ЛИПОСОМАЛЬНАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ Российский патент 2000 года по МПК A61K31/20 A61K31/4422 A61K31/685 A61K9/127 A61P43/00 

Изобретение относится к липосомальным фармацевтическим композициям, в частности к липосомальной фармацевтической композиции для внутривенного введения.

Известна липосомальная фармацевтическая композиция для внутривенного введения, содержащая липофильное труднорастворимое активное вещество в виде липосом, в частности производное дигидропиридина, фосфолипиды, дистиллированную воду и целевые добавки, выбранные из группы, содержащей антифриз, антиокислители и регуляторы значения pH, причем активное вещество и фосфолипиды взяты в массовом соотношении 1:(20 - 100), а средний диаметр липосом составляет 40 - 200 нм (см. европейскую заявку N 0 560138 A1, МКИ: A 61 K 9/127, 1993).

Недостаток известной липосомальной фармацевтической композиции заключается в том, что ее химико-физическая стабильность не всегда является полностью удовлетворительной.

Задачей изобретения является создание липосомальной фармацевтической композиции для внутривенного введения с лучшей химико-физической стабильностью.

Поставленная задача достигается предлагаемой липосомальной фармацевтической композицией для внутривенного введения, содержащей липофильное труднорастворимое активное вещество в виде липосом, по меньшей мере один фосфолипид, дистиллированную воду и целевые добавки, за счет того, что она дополнительно содержит по меньшей мере одну краткоцепную жирную кислоту формулы (I)
H₃C-(CH₂)_n-COOH (I)
где n означает число 4 - 8,
или ее соль, при следующем количественном соотношении компонентов, вес. ч. на 100 вес. ч. дистиллированной воды:
Липофильное, труднорастворимое активное вещество - 0,001 - 2,0
Фосфолипид - 0,02-40
Целевые добавки - 0,0001-100
причем весовое соотношение активного вещества и фосфолипида составляет 1: (20 - 200), а весовое соотношение краткоцепной жирной кислоты или ее соли и фосфолипида составляет 1:(2-60).

Весовое соотношение активного вещества и фосфолипида предпочтительно составляет 1: (30 - 80), в частности 1:(30 - 50). Весовое соотношение краткоцепной жирной кислоты или ее соли и фосфолипида предпочтительно составляет 1:(4 - 50). При этом концентрация краткоцепной жирной кислоты в предлагаемой композиции составляет 0,3-10 мг/мл готовой к даче композиции.

В качестве краткоцепной жирной кислоты предлагаемая композиция предпочтительно содержит каприловую кислоту или ее соль, в частности ее натриевую или калиевую соль.

В качестве липофильного труднорастворимого активного вещества предлагаемая композиция предпочтительно содержит производные дигидропиридина общей формулы (II)

где R - метил, R¹ - метоксиэтил, R² - группа -COOC₃H₇-изо и R³ - фенил, замещенный нитрогруппой в мета-положении, или
R - амино, R¹ - низший алкил, R² - циано и R³ - группа формулы

где R⁴ означает водород, галоген, циано, дифторметил, низший алкил или алкоксил,
или (R)-этил-(α-метилбензил)-имидазолкарбоксилат или сложный эфир (2aR, 4S, 4aS, 6R, 9S, 11S, 12S, 12aR, 12bS) - 1,2a, 3,4, 4a, 6, 9, 10, 11, 12, 12a, 12b-додекагидро-4, 6, 9, 11, 12, 12b- гексагидрокси - 4a, 8, 13, 13-тетраметил-7, 11-метано-5Н- циклодека[3,4] ,бенз[1,2-b]оксет-5-он-6, 12b-диацеталь-9-[(2R, 3S)- N-бензоил-3-фенил-изосерина] . Согласно изобретению можно использовать обычные фосфолипиды. Предпочтительно используют фосфолипиды, которые представляют собой незаряженные снаружи фосфоглицериды, которые могут являться внутримолекулярными амфотерными ионами и соответствуют общей формуле (III)

где R² и R³ одинаковы или различны и означают насыщенные или ненасыщенные ацильные группы с 8-24 атомами углерода, которые могут быть разветвлены и/или замещены.

Кроме фосфолипидов формулы (II) можно также применять в малом количестве фосфолипиды другого типа, такие, как, например, фосфатидилэтаноламины, фосфатидилинозитолы, сфингомиелины, фосфатидилглицерины и/или фосфатидные кислоты. Используемые фосфолипиды можно получать путем очистки веществ из естественных источников, как, например, соевого лецитина или сырого яичного лецитина. Предпочтительно используют очищенные яичные лецитины.

Целевыми добавками являются, например, антифризы, антиокислители, регулирующие значение pH вещества, и осмотически активные агенты. В качестве антифриза пригодны, например, полиспирты, такие, как, например, глицерин, моносахариды, как, например, глюкоза, дисахариды, как, например, сахароза, лактоза или трехолоза, протеины или аминокислоты. При этом соотношение антифриза и фосфолипида составляет (0,8-4):1, предпочтительно (1,2-2,5):1.

Пригодными осмотически активными агентами, которые можно добавлять к реконституируемому средству для достижения изотонического давления, являются, например, глицерин, маннит и глюкоза, в частности глицерин.

Пригодными антиокислителями являются, например, бутилоксианизол, бутилокситолуол, альфа-токоферол и их соли, аскорбиновая кислота и ее соли и сложные эфиры, предпочтительно аскорбиновая кислота и их соли. Регулирующими значение pH веществами являются буферы, кислоты или основания, в частности аскорбиновая кислота и гидроокись натрия.

Предлагаемую липосомальную композицию можно получать обычными приемами, например, путем гомогенизации под высоким давлением, экструзией через поры, диализа, разбавления и ультразвукового диспергирования, предпочтительно путем гомогенизации под высоким давлением, как, например, микрофлюидизации.

Предлагаемую композицию предпочтительно получают так, что 1 вес. ч. липофильного активного вещества и 20-200 вес. ч. фосфолипидов предварительно диспергируют в воде с помощью мешалки при температуре 10-90^oC, предпочтительно 50-80^oC, в случае необходимости в присутствии антиокислителя и в случае необходимости в атмосфере азота, и затем гомогенизируют с помощью сопел высокого давления при температурах 20-80^oC и давлении 400 - 1500 бар до средней величины частиц 35-200 нм, в получаемом продукте гомогенизации растворяют антифриз и краткоцепную жирную кислоту вышеприведенной общей формулы (I) или ее соль в соотношении, равном 1: (2-60), и получаемую таким образом дисперсию подвергают сушке замораживанием.

Согласно варианту вышеописанного способа активное вещество и/или антифриз можно также добавлять уже во время предварительного диспергирования или гомогенизации с помощью сопел высокого давления. Кроме того, краткоцепные жирные кислоты можно также добавлять к реконституируемому средству, так что они входят в непосредственный контакт с липосомами только во время процесса реконституции, то есть приведения средства в готовую к применению форму. В обоих случаях предотвращается флокуляция готовых к применению липосом в течение более 24 часов, и одновременно сохраняется средний диаметр частиц липосом и обеспечивается химическая стабильность активного вещества.

При превышении концентрации жирных кислот, равной 10 мг/мл, имеет место дестабилизация липосом и выделение активного вещества из липосом, как это показывает сравнительный пример Б. Без добавки краткоцепных жирных кислот дисперсия коагулирует в течение 24 часов, о чем свидетельствует сравнительный пример В.

Нижеследующие примеры иллюстрируют получение предлагаемой композиции и ее преимущество перед известной. Все данные в % являются мас.%.

Пример 1.

5,5997 кг дистиллированной воды обрабатывают в течение 30 минут азотом, после чего в воде растворяют 16,2 г аскорбата натрия и затем добавляют 580,5 г очищенного яичного лецитина (содержание фосфатидилхолина > 94%). Получаемую смесь диспергируют с помощью быстровращающейся мешалки при температуре 65^oC в течение 30 минут. После пополнения испарившейся воды получаемую дисперсию фильтруют через мембранный фильтр, имеющий поры величиной 8 мкм, и подают в гомогенизатор высокого давления.

Дисперсию гомогенизируют 5 раз при температуре 65^oC и давлении 800 бар. Затем добавляют 145 г сложного изопропилового эфира 2-амино- 1,4-дигидро-5-циано-6-метил-4-(3-фенилхинолин-5-ил)пиридин-3-карбоновой кислоты, который равномерно распределяют в дисперсии при низком давлении (25 бар). Затем гомогенизируют 20 раз при температуре 65^oC и давлении 800 бар. Получаемые липосомы охлаждают до комнатной температуры.

На 1 г получаемого продукта гомогенизации добавляют и растворяют 168,2 мг сахарозы и 0,11 мг аскорбиновой кислоты. Дисперсию добавляют до значения pH 6,5 добавлением 0,1 н. раствора гидроокиси натрия и стерильно фильтруют на мембранном фильтре (величиной пор 0,2 мкм). По 2,5 мл получаемого фильтра заполняют в состоящие из коричневого стекла бутылки и подвергают сушке замораживанием.

Средняя величина липосом перед сушкой замораживанием составляет 48 нм. После добавления 10 мл водного раствора, содержащего 0,0495% каприлата натрия и 1,51% глицерина, средняя величина липосом составляет 57 нм. После 24-часового хранения готовой к применению дисперсии средняя величина липосом составляет 57 нм. За указанный срок хранения флокуляции и/или образования осадка не наблюдается.

Согласно данным гельхроматографии активное вещество включено на 100% в липосомы.

Пример 2.

В 638,33 г дистиллированной воды, которую предварительно обрабатывают азотом в течение 10 минут, растворяют 1,8561 г аскорбата натрия. К получаемому раствору добавляют 66,9 г очищенного яичного порошка (содержание фосфатидилхолина > 94%). Смесь диспергируют с помощью быстровращающейся мешалки при температуре 60^oC в течение 30 минут. Затем пополняют обработанной азотом водой до 706,2 г и добавляют 1,65 г активного вещества согласно примеру 1. Для равномерного распределения активного вещества еще раз диспергируют в течение 3 минут. Получаемую дисперсию переводят в гомогенизатор высокого давления и гомогенизируют 25 раз при температуре 60^oC и давлении 800 бар. В получаемой липосомальной дисперсии растворяют 637,19 г сахарозы и значение pH дисперсии доводят до 6,5 добавлением 0,1 н. раствора гидроокиси натрия.

После стерильной фильтрации (мембранный фильтр с порами величиной 0,2 мкм) готовую дисперсию в количествах по 2,64 г заполняют в состоящие из коричневого стекла бутылки и подвергают сушке замораживанием.

После трехмесячного хранения высушенных замораживанием липосом при температуре 40^oC содержание активного вещества составляет 98,5% и в течение 24 часов после добавления 10 мл водного раствора, содержащего 0,0495% каприлата натрия и 1,51% глицерина, флокуляции и/или образования осадка не наблюдается.

Пример 3.

12,53 г аскорбиновой кислоты и 2,85 г гидроокиси натрия растворяют при перемешивании в 4868,18 г воды и затем добавляют 504,8 г очищенного яичного лецитина (содержание фосфатидилхолина > 94%). Получаемую смесь диспергируют в быстровращающемся смесителе. Дисперсию фильтруют на мембранном фильтре, имеющем поры величиной 8 мкм, и получаемый фильтрат 25 раз гомогенизируют в гомогенизаторе высокого давления при давлении 800 бар. В получаемой липосомальной дисперсии растворяют 908,70 г сахарозы и значение pH доводят до 6,5 при растворении 0,6 г аскорбиновой кислоты и соответствующем титрировании 0,1 н. раствором гидроокиси натрия. Для защиты от окисления весь процесс проводят в атмосфере азота. Добавляют 12,6 г (4R)изопропил-2-метоксиэтил-4-(2-хлор-3- циано-фенил)-1,4-дигидро-2,6-диметил-пиридин-3,5-дикарбоксилата и получаемую дисперсию перемешивают в течение 12 часов до полного растворения всего количества активного вещества. После повторной фильтрации дисперсию порциями по 11,88 мл сушат замораживанием в бутылках емкостью 50 мл. Лиофилизированный продукт приводят в готовую к применению форму добавлением водного раствора, содержащего 0,725 г глицерина, 0,02375 г каприлата натрия и 47,184 г дистиллированной воды.

Пример 4.

4,6583 кг дистиллированной воды обрабатывают азотом в течение 10 минут и затем в нее растворяют 5,7 мг аскорбиновой кислоты и 852,8 г глюкозы. Получаемый раствор доводят до значения pH 6,5 путем добавления 66 г 0,5-молярного раствора аргинина. Затем добавляют 9,502 г активного вещества нимодипина и 473,8 г очищенного яичного лецитина (содержание фосфатидилхолина > 80%). Получаемую смесь диспергируют с помощью быстровращающейся мешалки при температуре 75^oC в течение 60 минут в атмосфере азота. Получаемую дисперсию фильтруют (поры величиной 5 мкм) и затем гомогенизируют в гомогенизаторе высокого давления при температуре 75^oC и давлении 800 бар, после чего охлаждают до температуры ниже 30^oC. Получаемую дисперсию фильтруют стерильно на мембранном фильтре, имеющем поры величиной 0,2 мкм, и ее заполняют в количествах по 15,30 мл в состоящие из коричневого стекла бутылки и подвергают сушке замораживанием. Липосомы приводят в готовую к применению форму добавлением водного раствора, содержащего 0,0495% каприлата натрия и 1,513% глицерина. По меньшей мере 24 часа после добавления указанного раствора в дисперсии не наблюдается ни образования осадка, ни флокуляции.

Пример 5.

171,6 г дистиллированной воды обрабатывают азотом в течение 20 минут и затем добавляют 200 мг аскорбата натрия и 10 г очищенного яичного лецитина (содержание фосфатидилхолина > 94%) и 200 мг активного вещества этомидата [(R)-этил-( α-метилбензил)-5- имидазолкарбоксилат]. Получаемую смесь диспергируют с помощью высокоскоростной мешалки в течение 20 минут при температуре 60^oC в атмосфере азота. После пополнения испарившейся воды получаемую дисперсию подают в гомогенизатор высокого давления и гомогенизируют 25 раз при температуре 60^oC и давлении 800 бар. Затем на 1 г продукта гомогенизации при растворении добавляют 98,9 мг сахарозы и 1,8 мг каприлата натрия, после чего значение pH дисперсии доводят до 6,5 добавлением 1 н. натрового щелока. После стерильной фильтрации (мембранный фильтр с порами величиной 0,2 мкм) дисперсию в количестве по 20,0 г заполняют в состоящие из коричневого стекла бутылки и подвергают сушке замораживанием.

Средняя величина липосом до сушки замораживанием составляет 56 нм. После приведения в готовую к применению форму добавлением 17,16 г (5%-ного) раствора глюкозы средняя величина липосом составляет 61 нм. В течение по меньшей мере 4 часов после добавления указанного раствора не наблюдается ни флокуляции, ни образования осадка.

Пример 6.

1,4 г аскорбата натрия растворяют в 425 г свободной от кислорода дистиллированной воды. Затем добавляют 50 г очищенного яичного порошка (содержание фосфатидилхолина > 80%) и 1,5 г паклитаксела (смесь алкалоидов из игл и ягод тисы) и получаемую смесь диспергируют с помощью быстровращающейся мешалки при температуре 65^oC в течение 30 минут. Получаемую таким образом дисперсию гомогенизируют 25 раз в гомогенизаторе высокого давления при температуре 60^oC и давлении 725 бар.

К 382,32 г этой гомогенизированной дисперсии добавляют 72 г сахарозы и 80 мг аскорбиновой кислоты, значение pH доводят до 6,5 путем добавления 0,1 н. раствора гидроокиси натрия и получаемую дисперсию пополняют водой до 480 г. Затем дисперсию фильтруют и порциями по 12,32 г (соответствует 30 мг паклитаксела +2,67% перезаполнения) наполняют в бутылки емкостью 50 мл и подвергают сушке замораживанием. Высушенный замораживанием продукт приводят в готовую к применению форму добавлением 29,7 г раствора, содержащего 0,725 г глицерина, 0,02375 г каприлата натрия и 47,187 г дистиллированной воды. 30 мл получаемой при этом дисперсии содержат 30 мг паклитаксела.

Сравнительные примеры
Сравнительный пример А (согласно прототипу)
В 253 г дистиллированной воды, которую предварительно обрабатывают азотом, растворяют 49,1 г глюкозы и 0,345 г аскорбиновой кислоты, после чего значение pH доводят до 6,5 добавлением 3,9 г 0,5 М раствора аргинина. К получаемому раствору добавляют 27,25 г очищенного яичного лецитина (содержание фосфатидилхолина > 80%), 0,345 г активного вещества согласно примеру 1 и обработанную азотом воду до общей массы 345 г. Получаемую смесь диспергируют с помощью быстровращающейся мешалки при температуре 75^oC в течение 30 минут. После фильтрации (мембранный фильтр величиной 5 мкм) дисперсию проводят в гомогенизатор высокого давления и гомогенизируют 25 раз при температуре 75^oC и давлении 800 бар.

Готовую липосомальную дисперсию подвергают стерильной фильтрации (мембранный фильтр с порами величиной 0,2 мкм), в количестве по 2,1 мл наполняют в состоящие из коричневого стекла бутылки и подвергают сушке замораживанием.

После 2-недельного хранения высушенных замораживанием липосом при температуре 40^oC содержание активного вещества составляет 89,7%.

Средний диаметр частиц липосом составляет 45 нм после гомогенизации под высоким давлением. После приведения в готовую к применению форму высушенных замораживанием липосом добавлением 9,5 мл дистиллированной воды средний диаметр липосом составляет 47 нм. В течение 24 часов в получаемой липосомальной дисперсии наблюдаются флокуляция и образование осадка.

Сравнительный пример Б (концентрация жирной кислоты > 10 мг/мл)
Получаемые аналогично примеру 1 липосомы приводят в готовую к применению форму добавлением 10 мл водного раствора, содержащего 5% каприлата натрия и 1,51% глицерина. Липосомы дестабилизируются. В липосомах имеется лишь 5,3% активного вещества.

Сравнительный пример В5 (без жирной кислоты)
Получаемые аналогично примеру 1 липосомы приводят в готовую к применению форму добавлением 10 мл водного раствора, содержащего 1,51% глицерина. При этом в дисперсии наблюдается флокуляция в течение 24 часов. Образуется осадок.

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, касается липосомальной фармацевтической композиции для внутривенного введения, содержащей липофильное труднорастворимое активное вещество в виде липосом, по меньшей мере один фосфолипид, дистиллированную воду и целевые добавки, и дополнительно содержит по меньшей мере одну краткоцепную жирную кислоту формулы: Н₃С-(СН₂)_n-СOОН, где n = 4-8, или ее соль, при определенном соотношении компонентов. Липосомальная фармацевтическая композиция для внутривенного введения обладает лучшей химико-физической стабильностью. 5 з.п.ф-лы.

1. Липосомальная фармацевтическая композиция для внутривенного введения, содержащая липофильное труднорастворимое активное вещество в виде липосом, по меньшей мере один фосфолипид, дистиллированную воду и целевые добавки, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит по меньшей мере одну краткоцепную жирную кислоту формулы I
H₃C - (CH₂)_n - COOH
где n = 4 - 8,
или ее соль, при следующем количественном соотношении компонентов, вес. ч. на 100 вес.ч. дистиллированной воды:
Липофильное, труднорастворимое активное вещество - 0,001 - 2,0
Фосфолипид - 0,02 - 40
Целевые добавки - 0,0001 - 100
причем весовое соотношение активного вещества и фосфолипида составляет 1 : (20 - 200), а весовое соотношение краткоцепной жирной кислоты или ее соли и фосфолипида составляет 1 : (2 - 60). 2. Липосомальная фармацевтическая композиция для внутреннего введения по п. 1, отличающаяся тем, что она в качестве активного вещества содержит производное дигидропиридина общей формулы II

где R - метил;
R¹ - метоксиэтил;
R² - группа - СООС₃Н₇-изо;
R³ - фенил, замещенный нитрогруппой в мета-положении, или хлором в положении 2 и цианогруппой в положении 3,
или R-амино, R¹ - низший алкил, R² - циано и R³ - группа формулы

где R⁴ означает водород, галоген, циано, дифторметил, низший алкил или алкоксил. 3. Липосомальная фармацевтическая композиция для внутривенного введения по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества содержит (R)-этил-α -метилбензил)-имидазолкарбоксилат. 4. Липосомальная фармацевтическая композиция для внутривенного введения по п.1, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества содержит сложный эфир (2aR, 4S, 4aS, 6R, 9S, 11S, 12S, 12aR, 12bS) - 1,2a, 3,4, 4a, 6,9,10,11,12,12a, 12b-додекагидро-4,6,9,11,12,12b-гексагидрокси-4а, 8, 13, 13-тетраметил-7, 11-метано-5Н-циклодека [3,4] , бенз[1,2-b] оксет-5-он-6, 12b-диацеталь-9-[(2R,3S)-N-бензоил-3-фенил-изосерина]. 5. Липосомальная фармацевтическая композиция для внутривенного введения по п. 1, отличающаяся тем, что она в качестве целевой добавки содержит по меньшей мере один антифриз в количестве 0,8 - 4,0 на 1 вес.ч. фосфолипида. 6. Липосомальная фармацевтическая композиция для внутривенного введения по п. 1, отличающаяся тем, что она в качестве целевой добавки содержит антиокислитель в количестве 0,0001 - 2,0 на 100 вес.ч. дистиллированной воды.