НЕЙРОТРОПНОЕ ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2000 года по МПК A61K39/395 A61P25/30 A61P25/18 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для коррекции нарушенного иммунного гомеостаза, сопровождающегося изменением психосоматических функций и/или биологических реакций, путем многогранного воздействия на интегративную деятельность мозга.

Известно использование антител в качестве лекарственного средства для лечения различных инфекционных, вирусных заболеваний (см. Р.Я. Мешкова, Л.В. Ковальчук, М. И. Коновалова "Клиника, диагностика, лечение некоторых форм иммунодефецитов и аллергических заболеваний с основами организации службы клинической иммунологии", Смоленск, "Полиграмма", 1995 г., с. 56-64; авт. свид. 1131508, кл. А 61 К 39/00, 1984 г.) Противовирусное действие этих лекарственных препаратов на основе антител, специфических к антигенным детерминантам определенного вируса, строго избирательно, а вызванный ими пассивный иммунитет держится относительно недолго.

Известно также лекарственное средство на основе антител к возбудителю, модифицированных для повышения эффективности иммунной реакции 1-2 остатками жирных кислот (см. авт. св. 1730144, кл. C 12 N 7/00, 1992 г.) Однако подобная обработка дает ожидаемый эффект не для всех антител, используемых в лечебных целях.

Наиболее близким к изобретению можно считать использование в качестве нейротропного лекарственного средства антисыворотки-антитела к мозгоспецифическим белкам для лечения некоторых демиелинизирующих заболеваний центральной нервной системы /см. книгу М. Б. Штарк, Мозгоспецифические белки /антигены/ и функции нейрона, М., "Медицина", 1985 г.; с.234-236, 224-225/.

Однако такие препараты характеризуются узкой специфичностью и, как правило, недостаточной активностью, что требует применения дополнительных веществ, обладающих стимулирующим действием, и могут вызывать побочные явления.

Изобретение направлено на создание нейротропного лекарственного средства на основе потенцированной формы антитела-антисыворотки к мозгоспецифическому белку, эффективно стимулирующего регенеративные процессы без побочных явлений.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что нейротропное лекарственное средство на основе антитела-антисыворотки к мозгоспецифическому белку представляет собой потенцированную форму антитела-антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100, полученную путем многократного разведения и встряхивания по гомеопатическому методу.

Для приготовления потенцированной формы антитела-антисыворотки используют мозгоспецифический белок S-100, физико-химические свойства которого описаны в статье М.В. Старостина, С.М. Свиридов, Нейроспецифический белок S-100, Успехи современной биологии, 1977 г., т.5, с. 170-178; книге М.Б. Штарк, Мозгоспецифические белки /антигены/ и функции нейрона, М., "Медицина", 1985 г. ; с.12-14, выделенный из ткани головного мозга быка по следующей методике:
- замороженную в жидком азоте ткань растирают в порошок на специальной мельнице;
- экстракцию белков проводят в соотношении 1:3 (вес/объем) в экстрагирующем буфере при гомогенизации;
- гомогенат прогревают в течение 10 мин при 60^oC и охлаждают до 4^oC на ледяной бане;
- термолабильные белки удаляют центрифугированием;
- проводят ступенчатое фракционирование сульфатом аммония с последующим удалением выпадающих в осадок примесных белков;
- содержащую белок S-100 фракцию осаждают 100% насыщенным сульфатом аммония при снижении pH до 4,0 и собирают центрифугированием;
- осадок растворяют в минимальном объеме буфера, содержащего ЭДТА и меркаптоэтанол, диализируют против деионизованной воды и лиофильно высушивают;
- фракционирование кислых белков продолжают хроматографией на ионообменных носителях - ДЭАЭ целлюлозе ДЕ-52 и затем ДЭАЭ-сефадексе А-50;
- собранные и отдиализованные фракции, содержащие белок S-100, разделяют по молекулярному весу гель-фильтрацией на сефадексе G-100;
- очищенный белок S-100 диализируют и лиофильно высушивают.

Молекулярный вес очищенного мозгоспецифического белка S-100 составляет - 21000 Д.

Благодаря высокому содержанию аспарагиновой и глутаминовой кислот мозгоспецифический белок S-100 является сильнокислым и занимает крайнее анодное положение при электрофорезе в прерывистой буферной системе в полиакриламидном геле, что облегчает его идентификацию.

Для получения мозгоспецифической антисыворотки к выделенному мозгоспецифическому белку S-100 готовят смесь очищенного белка S-100 (антигена) в комплексе с метилированным бычьим сывороточным альбумином в качестве носителя с полным адъювантом Фрейнда, которую вводят подкожно лабораторному животному - кролику в область спины в количестве 1-2 мл. На 8-й, 15-й день проводят повторную иммунизацию. Забор крови производят (например, из вены уха) на 26-й и 28-й день.

Полученная антисыворотка имеет титр 1:500 - 1:1000, образует единственную полосу преципитации с экстрактом из нервной ткани, но не реагирует с экстрактами гетерологичных органов и формирует единственный пик преципитации как с чистым белком S-100, так и с экстрактом нервной ткани, что свидетельствует о моноспецифичности полученной антисыворотки.

Из полученной антисыворотки, представляющей собой растворимую в нейтральном растворителе (дистиллированной воде, физиологическом растворе, спирте и т. п.) субстанцию, готовят потенцированную форму, при этом производят равномерное уменьшение концентрации путем последовательного разведения 1 части упомянутой субстанции в 9 частях (для десятичного разведения) или в 99 частях (для сотенного разведения) или в 999 частях (для тысячного разведения) нейтрального растворителя с многократным вертикальным встряхиванием ("динамизацией") каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения по гомеопатическому методу (см., например, В.Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с. 14-29). Используют приготовленное таким образом нейротропное лекарственное средство в принятых в гомеопатической практике лекарственных формах и разведениях, преимущественно сотенных(C1-C10000).

Лабораторные исследования биологической активности заявленного нейротропного лекарственного средства в виде потенцированной формы антитела-антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100 в разведениях C6-C200 показали следующее:
1) при исследованиях на моделях условной реакции избегания (УРИ) введение в течение 5-ти дней потенцированной формы антитела-антисыворотки к белку S-100 тормозило формирование УРИ независимо от модальности условного стимула и безусловного подкрепления (реакции "наказания" или "награды");
2) при исследовании в переживающих срезах гиппокампа крыс на модели длительной постгетанической потенциации (ДПТП) обнаружено, что потенцированная форма антитела-антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100 не влияет на индукцию потенциации, прединкубация срезов в потенцированной антисыворотке снимает эффект подавления ДПТП нативной антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100. Модифицирующее влияние потенцированной антисыворотки на синаптическую эффективность обусловлено проявлением феномена системной адаптации, ранее названного "бипатическим" (см. заявку РСТ WO 97/28776, кл. A 61 J 3/00, А 61 H 39/00, 1997 г.)
3) при исследовании влияния потенцированных антител-антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100 в разведениях C6 и C200 (условная концентрация 10^-12 и 10^-400) на пассивные и активные характеристики мембран нейронов подклеточного ганглия H.Pomatia выявлено, что все варианты потенцированных разведений оказывают идентичный с исходными веществами, но в разной степени выраженный эффект: деполяризуют мембрану, снижают амплитуду потенциала действия и максимальную проводимость, способствуют росту инактивации каналов.

Ниже приведены примеры использования нейротропного лекарственного средства.

Пример 1.

Б-ной С. , 28 лет. Диагноз - хронический алкоголизм II ст., алкогольный синдром средней тяжести. Монотерапия потенцированной антисывороткой к мозгоспецифическому белку S-100 по 5 капель спиртового раствора в разведении С200 5 раз в день в течение 2 -х суток ликвидировала все проявления алкогольной абстиненции: тошноту, жажду, потливость, головную боль. Нормализовались сон, аппетит, настроение.

Пример 2. Б-ная П., 40 лет. Диагноз - хронический алкоголизм II ст. в течение 3-х лет не употребляла алкогольные напитки, но в последнее время б-ная отмечает возобновление влечения к алгоколю, расстройство сна, снижение настроения. Прием потенцированной антисоворотки-антитела к мозгоспецифическому белку в разведении C200 в дозе по 1 таблетке 0,25 г по утрам в течение 2-х недель полностью подавил влечение к употреблению спиртных напитков, сон и настроение нормализовались.

Пример 3.

Б-ной П., 20 лет. Диагноз - опийная наркомания II ст. В течение 2-х лет употребляет нарастающие дозы героина, внутривенно. Неоднократно лечился в стационарах, обычно курс дезинтоксикации достигал 2-3-х недель. Однако после выписки из больницы сразу же возобновлял прием наркотиков. При очередной госпитализации в декабре 1998 г. в комплексную терапию героиновой абстиненции включен потенцированный препарат - потенцированная антисыворотка к мозгоспецифическому белку S-100 по 5 капель спиртового раствора в разведении C100 3 раза в день. Абстинентный синдром купирован в течение 7 дней. После выписки в течение 1-го месяца героин не употребляет, при появлении признаков влечения принимает по 1 таблетке (0,5 г) C1000 заявленного препарата - потенцированного антитела-сыворотки к мозгоспецифическому белку S-100.

Пример 4. Б-ной Д., 45 лет, диагноз психоорганический синдром вследствие черепно-мозговой травмы, астенический вариант. Инвалид II группы. Весной и осенью состояние ухудшается: усиливаются головные боли, раздражительность, метеолабильность, нарушается сон. Больной быстро устает, с трудом ухаживает за собой. Последний период обострения в течение 2-х месяцев принимал только заявленный нейротропный препарат в разведении C500 по 1 таблетке 0,25 г 1 раз в день. Состояние улучшилось, б-ной более активен, нормализовались сон и настроение. Головных болей нет. Занимается лечебной физкультурой. Субъективно оценивает свое состояние как удовлетворительное.

Пример 5.

Б-ная К., 43 года. Находится в психиатрической больнице с диагнозом эндогенная депрессия неуточненного генеза. Проводимая в течение 3-х недель терапия антидепрессантами и транквилизаторами неэффективна, жалуется на заторможенность, бессоницу, "бесчувствие". После присоединения к среднетерапевтическим дозам антидепрессантов потенцированного антитела-антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100 в разведении С1000 по 5 капель спиртового раствора 8 раз в день настроение выровнялось в течение 10 дней. Выписана в удовлетворительном состоянии.

Пример 6.

Б-ная В. , 32 года. Диагноз - неврастения. Жалуется на слабость, утомляемость, головную боль, раздражительность. В амбулаторных условиях принимала утром по 1 таблетке C200 заявленного нейротропного препарата - потенцированного антитела к мозгоспецифическому белку S-100. Состояние в течение 5 дней резко изменилось: б-ная стенична, активна, настроение, сон, раздражительности нет.

Пример 7.

Б-ной П., 19 лет, студент. Жалуется на быструю утомляемость, невозможность сосредоточиться, снизилась успеваемость, боится не сдать очередную сессию. Эффективный в подобных случаях курс ноотропила повышения работоспособности не принес. Прием в течение недели заявленного нейротропного лекарственного средства по 1 таблетке (0,25 г) 2 раза в день потенцированного антитела-антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100 в разведении C50 быстро восстановил работоспособность, повысил уровень внимания. Б-ной успешно сдал экзамены.

Пример 8.

Б-ная Т., 80 лет. Живет с дочерью - инвалидом. Из-за нарушений памяти не может справляться с домашней работой, забывает дорогу в магазин. Курс лечения в течение 6 месяцев заявленным нейротропным лекарственным средством по 5 капель спиртового раствора C200 привел к заметному улучшению памяти. Б-ная стала ухаживать за дочерью, ходит по улицам, выполняет домашнюю работу.

Пример 9.

Б-ной С., 49 лет. Диагноз неоперабельная нейробластома мозжечка. Болен в течение 3-х лет, прошел курс химио- и лучевой терапии. Несмотря на лечение состояние тяжелое: из-за нарушений походки и слабости не способен к самостоятельному передвижению, нарастает кахексия. Назначено: потенцированная антисыворотка к мозгоспецифическому белку S-100B, который является одной из фракций мозгоспецифического белка S-100, в разведении С1000 по 5 капель спиртового раствора 2 раза в день. На фоне терапии через 4 месяца состояние б-ного несколько стабилизировалось: уменьшились нарушения походки (начал передвигаться с помощью палочки) и слабость, появился аппетит. Состояние стабилизировалось, опухоль не растет.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для коррекции нарушенного иммунного гомеостаза, сопровождающегося изменением психосоматических функций и/или биологических реакций, путем многогранного воздействия на интегративную деятельность мозга. Нейротропное лекарственное средство представляет собой потенцированную форму антитела-антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100. Указанную форму получают путем последовательного многократного разведения и вертикального встряхивания по гомеопатическому методу раствора антител-антисыворотки в нейтральном растворителе. Лекарственное средство эффективно стимулирует регенеративные процессы без побочных эффектов.

Нейротропное лекарственное средство на основе антисыворотки к мозгоспецифическому белку, отличающееся тем, что оно представляет собой потенцированную форму антисыворотки в виде полученного путем последовательного многократного разведения и вертикального встряхивания по гомеопатическому методу раствора антител - антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100 в нейтральном растворителе.