ведет к пониженным коэффициентам выживаемости.

Напротив, в случае конъюгата 5-FU и простого эфира липида (ВМ 92·0700) получают отчетливое, зависящее от дозы, возрастание времени жизни по сравнению с контролем 1 и 11 (фиг. 1), указывающее, что эквимолярные дозы ВМ 92·0700 являются явно более эффективными, при сравнении дозы ВМ 92·0700 являются явно более эффективными, при сравнении со стандартным соединением 5-FU, в этой модели лейкоза.

Учитывая, что ВМ 92·0700 является более эффективным (фиг. 1 и 2) и значительно менее токсичным для клеток костного мозга, можно сделать вывод, что ВМ 92·0700 обладает значительно более высоким терапевтическим индексом/коэффициентом, чем стандартный цитостатический 5-FU.

Изобретение относится к новым нуклеозидмонофосфатным производным с остатками липидных сложных эфиров общей формулы I, в которой R¹, R² представляют собой линейную или разветвленную насыщенную алкильную цепь, содержащую 1-20 атомов углерода; R³, R⁵ представляют собой водород, гидроксильные группы; R⁴ представляет собой гидроксильную группу; Х представляет собой атом серы, сульфинильную или сульфонильную группу; Y представляет собой атом кислорода; В представляет собой пуриновое и/или пиримидиновое основание при условии, что по крайней мере один из остатков R³ или R⁵ представляет собой водород; к их таутомерам, их оптически активным формам и рацемическим смесям, или их физиологически приемлемым солям неорганических и органических кислот и/или оснований, а также к способам их получения и к лекарственным средствам, содержащим упомянутые соединения. Соединения формулы I обладают противоопухолевой активностью. 3 с. и 10 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл.

1. Нуклеозидмонофосфатные производные формулы I

где R¹ может представлять собой линейную или разветвленную насыщенную алкильную группу, содержащую 1 - 20 атомов углерода;
R² может представлять собой линейную или разветвленную насыщенную алкильную группу, содержащую 1 - 20 атомов углерода;
R³ представляет собой водород или гидроксильную группу;
R⁴ представляет собой гидроксильную группу;
R⁵ представляет собой водород или гидроксильную группу;
X представляет собой атом серы, сульфинильную или сульфонильную группу;
Y представляет собой атом кислорода;
B представляет собой пуриновое или пиримидиновое основание формулы IIIа или IIIг


где R⁶ представляет собой водород или галоген;
R^6′ представляет собой водород;
R⁹ представляет собой водород;
R¹⁰ представляет собой водород, меркаптогруппу, C₁ - C₆-алкилмеркаптогруппу;
при условии, что по крайней мере один из остатков R³ и R⁵ представляет собой водород,
их таутомеры, их оптически активные формы и рацемические смеси, или их физиологически приемлемые соли неорганических и органических кислот и оснований. 2. Нуклеозидмонофосфатные производные формулы I по п.1, отличающиеся тем, что R¹ представляет собой линейную C₈ - C₁₅-алкильную группу. 3. Нуклеозидмонофосфатные производные формулы I по п.1 или 2, отличающиеся тем, что R² представляет собой линейную C₈ - C₁₅-алкильную группу. 4. Нуклеозидмонофосфатные производные формулы I по пп.1 - 3, отличающиеся тем, что R⁵ представляет собой водород. 5. Нуклеозидмонофосфатные производные формулы I по пп.1 - 4, отличающиеся тем, что R³ представляет собой гидроксильную группу. 6. Нуклеозидмонофосфатные производные формулы I по пп.1 - 5, отличающиеся тем, что R⁶ представляет собой водород. 7. Нуклеозидмонофосфатные производные формулы I по пп.1 - 6, отличающиеся тем, что R¹⁰ представляет собой водород или C₁ - C₆-алкилмеркаптогруппу. 8. Нуклеозидмонофосфатные производные формулы I по пп.1 - 7, отличающиеся тем, что R¹ представляет собой линейную C₉ - C₁₃-алкильную группу, R² представляет собой линейную C₈ - C₁₄-алкильную группу, R³ представляет собой гидроксильную группу, R⁴ представляет собой гидроксильную группу, R⁵ представляет собой водород, R⁶ представляет собой водород или атом фтора, хлора или брома, R^6′ представляет собой водород, R¹⁰ представляет собой водород, меркаптогруппу, метилмеркаптогруппу, этилмеркаптогруппу, бутилмеркаптогруппу, гексилмеркаптогруппу. 9. Нуклеозидмонофосфатные производные формулы I по пп.1 - 8, отличающиеся тем, что нуклеозидную часть выбирают из группы, включающей 6-меркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид, 5-фторуридин, 5-хлоруридин, 6-метилмеркаптопурин-9-β-D-рибофуранозид, 2'-дезокси-5-фторуридин. 10. Нуклеозидмонофосфатное производное формулы I по пп.1 - 9, отличающееся тем, что оно является (3-додецилмеркапто-2-децилокси)пропиловым эфиром (5-фторуридин)-5'-фосфорной кислоты или его солью. 11. Нуклеозидмонофосфатные производные формулы I по пп.1 - 10, обладающие противоопухолевой активностью. 12. Способ получения нуклеозидмонофосфатных производных формулы I по пп. 1 - 11, отличающийся тем, что вводят во взаимодействие соединение общей формулы V

где R¹, R², X и Y имеют указанные выше значения,
с соединением общей формулы VI

где R³, R⁴, R⁵ и B имеют указанные выше значения,
в присутствии активного хлорангидрида, такого, как хлорангидрид 2,4,6-триизопропилбензолсульфоновой кислоты, и азотистого основания, например пиридина или лутидина, в инертном растворителе, таком, как толуол, или непосредственно в безводном пиридине. 13. Лекарственное средство, обладающее противоопухолевой активностью, содержащее фармацевтические адъюванты и носители, отличающееся тем, что оно содержит по крайней мере одно соединение по любому из пп.1 - 10.