СПОСОБ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ СИНДРОМА ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ У БОЛЬНЫХ С ТЕРМИЧЕСКОЙ ТРАВМОЙ Российский патент 2009 года по МПК G01N33/49 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, в частности к способам оценки степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой.

В качестве прототипа выбран способ диагностики степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации (СЭИ), заключающийся в определении степени тяжести, течения, прогноза исхода заболевания подсчетом количества двулучепреломляющих кристаллов (ДЛПК) в образцах плазмы без- и с добавлением ингибитора протеаз (эпсилон-аминокапроновой кислоты - ЭАКК), в измерении площади дендрита ингибитора протеаз и последующей диагностике I^ой степени СЭИ при количестве ДЛПК в образцах цитратной плазмы от 15 до 300 и площади дендрита ЭАКК 243-291 мм², при ДЛПК от 301 до 1000 и площади дендрита ЭАКК 242-162 мм² - II^ой степени, при ДЛПК от 1001 до 5000, площади дендрита ЭАКК от 15 до 1000 - III^ей степени, при ДЛПК в образцах плазмы без ингибитора от 5000 до 15000 и в образцах с ингибитором от 1000 до 15000 и площади дендрита ЭАКК от 80 мм² до полного исчезновения - IV^ой степени СЭИ (см. патент №2158923, G01N 33/48, 2000 г.).

Однако известный способ является длительным, трудоемким, субъективным и не дает возможности ранней диагностики степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой.

Задача предлагаемого изобретения - раннее выявление интоксикации организма у больного.

Поставленная задача решается за счет того, что в способе, включающем исследование крови, определяют активность альдегиддегидрогеназы и по разнице активности фермента при ожоге по сравнению с нормой судят о степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой: при уменьшении активности фермента от 3 до 15% определяют первую степень тяжести, от 15 до 30% - вторую степень тяжести, от 30 до 50% - третью степень тяжести и от 50 до 70% определяют четвертую степень тяжести синдрома эндогенной интоксикации.

Способ оценки степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой осуществляют следующим образом: в течение первых шести часов после травмы у больного забирают кровь из вены (0,1 мл) в пробирку, содержащую 3,9 мл дистиллированной воды, получая гемолизат крови. Затем в спектрофотометрическую кювету помещают 2,8 мл 0,1 М глицин-щелочного буфера (pH 10), 0,05 мл 18 мМ ацетальдегида, 0,1 мл 0,8 мМ окисленного никотинамидадениндинуклеотида (НАД) и добавляют в смесь 0,05 мл гемолизата крови. Содержимое кюветы (3 мл) быстро перемешивают, измеряют величину его оптической плотности при 340 нм с интервалом 15 с в течение 1 минуты и определяют активность фермента - альдегиддегидрогеназы (А, нмоль НАДН/мин) по формуле:

где

ΔЕ₃₄₀ - величина оптической плотности, измеренной при 340 нм и рассчитанной следующим образом: ΔЕ₃₄₀=(ΔE₁-ΔЕ₂/2)+ΔЕ₂

ΔE₁=Е₃₀-Е₀; ΔЕ₂=Е₆₀-Е₀;

3 - объем пробы в кювете в мл;

10⁹ - коэффициент пересчета моль в нмоль;

6,22×10⁶ - коэффициент молярной экстинкции для восстановленного никотинамидадениндинуклеотида (НАДН);

t - время, в течение которого измеряют активность альдегиддегидрогеназы в мин.

Затем вычисляют процент активности альдегиддегидрогеназы при ожоге от общей активности альдегиддегидрогеназы в норме математическим способом по правилу "креста". Норма представлена кровью здоровых людей, которая составляет 7,04 нмоль НАДН/мин и принимается за 100%. По разнице процентов между активностью фермента - альдегиддегидрогеназы при ожоге по сравнению с нормой судят о степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой: при снижении активности альдегиддегидрогеназы на 3-15% по сравнению с нормой диагностируют I степень СЭИ; при снижении активности альдегиддегидрогеназы на 15-30% диагностируют II степень СЭИ; при снижении на 30-50% - определяют III степень СЭИ; при снижении активности фермента на 50-70% определяют IV степень синдрома эндогенной интоксикации.

Результаты исследования активности альдегиддегидрогеназы (нмоль НАДН/мин) в гемолизате крови 46 ожоговых больных представлены в таблице 1.

Таблица 1
Активность альдегиддегидрогеназы (нмоль НАДН/мин) в гемолизате крови в норме и при ожоге № Норма I % от нормы II % от нормы III % от нормы IV % от нормы 1 6,85 6,83 97% 5,70 81% 4,58 65% 3,17 45% 2 7,14 6,34 90% 4,93 70% 4,72 67% 2,39 34% 3 7,12 6,41 91% 5,42 77% 3,94 56% 2,60 37% 4 6,90 6,55 93% 5,21 74% 4,08 58% 2,75 39% 5 6,82 6,76 96% 5,14 73% 3,73 53% 3,10 44% 6 6,99 6,27 89% 5,50 78% 3,80 54% 3,38 48% 7 7,17     5,28 75% 4,22 60%     8 6,63     4,99 71% 4,29 61%     9 7,46     5,07 72% 4,36 62%     10 7,35     5,21 74% 3,66 52%     11 7,01     5,28 75% 3,80 54%     12 7,08     5,07 72% 4,01 57%     13 7,07     5,35 76% 4,15 59%     14       5,56 79% 3,73 53%     15       5,63 80% 3,87 55%     16       4,99 71% 3,59 51%     17       5,63 80% 3,52 50%     M±m 7,04±0,06 6,53±0,09   5,29±0,06   4,00±0,08   2,90±0,15   Примечания: I - активность альдегиддегидрогеназы при I степени СЭИ у больного с термической травмой (6 больных); II - активность альдегиддегидрогеназы при II степени СЭИ (17 больных); III - активность фермента при III степени СЭИ (17 больных); IV - активность фермента при IV степени СЭИ (6 больных).

Клинический пример №1.

Будилов М.П., 25 лет, № истории болезни 200473, получил ожог пламенем на площади 45% поверхности тела. Спустя несколько часов после травмы взяли 0,1 мл крови, приготовили гемолизат, 0,05 мл которого поместили в спектрофотометрическую кювету и измерили величину оптической плотности при длине волны 340 нм (Е₃₄₀) в течение 1 минуты с интервалом 15 секунд:

Время 0 15 с 30 с 45 с 1 мин Е₃₄₀ 0,100 0,103 0,105 0,106 0,109

Рассчитали величину оптической плотности при 340 нм за мин по формуле: ΔЕ₃₄₀=(ΔE₁-ΔЕ₂/2)+ΔЕ₂, где ΔE₁ - величина оптической плотности, измеренная за 30 с, ΔЕ₂ - величина оптической плотности, измеренная за 1 мин. Таким образом, ΔЕ₃₄₀=(0,005-0,0045)+0,009=0,0095.

После этого рассчитали активность фермента - альдегиддегидрогеназы - по формуле:

, где

ΔЕ₃₄₀ - величина оптической плотности, измеренной при 340 нм за мин;

3 - объем пробы в кювете;

10⁹ - коэффициент пересчета моль в нмоль;

6,22×10⁶ - коэффициент молярной экстинкции для восстановленного никотинамидадениндинуклеотида;

t - время, в течение которого измеряют активность фермента в мин.

Таким образом,

Затем определили по правилу "креста", какой процент от общей активности здоровых людей составила активность альдегиддегидрогеназы крови данного больного. Норма составляет 7,04 нмоль/мин, которую принимают за 100%:

7,04 - 100%

4,58 - х%

х=65%

Затем вычислили разницу между активностью фермента при ожоге и нормой: 100%-65%=35%.

Активность альдегиддегидрогеназы крови у Будилова М.П. снижена на 35% по сравнению с нормой, что свидетельствует о развитии у него III степени синдрома эндогенной интоксикации.

Клинический пример №2.

Соколов А.П., 35 лет, № истории болезни 201059, получил термический ожог на площади 20% поверхности тела. Сразу после поступления в ННИИТО взяли 0,1 мл крови, приготовили гемолизат, 0,05 мл которого поместили в спектрофотометрическую кювету, и измерили величину оптической плотности при длине волны 340 нм (Е₃₄₀) в течение 1 минуты с интервалом 15 секунд:

Время 0 15 с 30 с 45 с 1 мин Е₃₄₀ 0,100 0,103 0,104 0,105 0,106

Рассчитали величину оптической плотности при 340 нм за мин по формуле: ΔЕ₃₄₀=(ΔE₁-ΔЕ₂/2)+ΔЕ₂, где ΔE₁ - величина оптической плотности, измеренная за 30 с, ΔЕ₂ - величина оптической плотности, измеренная за 1 мин. Таким образом, ΔЕ₃₄₀=(0,004-0,003)+0,006=0,007

После этого рассчитали активность фермента - альдегиддегидрогеназы - по формуле:

, где

ΔЕ₃₄₀ - величина оптической плотности, измеренной при 340 нм за мин;

3 - объем пробы в кювете;

10⁹ - коэффициент пересчета моль в нмоль;

6,22×10⁶ - коэффициент молярной экстинкции для восстановленного никотинамидадениндинуклеотида;

t - время, в течение которого измеряют активность фермента в мин.

Таким образом,

Затем определили по правилу "креста", какой процент от общей активности здоровых людей составила активность альдегиддегидрогеназы крови данного больного. Норма составляет 7,04 нмоль/мин, которую принимают за 100%:

7,04 - 100%,

3,38 - х%,

х=48%.

Затем вычислили разницу между активностью фермента при ожоге и нормой: 100%-48%=52%.

Активность альдегиддегидрогеназы крови у Соколова А.П. снижена на 52% по сравнению с нормой, что свидетельствует о развитии у него IV степени синдрома эндогенной интоксикации.

Способ оценки степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой простой и быстрый в исполнении, не требует дорогостоящего оборудования и большого количества биологического материала.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской диагностике. Предложен способ оценки степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больных с термической травмой. В образце крови определяют активность альдегиддегидрогеназы и по отклонению активности фермента при ожоге по сравнению с нормой судят о степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного: при уменьшении активности фермента от 3 до 15% определяют первую степень синдрома эндогенной интоксикации, от 15 до 30% - вторую степень синдрома эндогенной интоксикации, от 30 до 50% - третью степень синдрома эндогенной интоксикации и от 50 до 70% определяют четвертую степень синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой. Способ позволяет в короткие сроки выявить интоксикацию организма у больных с термической травмой. 1 табл.

Способ оценки степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой путем исследования крови, отличающийся тем, что определяют активность альдегиддегидрогеназы и по разнице активности фермента при ожоге по сравнению с нормой судят о степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного: при уменьшении активности фермента от 3 до 15% определяют первую степень синдрома эндогенной интоксикации, от 15 до 30% - вторую степень синдрома эндогенной интоксикации, от 30 до 50% - третью степень синдрома эндогенной интоксикации и от 50 до 70% определяют четвертую степень синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой.