СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ БАКТЕРИАЛЬНОГО СЕПСИСА У ДЕТЕЙ Российский патент 1995 года по МПК G01N33/52 

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано в хирургической и терапевтической практике при диагностике бактериального сепсиса.

Известен способ диагностики сепсиса путем взятия крови, культивирования ее в жидкой питательной среде, затем пересева на плотную питательную среду, выделения чистой культуры и последующей идентификации культуры. Однако этот метод длительный, занимает около надели, что не позволяет своевременно поставить диагноз, требует приготовления питательных сред. Кроме того, посев исследуемого материала не всегда гарантирует положительный результат, так как в 18-40% случаев получают "стерильный" посев.

Известен также способ диагностики сепсиса у детей раннего возраста путем определения в нейтрофилах содержания основных белков с последующим расчетом значения гистохимического показателя этих белков. Однако, этот метод сложен для выполнения из-за трудоемкости процессов обработки мазка и подсчета нейтрофилов. Метод не всегда точен из-за возможного субъективного разделения нейтрофилов на 4 степени содержания основных белков.

Целью изобретения является повышение точности и упрощение способа.

Сущность изобретения заключается в том, что у детей берут кровь из вены, инкубируют в изотоническом растворе хлорида натрия при 37^оС. Через 4 ч (1 проба) и далее еще через 14 ч инкубации (общее время инкубации 18 ч) - (2 проба) смесь центрифугируют и в надосадочной жидкости, определяют содержание ионов калия, затем рассчитывают соотношение показателя во второй пробе к первой, и по степени нарастания содержания калия определяют наличие бактериального сепсиса.

Изобретение в отличие от аналога основано на выявлении косвенных признаков размножения бактерий - выделении ионов калия из клеток крови, лизирующихся при размножении бактерий. Это позволяет поставить диагноз уже на следующие сутки и своевременно начать лечение.

Способ осуществляют следующим образом.

В пробирку с 3 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия помещают 1 мл крови из вены. Использование физиологического раствора позволяет сохранить клетки крови, так как он изотоничен, уменьшить бактерицидные свойства крови. Кроме того, физиологический раствор, в отличие от питательных сред, не содержит калия. Пробирку закрывают стерильной резиновой пробкой и помещают в термостат при 37^оС. Через 4 ч (1 проба) инкубации и 14 ч (2 проба) с общей суммой 18 ч пробирку встряхивают, центрифугируют при 1000 об/ми в течение 10 мин, из надосадка стерильной пипеткой забирают 0,5 мл жидкости и смешивают с 2 мл дистиллированной воды. Пpобирку со смесью вновь помещают в термостат на 14 ч. Затем повторно встряхивают, центрифугируют, 0,5 мл надосадка смешивают с 2 мл дистиллированной воды (2 проба). После этого в обеих пробах определяют содержание ионов калия методом пламенной фотометрии в соответствии с инструкцией к прибору. При возрастании показаний фотометра во второй пробе по отношению к первой в 4 и более раз констатируют наличие бактериального сепсиса. Другие интервалы времени недостаточно информативны. Например, соотношение 1 пробы к неинкубированной пробе не выявляет различий в группах. Это связано, по-видимому с тем, что в течение первых 4-х часов идет разрушение клеток, связанное со степенью их физиологической устойчивости и лишь позже, когда размножаются микробы, они вызывают разрушение клеток. При соотношении показаний 2 пробы к неинкубированной пробе различия между больными сепсисом и гнойно-воспалительными заболеваниями недостоверны.

Способ испытан при диагностике сепсиса у детей. Диагноз сепсиса был верифицирован последующим обнаружением бактерий в крови классическим методом посева на питательную среду. В качестве контроля обследована группа детей с острыми гнойно-воспалительными процессами (флегмоны, абсцессы, остеомиелиты) и группа здоровых детей. При испытании данного способа были получены следующие результаты (см.таблицу).

Как видно из представленных данных у больных сепсисом уровень показателя оказался значительно выше по сравнению с больными гнойно-воспалительными процессами (p < 0,001).

П р и м е р 1. Больная Б., 10 дней. Поступила в детскую больницу N 5 г. Фрунзе с диагнозом: "Бактериальный сепсис". Из вены больной было получено 1 мл крови и помещено в пробирку с 3 мл изотонического раствора хлорида натрия. Пробирку поместили в термостат при 37^оС. Через 4 и 18 ч инкубации пробирку встряхнули, отцентрифугировали 10 мин при 1000 об/мин и из надосадочной жидкости получили 0,5 мл, смешали с 2 мл дистиллированной воды и определили содержание калия на пламенном фотометре.

Показания фотометрии: 1 проба - 52; 2 проба - 290. При делении 290 на 52 получили величину 5,58 и диагностировали сепсис. Этот диагноз позже был подтвержден высевом эпидермального стафилококка и синегнойной палочки из крови.

П р и м е р 2. Больной Б., 14 лет. Поступил в детскую больницу N 3 г. Фрунзе с диагнозом: "Острый гематогенный остеомиелит". У больного аналогичным образом была получена кровь и инкубирована в термостате. При определении содержания ионов калия получены следующие показания фотометрии: 1 проба - 29; 2 проба - 83,5. При делении получена цифра 2,88, что не свидетельствует о наличии сепсиса. Из крови, взятой на подъеме температуры, был высеян эпидермальный стафилококк.

У всех больных сепсисом были получены положительные результаты (чувствительность способа - 100% ). Ложно-положительные результаты были обнаружены у 2 больных с локальными процессами (специфичность способа - 81% ). Диагностическая эффективность - 86%. У всех здоровых лиц результаты были значительно ниже диагностических (p < 0,05).

Таким образом, предлагаемый способ прост в выполнении, не требует сложных расчетов, обладает высокой диагностической эффективностью, может выполняться в любой лаборатории.

Использование: медицина, микробиология, хирургия. Цель: повышение точности и упрощение способа. Сущность предложения: у детей берут пробы венозной крови, добавляют к ней изотанический раствор хлористого натрия в соотношении 1 : 3, смесь помещают в две пробирки с последующей инкубацией смеси при 37°С в первой пробирке в течение 4 ч, а второй - в течение 18 ч, затем пробы центрифугируют, и в надосадочной жидкости, предварительно разбавленной дистиллированной водой в соотношении 1 : 4, определяют содержание ионов калия, рассчитывают соотношение этого показателя во второй пробирке к первой, и при его значении 4 и более диагностируют сепсис. Положительный эффект: использования способа позволяет установить диагноз на следующие сутки после проведения анализа. 1 табл.

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ БАКТЕРИАЛЬНОГО СЕПСИСА У ДЕТЕЙ, включающий исследование крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и упрощения способа, у детей берут пробу венозной крови, добавляют к ней изотопический раствор хлористого натрия в соотношении 1:3, смесь помещают в две пробирки с последующей инкубацией при 37^oС смеси в первой пробирке в течение 4 ч, а во второй - в течение 18 ч, затем пробы центрифугируют и в надосадочной жидкости, предварительно разбавленной дистиллированной водой в соотношении 1:4, определяют содержание ионов калия, рассчитывают отношение этого показателя во второй пробе к первой и при его значении 4 и более диагностируют сепсис.