КРИСТАЛЛОСКОПИЧЕСКИЙ СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ У ДЕТЕЙ Российский патент 2000 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторному исследованию плазмы крови при общепатологическом синдроме эндогенной интоксикации (СЭИ), сопровождающем целый ряд соматических, инфекционных и хирургических заболеваний у детей.

Тяжесть состояния детей независимо от формы патологии обусловлена степенью разбалансированности биохимических типовых реакций повреждения и защиты (синдромом эндогенной интоксикации). Оценка СЭИ с учетом повреждения на системном, органном, мембранном, внутриклеточном уровнях позволяет прогнозировать течение и исход заболевания.

В диагностике СЭИ известны такие методы, как исследование лейкоцитарной формулы, определение скорости оседания эритроцитов, показателей белкового обмена, исследование соотношения белковых фракций, концентрации белково-азотистых шлаков, исследование иммунного профиля с функциональными характеристиками неспецифического и специфического иммунного ответа (исследование соотношений фракций комплемента, фагоцитарной активности нейтрофилов, функциональной активности T- и B-лимфоцитов); регистрация фазности течения внутрисосудистых изменений, функциональной активности альфа- и бета-адренорецепторов клеток крови (Сб, "Эндогенные интоксикации", ч. 2. - С.-Петербург, 1994).

Ближайшим аналогом способа диагностики эндогенной интоксикации является комплексная оценка СЭИ по вычислению индекса интоксикации М.В. Гринева с соавт., включающего значение лейкоцитарного индекса интоксикации, концентрацию креатинина и уровень среднемолекулярных пептидов (С.В. Оболенский, М.Я. Малахова "Лабораторная диагностика интоксикаций в практике интенсивной терапии", С.-Петербург, 1991, стр. 13). Данный метод основан на исследовании функциональной направленности иммунокомпетентных клеток крови в сочетании с биохимическими и гуморальными показателями в оценке степени тяжести СЭИ.

Однако как и все другие биохимические методы, данный способ не несет информации о структуре и взаимодействии компонентов биожидкостей, представляющих единую гуморальную систему организма, не обеспечивает достоверной информации о прогнозе течения и возможных исходах заболеваний, а также требует большого объема крови для исследования, что создает определенные сложности в педиатрической практике.

Целью настоящего изобретения является устранение отмеченных недостатков, а именно повышение информативности в оценке степени тяжести патологии, в возможности прогнозирования течения заболевания и его исходов, уменьшения объема используемой крови.

Указанная цель достигается тем, что в поляризованном свете в образцах цитратной плазмы и плазмы с добавлением ингибитора протеолиза эпсилон-аминокапроновой кислоты (ЕАКК) проводился подсчет количества двулучепреломляющих кристаллов (ДЛПК) и измерение площади дендрита ЕАКК.

Способ осуществлялся следующим образом. Венозная кровь набиралась в две пробирки: первая - с 3,8% раствором цитрата натрия, вторая - со смесью 3,8% раствора цитрата натрия и ЕАКК (100 мг на 1 мл) в соотношении 1:9. Кровь центрифугировалась при 3000 об/мин в течение 15 минут, плазма отделялась. 0,04 мл плазмы наносились на предметное стекло и накрывались покровными стеклами. После инкубации при температуре 37^oC в течение 36 часов полученные образцы микроскопировались в поляризованном свете.

В исследуемых образцах плазмы площадью 324 мм² производили подсчет количества ДЛПК и вычисляли площадь дендрита ЕАКК.

При отсутствии СЭИ в образце цитратной плазмы определялось до 15 ДЛПК, а площадь дендрита ингибитора (ЕАКК) в образце с ЕАКК составляла 324 - 292 мм².

При I степени СЭИ в цитратной плазме фиксировалось от 15 до 300 двулучепреломляющих кристаллов, в образце с ЕАКК - и отсутствовали ДЛПК, площадь дендрита ЕАКК составляла 243 - 291 мм².

При II степени СЭИ в цитратной плазме регистрировалось увеличение количества ДЛПК от 301 до 1000 и появление единичных ДЛПК в образцах плазмы с ЕАКК.

При I и II степенях тяжести СЭИ состояние больных детей было стабильным, требовало минимального динамического наблюдения и симптоматического лечения, летальность у этой категории больных отсутствовала.

При III степени СЭИ нарастало количество ДЛПК от 1000 до 5000 в цитратной плазме, количество ДЛПК в пробе с ЕАКК колебалось от 16 до 1000, а также определялось уменьшение площади дендрита ЕАКК. Состояние больных отличалось нестабильностью, требовало постоянного инвазивного мониторирования и постоянного интенсивного лечения. Летальный исход среди этих пациентов отмечался в 10 - 17% случаев.

При IV степени СЭИ наблюдалось значительное увеличение количества ДЛПК в обоих образцах плазмы и исчезновение дендрита ЕАКК, а также нарастание уровня среднемолекулярных пептидов, гиперпротеолиз, фаза потребления диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови, тяжелая анемия, увеличение концентрации азотистых шлаков. Все больные с данной степенью тяжести СЭИ находились в реанимационном отделении, имели декомпенсацию одной или нескольких жизненно важных функций организма. Эти пациенты нуждались в постоянном клинико-лабораторном мониторинге и интенсивной комплексной терапии. Летальность в данной группе больных составила 67 - 81%.

В динамике патологического процесса уменьшение количества ДЛПК и увеличение площади дендрита ЕАКК расценивалось как благоприятный прогноз в течение заболевания и сопровождалось улучшением клинического состояния больных.

Сохранение большого количества ДЛПК в обоих образцах и уменьшение площади дендрита ЕАКК являлось показанием для применения методов интенсивной терапии с включением искусственной вентиляции легких и экстракорпоральных методов очистки крови (плазмафереза, ультрафильтрации, гемодиализа и других) в условиях отделения реанимации и интенсивной терапии.

Если же, несмотря на проводимое комплексное лечение, у больных с IV степенью СЭИ кристаллоскопическая картина не изменялась, то это считалось прогностически неблагоприятным и в 100% случаев у этих пациентов наступал летальный исход.

Все кристаллоскопические характеристики имели высокодостоверные коррелятивные связи с физиологическими и биохимическими показателями пациентов.

Поляризационная микроскопия цитратной плазмы и плазмы с ингибитором протеолиза ЕАКК, являющимся специфическим ингибитором многих сериновых протеаз, позволяла выявлять степень СЭИ, степень протеолиза, глубину деструктивных процессов, выраженность катаболических реакций, оценивать эффективность комплексной терапии, определять прогноз течения заболевания и его исход.

Указанные отличительные признаки в известных аналогах отсутствуют.

Количественная кристаллоскопическая характеристика образцов плазмы при различных степенях СЭИ представлена в таблице.

На следующих клинических примерах проиллюстрированы кристаллоскопические структуры плазмы у больных с различными исходами заболеваний.

1. Больной Б. (И.б. N 1181) поступил в стационар областной детской больницы в возрасте 3 недель с диагнозом: сепсис (менингоэнцефалит, пневмония, энтероколит), перинатальное поражение ЦНС. В анализах крови - анемия, лейкоцитоз, нейтрофилез, признаки диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови, концентрация СМП - 1,311/1,652. Кристаллоскопическая картина: в образце цитратной плазмы - большое количество ДЛПК, в образце с ЕАКК - отсутствие дендрита ЕАКК, большое количество ДЛПК. Состояние крайне тяжелое, показано проведение интенсивной терапии. Проведены сеансы плазмафереза на фоне стандартной медикаментозной терапии. Состояние остается тяжелым, но по лабораторным показателям прогноз оптимистичный: повышается количество тромбоцитов, уменьшается концентрация СМП, снижается степень выраженности протеолиза, снижается концентрация продуктов деградации фибриногена. Кристаллоскопическая картина: исчезают ДЛПК в образце с ЕАКК, уменьшается их количество в образце цитратной плазмы. Через 1 месяц ребенок выписан из стационара с выздоровлением.

2. Новорожденный З. (И.б. N 1659) поступил в отделение реанимации новорожденных областной детской больницы с диагнозом: перинатальное поражение ЦНС, отек мозга, кома I степени. Длительная искусственная вентиляция легких. Развитие гнойного трахеобронхита, пневмония, энтероколита в динамике заболевания. Грибковый сепсис. По лабораторным показателям признаки эндогенной интоксикации IV степени: тромбоцитопения (52х10, гиперпротеолиз, гиперфибринолиз, высокая концентрация продуктов деградации фибриногена, высокий уровень среднемолекулярных пептидов (до 1,250/1,500), повышен ЛИИ, повышена концентрация креатинина. Кристаллоскопическая картина: большое количество ДЛПК в образце цитратной плазмы, в образце с ЕАКК - отсутствует дендрит ЕАКК и также большое количество ДЛПК. Прогноз для жизни сомнителен. Абсолютно показаны экстракорпоральные методы лечения. После проведенного сеанса плазмафереза состояние несколько улучшилось. Однако кристаллоскопическая картина через 2 суток после плазмафереза та же, что указывало на возможность неблагоприятного исхода. Через 2 недели после начала лечения наступает смерть.

Способ может быть использован в медицине, а именно для оценки степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации (СЭИ) у детей. Проводят подсчет количества двулучепреломляющих кристаллов (ДЛПК) в образцах плазмы без и с добавлением ингибитора протеаз (эпсилон-аминокапроновой кислоты - ЭАКК) и измеряют площадь дендрита ингибитора протеаз, и при количестве ДЛПК в образцах цитратной плазмы от 15 до 300 и площади дендрита ЭАКК 243-291 мм² диагностируют I степень СЭИ, при ДЛПК от 301 до 1000 и площади дендрита ЭАКК 242-162 мм - II степень, при ДЛПК от 1001 до 5000, площади дендрита ЭАКК от 15 до 1000 - III степень, при ДЛПК в образцах плазмы без ингибитора от 5000 до 15000 и в образцах с ингибитором от 1000 до 15000 и площади дендрита ЭАКК от 80 мм до полного исчезновения - IV степень СЭИ. Способ позволяет повысить информативность и точность при оценке степени тяжести СЭИ у детей. 1 табл.

Способ диагностики степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации (СЭИ) у детей методом оптико-поляризационной микроскопии плазмы крови, отличающийся тем, что проводится подсчет количества двулучепреломляющих кристаллов (ДЛПК) в образцах плазмы без и с добавлением ингибитора протеаз (эпсилон-аминокапроновой кислоты - ЭАКК) и измеряется площадь дендрита ингибитора протеаз, и при количестве ДЛПК в образцах цитратной плазмы от 15 до 300 и площади дендрита ЭАКК 243 - 291 мм² диагностируют I степень СЭИ, при ДЛПК от 301 до 1000 и площади дендрита ЭАКК 242 - 162 мм² - II степень; при ДЛПК от 1001 до 5000, площади дендрита ЭАКК 161 - 81 мм² и количестве ДЛПК в образце с ЭАКК от 15 - 1000 - III степень, при ДЛПК в образцах плазмы без ингибитора от 5000 до 15000 и в образцах с ингибитором от 1000 - до 15000 и площади дендрита ЭАКК от 80 мм² до полного исчезновения - IV степень СЭИ.